酵母朊蛋白Sup35NM的寡聚化过程研究

本文研究了与神经退行性疾病相关蛋白有类似聚集行为的模型蛋白质酵母朊蛋白Sup35NM的错误折叠过程,特别是初始的寡聚化过程.为了延缓和阻止朊蛋白Sup35NM在磷酸盐缓冲液中(体外条件)的聚集以利研究,在Sup35NM的N结构域第31位点处突变并修饰了一个聚合物分子PNIPAM(即蛋白质-高分子结合物Sup35NM-31m-PNIPAM).硫代黄素T荧光光谱实验显示,修饰延缓了Sup35NM的寡聚化,并给出了研究寡聚化的时间窗口:25℃时,修饰前后分别是~10和24 h.激光光散射实验进一步证实了修饰阻碍Sup35NM寡聚化聚集.运用Smoluchowski模型公式,拟合了激光光散射实验数据,定量地给出并对比了修饰前后两个样品在聚集初期(6 h内)的寡聚体分布.结果显示,在引发聚集6 h后,未修饰样品中的蛋白质单体仅剩13%,而在PNIPAM修饰后的样品中蛋白质单体则仍占46%.本工作为可控、定量研究朊蛋白寡聚化提供了新思路.