壳寡糖衍生物纳米银微粒诱导烟株产生TMV抗性

为开发高效、低毒且环境友好的新型抗烟草普通花叶病毒制剂,以合成的具有季铵盐结构的新型壳寡糖希夫碱衍生物为还原剂和稳定剂合成了壳寡糖衍生物纳米银微粒(C_4-Ag NPs),并探讨了其对烟草花叶病毒的抑制效应及生理生化机制。结果表明17μg/m L的C_4-Ag NPs在珊西烟上对烟草普通花叶病毒具有良好的预防和治疗效果,防效可达到86.95%;C_4-Ag NPs喷施在感染TMV的普通烟K326上可在一定的时间内提高叶片内防御酶过氧化氢酶(CAT)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性,使脯氨酸含量得到提高,丙二醛含量降低。

寡糖及其衍生物的生物活性研究进展

寡糖是生命运动中的活性物质。随着研究的深入 ,其在生物体内所起的重要作用正逐渐为人们所知。本文综述了近年来寡糖生物活性、应用以及合成检测等方面的新进展。

寡糖8-氨基萘基-1,3,6-三磺酸衍生物在毛细管区带电泳中迁移时间相互关系

确定了寡糖８－氨基萘基－１，３，６－三磺酸（ＡＮＴＳ）衍生物在毛细管区带电泳中迁移时间的相互关系．分别将葡聚糖、甘露聚糖、木聚糖和甲壳质部分酸水解产生的不同聚合度寡糖的混合物，用ＡＮＴＳ胺化还原衍生，然后用毛细管电泳，在５０ｍｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ２．５磷酸缓冲液中分离衍生物，分别得到１至２１个聚合度的寡聚葡糖衍生物电泳梯度图，以及聚合度均为１至７的寡聚甘露糖、寡聚木糖和寡聚Ｎ－乙酰氨基葡糖衍生物电泳梯度图．同类寡糖衍生物相对迁移时间（ｔｍ）ｒ与聚合度ｎ均成线性关系．

壳寡糖季铵盐衍生物纳米银的合成及其诱导烟株抗烟草花叶病毒活性

为开发符合高效、低毒且环境友好的新型烟草花叶病毒（TMV）抑制剂,以具有季铵盐结构的新型壳寡糖季铵盐衍生物为还原剂和稳定剂,合成了壳寡糖季铵盐衍生物纳米银溶液,并研究了不同浓度该纳米银溶液诱导烟株产生抗TMV的活性。结果表明：所合成的壳寡糖季铵盐衍生物纳米银溶液在透射电镜（TEM）下显示分布较均匀,粒径主要集中在7-12 nm。在珊西烟上以25μg/m L的壳寡糖季铵盐衍生物纳米银溶液对枯斑的抑制效果最好,抑制率为74.0%,比50μg/m L壳寡糖溶液和2%宁南霉素水剂分别高41.5%和24.4%;对于普通烟K326,壳寡糖季铵盐衍生物纳米银溶液可缓解被病毒侵染的烟草叶绿素含量的下降幅度,提高叶片中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）和过氧化氢酶（PPO）的活性,降低丙二醛（MDA）的含量,提高可溶性蛋白含量。表明壳寡糖季铵盐纳米银溶液可提高烟株对TMV的抗病性。

6-羧基壳寡糖螯合钙制备工艺与络合性能研究

以壳寡糖(COS)为试验材料,采用TEMPO氧化法将壳寡糖C6位上的羟甲基直接氧化成为羧基,制备6-羧基壳寡糖(CCOS)。以Ca Cl2作为钙源,通过探讨体系pH值、反应温度、反应时间、CCOS与Ca Cl2质量比对CCOS-Ca(Ⅱ)得率的影响,采用三因素五水平中心旋转组合设计优化了制备工艺。并对产物进行傅里叶变换红外光谱扫描及元素分析。使用Design-Expert软件对响应面试验数据进行回归分析。所得CCOS-Ca(Ⅱ)制备最佳工艺参数为:反应pH值为8.3,反应时间60 min,反应温度50℃,CCOS与Ca Cl2质量比为34。在此优化工艺条件下,验证试验螯合率为88.86%。通过红外光谱及元素分析,证明了钙螯合物的形成,CCOS-Ca(Ⅱ)配合物的结构初步认为CCOS与Ca2+摩尔比为2∶1。CCOS分子除了含有—OH、—NH2外,还含有—COOH,能够对钙进行有效螯合,体系pH值、反应温度、配体质量比对螯合结果影响显著,所得CCOS-Ca(Ⅱ)络合物不仅能发挥壳寡糖本身独特的生物活性,而且有可能起到协同效应,增强各自的生物活性。

荧光辅助糖电泳的优化

荧光辅助糖电泳(FACE)是一种快捷、花费少的分离糖类方法。寡糖首先经8-氨基萘-1,3,6-三磺酸(ANTS)胺化还原衍生,该反应过程在所给实验条件下需要16 h。然后,经ANTS衍生的寡糖在ρ(丙烯酰胺)=0.32 g/mL、ρ(双丙烯酰胺)=0.024 g/mL组成的碱性分离胶上电泳从而得以分离。该方法无需专门的仪器和操作熟练的技术人员。

双重分子印迹电化学传感器测定氯霉素的研究

本文旨在构建一种双重分子印迹膜电化学传感器检测痕量氯霉素的分析方法。首先通过量化计算,从N-(4-戊烯酰-氨基酸酰)壳寡糖筛选出对氯霉素分子有较强分子作用的功能单体低聚物N-(4-戊烯酰-异亮氨酰)壳寡糖(N-(4-pentenyl-isoleucyl)chitooligosaccharide, PICO)。经紫外扫描确证这种相互作用。以氯霉素为模板分子、PICO为功能单体低聚物、乙二醇二甲基丙烯酸酯作为交联剂,在玻碳电极表面本体聚合制备了氯霉素初级分子印迹膜,然后以此修饰电极为工作电极,在含饱和氯霉素的吡咯溶液中,在0~0.85 V进行循环伏安扫描,在初级印迹聚合膜的间隙中形成复合印迹膜。去除复合印迹膜中模板分子后,可以实现对氯霉素的特异性吸附。采用微分脉冲伏安法(DPV)对构建传感器的性能评估,并优化了传感器相关的实验制备参数。结果表明:在最佳条件下,传感器对氯霉素的检测范围为0.04~4.0μM,检出限为15 nM(S/N=3),回收率达94.0%~103.4%,相对标准偏差小于5%(n=5)。此外,该传感器具有良好的再生性能、稳定性和实用性,在室温下于密封胶囊中保存10天后,其仍能保持90%以上的检测性能。

HPLC检测肠灌流模型中PMP衍生化葡寡糖含量的方法学建立

目的:建立肠灌流模型中1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生化葡寡糖含量的检测方法,并进行方法学考察。方法:采用HPLC法测定,色谱条件为,色谱柱:phenomenexC18(250×4.60mm,5μm);流动相:100mMNaAc/乙腈(梯度洗脱);流速:1.0mL·min-1;紫外检测波长245nm;进样量:20μL;柱温:40℃。结果:PMP衍生化葡寡糖在此色谱条件下获得良好分离,肠灌流液、血浆样品及酚红对10种化合物的检测均无影响。结论:该方法准确可靠,重复性良好,为寡糖的吸收研究提供了技术支持。

荧光辅助糖电泳用于果胶水解产物中寡糖的分析研究

荧光辅助糖电泳(FACE)是首先用荧光衍生化试剂对糖类分子的还原端进行衍生化标记,然后在一定浓度的聚丙烯酰胺凝胶上进行分离的分析方法,可同时分析中性糖与酸性糖.将该方法用于果胶寡糖的分离分析,对影响FACE的诸多因素如荧光试剂的种类、用量,荧光衍生化时间、温度,分离胶浓度及盐、酸等进行了考察,对果胶寡糖的FACE条件进行了优化,结果显示:每1.2mg无酸且不含盐的果胶寡糖中,加入0.2mol/L的ANTS溶液3.75μL,1.0mol/L的NaBH3CN溶液5μL,40℃衍生化反应16h后,在浓度为38%的分离胶上电泳分离,取得良好的分离效果.在该实验条件下,果胶多糖酸水解后得到聚合度为2～16的果胶寡糖混合物,与质谱分析结果基本一致.该方法快速、简捷、灵敏、分辨率高,费用低,为果胶多糖可控性降解的监测和果胶寡糖的分离分析提供了技术手段.

寡聚酸碘抑制TMV活性测定及对番茄生长影响初探

为研究新型壳寡糖衍生物类农用制剂寡聚酸碘(寡聚N-乙酰基-D-氨基葡萄糖醛酸碘)对烟草花叶病毒(TMV)的抑制作用及对番茄生长、生理特性的影响,以番茄品种:L402、贝鲁特、粉多利作为供试材料,以氨基寡糖素及50%腐霉利L可湿粉剂作为对比,通过室内生测试验试验,测定寡聚酸碘对番茄病毒病中常见病原菌TMV的抑制效果、对番茄生长及及番茄幼苗茎尖中吲哚乙酸、赤霉素及叶绿素含量的影响。寡聚酸碘对TMV的抑制效果表现出良好的速效性和持效性,接种后17d,抑制效果从45.08%迅速提升到74.48%,接种21~35d,对TMV的抑制效果维持在80%以上。寡聚酸碘对TMV的EC50值为15.62mg/L,对TMV的抑制活性高于3%氨基寡糖素水剂寡聚酸碘处理,有效成分300.0mg/L的寡聚酸碘可作为抑制TMV活性的最优供试剂量;寡聚酸碘在300~1 200mg/L处理剂量下,对供试的3个番茄品种(L402、贝鲁特、粉多利)安全,未见任何药害症状,与CK、3%氨基寡糖素及50%腐霉利L可湿粉剂相比,可以明显提升番茄幼苗株高、茎尖内IAA、GA含量及叶片中总叶绿素含量。寡聚酸碘处理的番茄茎秆粗壮,叶色浓绿,生长性状良好。因此,寡聚酸碘具有抑制TMV活性及促进番茄生长的双重功效,开发利用前景良好。