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寡核苷酸DNA Microarray用于HLA DRB1基因分型的研究 被引量:17
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作者 陈君男 李瑶 +5 位作者 李亚莉 秦红友 李荣宇 曹慧敏 谢毅 毛裕民 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第10期887-894,共8页
对寡核苷酸DNAMicroarray用于HLADRB1基因分型的技术进行研究。常规的酚 /氯仿法提取标准血样基因组DNA ,在DRB1的exon 2区域设计一对引物 ,经PCR扩增基因组相应区段并用Cy5 dCTP进行标记。设计寡核苷酸分型探针 ,将探针固定在APS PDC... 对寡核苷酸DNAMicroarray用于HLADRB1基因分型的技术进行研究。常规的酚 /氯仿法提取标准血样基因组DNA ,在DRB1的exon 2区域设计一对引物 ,经PCR扩增基因组相应区段并用Cy5 dCTP进行标记。设计寡核苷酸分型探针 ,将探针固定在APS PDC法制作的DNAMicroarray上 ,用标记的PCR产物与之杂交 ,扫描仪对杂交结果进行扫描 ,Imagene软件对杂交图象进行分析。共检测了 33例标准血样的HLADRB1基因型。检测结果证明研制的DNAMicroarray准确、灵敏。DNAMicroarray技术可以有效地检测DRB1等位基因 ,对比常规的PCR SSP和PCR SSO方法、分型基因芯片方法更为直观 。 展开更多
关键词 HLA DRB1 等位基因 基因分型 寡核苷酸dna微阵列 PCR-SSP PCR-SSO 基因分型
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寡核苷酸DNA芯片用于ABO血型基因分型的研究 被引量:5
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作者 李成涛 李瑶 +3 位作者 张红发 康敏华 谢毅 毛裕民 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期139-141,共3页
目的 对寡核苷酸芯片用于ABO血型基因分型的技术进行研究。方法 常规的酚 /氯仿法提取标准血样基因组DNA ,在ABO座位的外显子 6和 7区域各设计一对引物 ,经PCR扩增基因组相应区段并用Cy5 dCTP进行标记。设计寡核苷酸分型探针 ,将探... 目的 对寡核苷酸芯片用于ABO血型基因分型的技术进行研究。方法 常规的酚 /氯仿法提取标准血样基因组DNA ,在ABO座位的外显子 6和 7区域各设计一对引物 ,经PCR扩增基因组相应区段并用Cy5 dCTP进行标记。设计寡核苷酸分型探针 ,将探针固定在APS PDC法制作的DNA芯片上 ,用标记的PCR产物与之杂交 ,扫描仪对杂交结果进行扫描 ,Imagene软件对杂交图象进行分析。结果 本实验共检测了 10 0份已知血型血样的ABO基因型 ,结果证明本实验研制的ABO基因分型芯片快速、准确、灵敏。结论 寡核苷酸DNA芯片用于ABO的基因分型与其他方法相比更具有灵敏、直观、高通量和集成化的优势。 展开更多
关键词 ABO 血型 基因分型 寡核苷酸dna芯片
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寡核苷酸DNA微阵列用于人类白细胞抗原-DR53组基因分型的研究 被引量:1
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作者 肖家全 李成涛 +2 位作者 谭建明 康敏华 李瑶 《中华外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期225-227,共3页
目的 建立用于人类白细胞抗原 (HLA) DR5 3组基因分型的寡核苷酸DNA微阵列。方法 根据中国汉族人群HLA DRB等位基因的频率设计特异性的分型探针 ,制作寡核苷酸DNA微阵列。通过组间特异引物扩增基因组DR5 3相应区段的DNA ,扩增中用Cy5... 目的 建立用于人类白细胞抗原 (HLA) DR5 3组基因分型的寡核苷酸DNA微阵列。方法 根据中国汉族人群HLA DRB等位基因的频率设计特异性的分型探针 ,制作寡核苷酸DNA微阵列。通过组间特异引物扩增基因组DR5 3相应区段的DNA ,扩增中用Cy5 dCTP荧光标记 ,扩增标记后的产物与芯片的探针杂交 ,通过杂交产生的荧光信号及分布格局确定样品的基因亚型。分型结果用标准DNA和序列特异寡核苷酸探针杂交验证。 结果 经寡核苷酸DNA微阵列分型 ,111份样本中共检出DR5 3组位点 72个 ,其中DR934个 ,DR42 5个 ,DR713个 ,无一例假阳性或假阴性 ,重复率和准确率均达到 10 0 %。检测总耗时约 5h。 结论 寡核苷酸DNA微阵列用于HLA DR5 3组基因分型具有高分辨率、高特异性和简单快速的特点 ,适合于临床应用。 展开更多
关键词 寡核苷酸dna微阵列 基因分型 等位基因 人类白细胞抗原 HLA-DR53
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修饰的单链DNA寡核苷酸靶向修复低密度脂蛋白受体基因点突变
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作者 徐亚林 苏鑫铭 +3 位作者 张芳林 朱含章 许伟伟 范乐明 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 2007年第7期547-548,共2页
关键词 病理学与病理生理学 低密度脂蛋白受体 基因点突变 单链dna寡核苷酸靶向修复
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嵌合性RNA/DNA寡核苷酸位点特异性修复基因损伤——一种新的单基因病治疗途径
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作者 段山 《国外医学(遗传学分册)》 2002年第5期266-270,共5页
近年来 ,无论是在 RNA或是 DNA水平 ,基因治疗的有关技术方法的研究发展迅速 ,但仍有许多缺陷。最近 ,一种新的用于准确修复基因组 DNA中单个碱基突变或缺失的方法正日趋完善 ,该方法利用同源重组原理 ,使用一段含有 DNA和RNA残基的嵌... 近年来 ,无论是在 RNA或是 DNA水平 ,基因治疗的有关技术方法的研究发展迅速 ,但仍有许多缺陷。最近 ,一种新的用于准确修复基因组 DNA中单个碱基突变或缺失的方法正日趋完善 ,该方法利用同源重组原理 ,使用一段含有 DNA和RNA残基的嵌合寡核苷酸直接修复基因损伤 ,能够在 DNA水平直接转换基因组中的碱基 ,以达到永久性修复遗传性损伤的目的且克服了一些目前存在的缺陷。 展开更多
关键词 嵌合性 RNA/dna寡核苷酸 基因治疗 同源重组 单基因病 治疗
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利用嵌合RNA/DNA寡核苷酸创造除草剂抗性玉米
6
作者 Zhu,T Mettenburg,K 《国外作物育种》 2001年第3期65-65,共1页
关键词 除草剂抗性玉米 培育 嵌合RNA/dna寡核苷酸
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NGAL基因新型TPA反应元件结合蛋白的研究 被引量:1
7
作者 孟令英 缪成贵 +3 位作者 杜则澎 蔡唯佳 许丽艳 李恩民 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第6期661-670,共10页
以往研究发现, 食管癌细胞的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin, NGAL)基因的过表达具有明显的 12-O- 十四烷酰佛波醇 -13- 醋酸酯(12-O-tetradecanoyl phorbol-13-acetate, TPA)诱导性, ... 以往研究发现, 食管癌细胞的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin, NGAL)基因的过表达具有明显的 12-O- 十四烷酰佛波醇 -13- 醋酸酯(12-O-tetradecanoyl phorbol-13-acetate, TPA)诱导性, 在启动子- 152~- 60 区段存在着一种新型的 TPA 反应元件(TPA response element, TRE), 但是该元件的结合蛋白尚未被鉴定出来. 采用寡核苷酸 DNA 亲和层析法(oligonucleotide trapping)从食管癌细胞中分离纯化了 NGAL 基因 TRE 结合蛋白; 经 SDS-PAGE进一步分离, 银染显示目标蛋白带. 人工切取各目标蛋白带进行 MALDI-TOF-MS 分析, 通过 Mascot 软件搜索 NCBI 数据库, 根据蛋白质的功能、细胞定位和分子质量大小等指标确定 8 个核蛋白因子: C19、KIAA1949、TDRD1、RXR β、FAM54A、KLF15、KLF10 和 YY-1. 最后, 利用 RT-PCR 验证了这些核蛋白因子表达的 TPA 反应性, 结果表明 C19、KIAA1949、TDRD1、RXR β和 KLF15 等编码基因的转录表现出了明显的 TPA 反应性, 提示可能是食管癌细胞中应答 TPA刺激, 参与 NGAL 基因过表达的转录激活因子. 展开更多
关键词 NGAL基因 寡核苷酸dna亲和层析 MALDI-TOF-MS TPA反应元件 TPA反应元件结合蛋白 TPA反应性
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二硫键寡核苷酸Microarray用于丙型肝炎病毒检测及HCV1b分型的研究
8
作者 陈君男 李瑶 +3 位作者 李亚莉 康敏华 谢毅 毛裕民 《复旦学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期544-548,共5页
利用二硫键法制作寡核苷酸 DNA Microarray,并将该技术应用到 HCV的检测中,建立了一种快速、灵敏、安全的寡核苷酸 DNA Microarray丙肝病毒检测体系.该体系还可同时对占中国丙肝病毒 75%左右的HC... 利用二硫键法制作寡核苷酸 DNA Microarray,并将该技术应用到 HCV的检测中,建立了一种快速、灵敏、安全的寡核苷酸 DNA Microarray丙肝病毒检测体系.该体系还可同时对占中国丙肝病毒 75%左右的HCV1b亚型进行分型.另外,在丙肝病毒基因组 RNA反转录的过程中采用随机引物,从而为进一步的多种肝炎病毒的寡核苷酸 DNA Microarray混合检测奠定了基础. 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 分型 随机引物 寡核苷酸dna MICROARRAY 二硫键法 HCV 病毒检测
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现代分子生物学技术在木霉鉴定及多样性分析中的应用 被引量:5
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作者 董楠 许艳丽 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期1-5,共5页
木霉是一类重要的生防真菌,具有很大的农业应用潜力。对分离培养的木霉准确鉴定,对其在农业生产中的应用至关重要。近年来,分子生物学技术在木霉鉴定方面得到了广泛应用,本文综述了rDNA-ITS序列分析、通用引物PCR(UP-PCR)、随机扩增多态... 木霉是一类重要的生防真菌,具有很大的农业应用潜力。对分离培养的木霉准确鉴定,对其在农业生产中的应用至关重要。近年来,分子生物学技术在木霉鉴定方面得到了广泛应用,本文综述了rDNA-ITS序列分析、通用引物PCR(UP-PCR)、随机扩增多态性DNA(RAPD)、扩增片段长度多态性(AFLP)等分子技术在木霉鉴定与多样性分析中的应用。 展开更多
关键词 木霉 dna寡核苷酸条形编码 UP-PCR RAPD AFLP
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反基因技术中识别多聚嘌呤靶序列嘧啶断点的寡核苷酸
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作者 李黔宁 戴光明 +1 位作者 应大君 郑健 《国外医学(分子生物学分册)》 CSCD 2002年第2期65-68,共4页
识别 CG断点的寡核苷酸包括 T* CG配对的顺向嘧啶 (TC)和 T* CG配对的反向嘌呤 (G、GA、GT) 寡核苷酸 ,其中以 T* CG配对的反向 GT寡核苷酸亲和性最高。识别 TA断点的寡核苷酸包括 G* TA配对的顺向嘧啶 (TC、TG)和 C* TA配对的反向嘌呤 ... 识别 CG断点的寡核苷酸包括 T* CG配对的顺向嘧啶 (TC)和 T* CG配对的反向嘌呤 (G、GA、GT) 寡核苷酸 ,其中以 T* CG配对的反向 GT寡核苷酸亲和性最高。识别 TA断点的寡核苷酸包括 G* TA配对的顺向嘧啶 (TC、TG)和 C* TA配对的反向嘌呤 (GA、GT)寡核苷酸 ,其中以 C* TA配对的反向 GA寡核苷酸亲和性最高。识别 CG和 TA断点的同时存在的寡核苷酸包括 T* CG和 G* TA配对的反向 GA和 T* CG和 T* TA配对的反向GT寡核苷酸 ,以 T* CG和 G* TA配对反向 展开更多
关键词 嘧啶断点 三链dna寡核苷酸 反基因技术 识别 多聚嘌呤靶序列
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HIV疫苗与ODN联用增强其免疫应答
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作者 陈锦荣 《生物制品快讯》 2001年第12期18-18,共1页
关键词 HIV疫苗 ODN 免疫应答 AIDS 寡核苷酸dna序列 联用
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SPECIFIC IDENTIFICATION OF HERPES SIMPLEX VIRUS IN HUMAN ESOPHAGUS WITH RAPID IN SITU HYBRIDIZATION IN 5 CASES 被引量:1
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作者 Ying-lan Gao Sung-sun Kim +6 位作者 Chang-woo Han Yoo-duk Choi Jong-hee Nam Sang-woo Juhng Jun-shuo Jin Ling-fei Kong Chang-soo Park 《Chinese Medical Sciences Journal》 CAS CSCD 2008年第2期126-128,共3页
HUMAN herpes simplex virus esophagitis (HSVE) was first reported in 1940 by Johnson. ^1HSVE usually occurs in immunocompromised patients,such as those with acquired immunodeficiency syndrome (AIDS), 2-4 malignanc... HUMAN herpes simplex virus esophagitis (HSVE) was first reported in 1940 by Johnson. ^1HSVE usually occurs in immunocompromised patients,such as those with acquired immunodeficiency syndrome (AIDS), 2-4 malignancies, cutaneous burns, connective tissue diseases, inflammatory bowel disease, those taking immuno-suppressive therapy, and those undergoing organ transplantation,5 etc. In the immunocompetent individuals, HSVE is rare, having been reported in 39 cases and mainly affecting young males^6,7 The aim of this study was to delineate the clinical experience in the diagnosis of HSVE using rapid in situ hybridization and assess the various detection methods. 展开更多
关键词 herpes simplex virus ESOPHAGUS oligonucleotide dna probe in situ hybridization
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寡核苷酸介导的基因原位修复
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作者 孙凤强 张敬之 《生命的化学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期323-326,共4页
基因原位修复是指一种利用细胞的自身修复机制,定点修复靶基因中突变碱基的策略。目前,基因原位修复在大肠杆菌、酵母菌、哺乳动物细胞甚至动植物模型都有许多成功例子的报道。近年来,该技术在阐明其机制及提高其修复效率等方面取得了... 基因原位修复是指一种利用细胞的自身修复机制,定点修复靶基因中突变碱基的策略。目前,基因原位修复在大肠杆菌、酵母菌、哺乳动物细胞甚至动植物模型都有许多成功例子的报道。近年来,该技术在阐明其机制及提高其修复效率等方面取得了一些进展,但仍然面临着一些挑战,需要更深入地了解其潜力及局限性,使之成为治疗许多遗传性疾病的一种有效的方法。 展开更多
关键词 基因原位修复 嵌合型RNA/dna寡核苷酸 单链脱氧寡核苷酸
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Synthesis of Isonucleoside-Incorporated Oligonucleotides and Their Binding Abilities with Complementary Sequences
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作者 史继峰 王占黎 +1 位作者 张亮仁 张礼和 《Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences》 CAS 2004年第1期4-9,共6页
Aim To synthesize isonucleoside-incorporated oligonucleotides and investigatetheir binding abilities with complementary sequences. Methods The synthesis was performed on DNAsynthesizer, and the binding behavior was in... Aim To synthesize isonucleoside-incorporated oligonucleotides and investigatetheir binding abilities with complementary sequences. Methods The synthesis was performed on DNAsynthesizer, and the binding behavior was investigated by thermal denaturation studies. Results Fourkinds of single isonucleoside containing oligonucleotides were synthesized. The results of thermaldenaturation showed that the existence of isonucleoside decreased the stability of duplex, and theeffect was more obvious when the isonucleoside was in the middle of the sequence. No obviousdifference was observed when 6'-OH of isonucleoside was free or was protected by allyl group.Conclusions The existence of isonucleoside in oli-gonucleotide makes chain twist and decreased thestability of duplex. 展开更多
关键词 isonucleoside NUCLEOTIDES HYBRIDIZATION thermal denaturation
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Gold nanoparticle-based anodic stripping voltammetry detection of transcription factor NF-kB
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作者 PAN Qin HE Nong-yue LU Zu-hong 《Journal of Life Sciences》 2008年第5期51-56,共6页
Transcription factor and sequence specific DNA interactions play important roles in drug genome and transcription diagnosis. Gold nanoparticles show high sensitivity, stability and compatibility for biological molecul... Transcription factor and sequence specific DNA interactions play important roles in drug genome and transcription diagnosis. Gold nanoparticles show high sensitivity, stability and compatibility for biological molecules as electrochemical intercalators. Here unimolecular hairpin oligonucleotides were self-assembled onto Au electrode surface and elongation on solid phase was carried out to double strand oligonucleotides with transcription factor NF-r,13 binding site. Gold nanoparticle-catalyzed Ag deposition was detected by anodic stripping voltammetry (ASV) for NF-kB binding. It was indicated that this method for sequence specific DNA binding protein detection shows pronounced specificity, sensitivity and we can find application in transcription regulation research, open reading frame characterization and functional gene inspection by this method. 展开更多
关键词 transcription factor NF-KB unimolecular hairpinoligonucleotide anodic stripping voltammetry goldnanoparticle
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BRCA1 Mutation Detection Using Fluorescent Hybridization Probes and Melting Curves
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作者 Safa R. Fitouri Nouri B. Ermeli +4 位作者 Salah M. Bensaber Mousa I. Jaeda Ibrahim A. Mrema Anton Hermann Abdul M. Gbaj 《Journal of Life Sciences》 2013年第3期236-243,共8页
The BRCA1 (Breast Cancer Anti-estrogen resistance-I), early-onset gene is expressed in cells of breast and other tissue and helps to repair damaged DNA or destroy cells in cases DNA cannot be repaired. When the BRCA... The BRCA1 (Breast Cancer Anti-estrogen resistance-I), early-onset gene is expressed in cells of breast and other tissue and helps to repair damaged DNA or destroy cells in cases DNA cannot be repaired. When the BRCA1 gene is damaged, then the DNA is not repaired appropriately and this enhances the risk for cancer. Fluorescence and UV-visible thermal studies were performed for WT (wild type) and MT (mutant type targets) full systems. The target DNAs used were in the form of short oligonucleotides, genomic DNA. The probe system was used for detection of WT and SNP alleles of human BRCAI [(170-190, G---~T) and (290-310, G---~T)]. The Cy5 dye attached to a probe oligonucleotide (10-mer) undergoes a fluorescence intensity change on hybridisation of the probe to the WT compared to MT targets. Our results indicate that the system consisting of the target sequence and the one probe oligonucleotides bearing the Cy5 dye assemble correctly at the specified target. Once the full system (probe and target) is arranged under suitable conditions, a red-shift emission and change in fluorescence intensity are seen at a suitable wavelength. Thermal studies also showed significant differences in T,, between WT and MT. The results suggest that the differences in the fluorescence intensity at 665 nm and the spectrophotometric T,,,cs) for the WT and MT can be attributed to the type of binding of the probe to the target. The systems were sensitive to single nucleotide polymorphisms and this may help in high throughput applications in genetic testing and molecular diagnostics. 展开更多
关键词 dna fluorescence probe BRCAI gene melting temperature anisotropy.
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基因修复方法与治疗
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作者 林辉煌 《海峡药学》 2010年第3期5-8,共4页
基因修复涉及的对象是基因突变原位校正以恢复正常基因功能。具体基因修复虽然有很多限制,但与扩增技术相比还是有很多优点。本文概述了基因修复的优缺点,主要讨论了基于嵌合RNA/DNA寡核苷酸,单链寡核苷酸和小片段同源替换方法。这些方... 基因修复涉及的对象是基因突变原位校正以恢复正常基因功能。具体基因修复虽然有很多限制,但与扩增技术相比还是有很多优点。本文概述了基因修复的优缺点,主要讨论了基于嵌合RNA/DNA寡核苷酸,单链寡核苷酸和小片段同源替换方法。这些方法都有一些共同点即需要核酸分子到细胞核的有效传递。此外,还有一种新的基因扩增策略—睡美人转座子系统。 展开更多
关键词 基因修复 RNA/dna寡核苷酸 小片段同源置换 睡美人转座子
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DNA-associated click chemistry 被引量:3
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作者 HAQUE Mohammad Mojibul PENG XiaoHua 《Science China Chemistry》 SCIE EI CAS 2014年第2期215-231,共17页
This review highlights the most recent advances in click chemistry associated with DNA.Cu[I]-catalyzed azides-alkynes Huisgen cycloadditions(CuAAC)and a strain-promoted alkyne-azide cycloaddition(SPAAC)are two popular... This review highlights the most recent advances in click chemistry associated with DNA.Cu[I]-catalyzed azides-alkynes Huisgen cycloadditions(CuAAC)and a strain-promoted alkyne-azide cycloaddition(SPAAC)are two popular click reactions that have great impact in DNA science.The simplicity,versatility,orthogonality,and high efficiency of click reaction along with a stable triazole product have been instrumental for the successful application of this reaction in the field of nucleic acid chemistry.CuAAC and SPAAC reactions have been widely used for DNA modification,including DNA labeling,metallization,conjugation,cross-linking,and ligation.Modified oligodeoxynucleotides obtained from click reaction have been extensively applied in the fields of drug discovery,nanotechnology,bio-conjugation,and material sciences,among others.The most recent advances in the synthesis and applications of clickable DNAs are discussed in detail in this article. 展开更多
关键词 "click" chemistry OLIGODEOXYNUCLEOTIDES dna functionalization dna ligation and cross-linking
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Atomic force microscopy analysis of orientation and bending of oligodeoxynucleotides in polypod-like structured DNA 被引量:1
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作者 Tomoki Shiomi Mengmeng Tan +7 位作者 Natsuki Takahashi Masayuki Endo Tomoko Emura Kumi Hidaka Hiroshi Sugiyama Yuki Takahashi Yoshinobu Takakura Makiya Nishikawa 《Nano Research》 SCIE EI CAS CSCD 2015年第12期3764-3771,共8页
We previously demonstrated that polypod-like structured DNA, or polypodna, constructed with three or more oligodeoxynucleotides (ODNs), is efficiently taken up by immune cells such as dendritic cells and macrophages... We previously demonstrated that polypod-like structured DNA, or polypodna, constructed with three or more oligodeoxynucleotides (ODNs), is efficiently taken up by immune cells such as dendritic cells and macrophages, depending on its structural complexity. The ODNs comprising the polypodna should bend to form the polypod-like structure, and may do so by adopting either a bend- type conformation or a cross-type conformation. Here, we tried to elucidate the orientation and bending of ODNs in polypodnas using atomic force microscopy (AFM). We designed two types of pentapodnas (i.e., a polypodna with five pods) using 60- to 88-base ODNs, which were then immobilized on DNA origami frames. AFM imaging showed that the ODNs in the pentapodna adopted bend-type conformations. Tetrapodna and hexapodna also adopted bend-type conformations when they were immobilized on frames under unconstrained conditions. These findings provide useful information toward the coherent design of, and the structure-activity relationships for, a variety of DNA nanostructures. 展开更多
关键词 dna nanostructure atomic force microscopy self-asse nanotechology structure-activity relationship
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