人精子纤维鞘多态性蛋白CABYR的寡聚化作用

目的验证钙结合酪氨酸磷酸化调节蛋白（calcium-binding tyrosine phosphorylation-regulated protein,CABYR）不同异构体之间寡聚体的形成。方法人精子提取物进行非还原和还原条件下的SDS-PAGE、二维IEF/SDS-PAGE、对角线电泳、二维blue native/SDS-PAGE电泳和免疫印迹分析。结果在人精子中丰度最高的CABYR亚型是相对分子质量86×103仅含CRA编码区表达序列,具有钙结合能力的异构体。同时也存在既含CRA又含CRB编码区表达序列的CABYR亚型。在非还原条件下,丰度最高的130×103二聚体是由仅含CRA表达序列的86×103异构体和既含CRA又含CRB表达序列的50×103异构体组成。（200-220）×103寡聚体是由86×103、50×103异构体,以及35×103（可能既含CRA又含CRB表达序列）的异构体和仅含CRA表达序列的30×103异构体组成。结论证实CABYR异构体可形成寡聚体,CABYR主要通过86×103和50×103异构体形成异质二聚体,与其他CABYR异构体结合进一步形成更大的寡聚体,参与了人精子纤维鞘超分子结构的装配和形成。

一个水稻小热休克蛋白的异源表达及寡聚特性分析

【目的】在前期研究中,本实验室已克隆了一个水稻小热休克蛋白基因(OsSHSP17.6),并发现该基因的表达明显受到热激和病毒侵染调控,表明该蛋白可能在逆境胁迫过程中起重要作用。本研究的目的在于进一步明确OsSHSP17.6的特性。【方法】在本研究中,进一步将该基因亚克隆至原核表达载体p ET-32a并导入大肠杆菌E.coli BL21(DE3)pLysS诱导表达,通过亲和层析的方法纯化了该重组蛋白,进一步用于非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blotting分析。【结果】异源表达的重组OsSHSP17.6能减轻IPTG对宿主菌的毒害。非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blotting分析显示纯化的重组OsSHSP17.6蛋白在体外能形成同源二聚体和寡聚体。【结论】这些结果支持OsSHSP17.6是一个有功能的分子伴侣蛋白并表明该蛋白可能通过形成同源寡聚体的方式参与逆境胁迫反应,这为进一步明确OsSHSP17.6的功能机制奠定基础。