冬凌草抗肿瘤对映贝壳杉烯迈克尔反应受体分子快速发现

目的快速发现冬凌草中抗肿瘤对映贝壳杉烯迈克尔反应受体分子。方法以乙醇钠为催化剂,将冬凌草提取液与紫外分子探针对硝基苯甲酰乙酸乙酯进行柱前衍生迈克尔加成反应。反应完毕后,加入乙酸中和催化剂终止反应得反应液。将反应液与冬凌草原提取液在相同的条件下进行HPLC对比分析。发生加成反应的对映贝壳杉烯色谱峰面积将相应减小,并产生迈克尔加成产物新色谱峰。综合保留时间、色谱峰形和DAD紫外光谱图确定原提取液和反应液HPLC图谱中的对映贝壳杉烯迈克尔反应受体分子。结果从冬凌草提取液HPLC图谱上鉴定出对映贝壳杉烯迈克尔反应受体分子12个。结论首次采用对硝基苯甲酰乙酸乙酯分子探针HPLC-DAD法快速发现冬凌草中对映贝壳杉烯迈克尔反应受体分子。

13-羟基-对映贝壳杉烯类二萜绝对构型的确定

通过系列１３羟基对映贝壳杉烯二萜的园二色散光谱的数据分析，提出一种确定对映贝壳杉烯二萜绝对构型的方法。

川藏香茶菜中双聚对映贝壳杉烯的结构鉴定

从川藏香茶菜的干叶和嫩枝中，分离得到了一个对映贝壳杉烯的双聚体，命名为川藏香茶菜戊素，经光谱解析和化学证明确定了其结构为川藏香茶菜甲素的Ｄｉｅｌｓ－Ａｌｄｅｒ双聚体。

对映-贝壳杉烯型二萜类化合物J32对胰腺癌细胞的作用及机制

目的探讨对映-贝壳杉烯型二萜类化合物J32对胰腺癌细胞SW1990的作用及机制。方法将SW1990细胞随机分为对照组、0.5μmol·L^(-1) J32组、1.0μmol·L^(-1) J32组、2.0μmol·L^(-1) J32组、4.0μmol·L^(-1) J32组,分别用含终浓度0.0、0.5、1.0、2.0、4.0μmol·L^(-1) J32的培养基培养。采用细胞划痕试验检测细胞迁移能力,单克隆形成试验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况、细胞中活性氧水平及细胞周期,磷酸化H2组蛋白家族成员X(γ-H2AX)免疫荧光法检测细胞DNA损伤程度,Western blot法检测共济失调毛细血管扩张和Rad3相关蛋白(ATR)-细胞周期检查点激酶1(Chk1)-p53-细胞周期素D1(Cyclin D1)通路相关蛋白以及凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)、caspase-3、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)表达。结果培养24、48 h时,1.0μmol·L^(-1) J32组、2.0μmol·L^(-1) J32组、4.0μmol·L^(-1) J32组细胞的迁移能力显著低于对照组(P<0.05),2.0μmol·L^(-1) J32组、4.0μmol·L^(-1) J32组细胞的迁移能力均显著低于1.0μmol·L^(-1) J32组(P<0.05),4.0μmol·L^(-1) J32组细胞的迁移能力显著低于2.0μmol·L^(-1) J32组(P<0.05)。0.5μmol·L^(-1) J32组、1.0μmol·L^(-1) J32组细胞的增殖能力显著低于对照组(P<0.05),1.0μmol·L^(-1) J32组细胞的增殖能力显著低于0.5μmol·L^(-1) J32组(P<0.05)。1.0μmol·L^(-1) J32组、2.0μmol·L^(-1) J32组、4.0μmol·L^(-1) J32组细胞的凋亡率显著高于对照组(P<0.05),2.0μmol·L^(-1) J32组、4.0μmol·L^(-1) J32组细胞的凋亡率显著高于1.0μmol·L^(-1) J32组(P<0.05),4.0μmol·L^(-1) J32组细胞的凋亡率显著高于2.0μmol·L^(-1) J32组(P<0.05)。1.0μmol·L^(-1) J32组、2.0μmol·L^(-1) J32组、4.0μmol·L^(-1) J32组细胞的活性氧水平显著高于对照组(P<0.05),2.0μmol·L^(-1) J32组、4.0μmol·L^(-1) J32组细胞的活性氧水平显著高于1.0μmol·L^(-1) J32组(P<0.05),4.0μmol·L^(-1) J32组细胞的活性氧水平显著高于2.0μmol·L^(-1) J32组(P<0.05)。1.0μmol·L^(-1) J32组、2.0μmol·L^(-1) J32组细胞的DNA损伤程度显著高于对照组(P<0.05),2.0μmol·L^(-1) J32组细胞的DNA损伤程度显著高于1.0μmol·L^(-1) J32组(P<0.05)。1.0μmol·L^(-1) J32组、2.0μmol·L^(-1) J32组细胞中G 1/S期细胞占比显著高于对照组(P<0.05),2.0μmol·L^(-1) J32组细胞中G 1/S期细胞占比显著高于1.0μmol·L^(-1) J32组(P<0.05)。对照组、1.0μmol·L^(-1) J32组、2.0μmol·L^(-1) J32组、4.0μmol·L^(-1) J32组细胞中,随着J32浓度的增加,磷酸化ATR/ATR值及磷酸化p53蛋白表达呈升高趋势(F=25.534、3.970,P<0.05),Chk1、CyclinD1蛋白表达呈降低趋势(F=19.532、0.485,P<0.05);促凋亡蛋白caspase-3、Bax的表达呈升高趋势(F=0.219、4.314,P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达呈下降趋势(F=0.324,P<0.05)。结论对映-贝壳杉烯型二萜类化合物J32可呈浓度依赖性地抑制胰腺癌SW1990细胞的迁移和增殖、促进细胞凋亡及提高细胞内活性氧水平,此外,J32可促进细胞发生DNA损伤及细胞周期阻滞,其作用机制可能与ATR-Chk1-p53-Cyclin D1通路相关。

尾叶香茶菜中对映-贝壳杉烯型二萜

尾叶香茶菜中对映－贝壳杉烯型二萜王艳红１）陈耀祖２）孙汉董３）金东史４）（１）中山大学化学与化学工程学院，广州５１０２７５；２）浙江大学化学系；３）中国科学院昆明植物研究所植化室；４）朝鲜国家科学院植物研究所）关键词唇形科，香茶菜属，尾叶香茶菜，对...

对映-贝壳杉烯二萜分子内氢键对6,7位羟基化学反应性影响研究

对映-贝壳杉烯二萜分子在激烈条件下进行乙酰化反应,反应发生在半缩醛羟基,而非仲羟基上;该反常现象的产生可能是由于6位仲羟基与15位羰基之间形成了分子内氢键,本文根据~1H NMR变温实验观察分子在不同温度时6位和7位羟基质子的化学位移变化值△δ/T(H_z·K^(-1)),证明了上述假定。

腺花香茶菜中的对映-贝壳杉烯类二萜化合物(英文)

从昆明产腺花香茶菜(Isodon adenan thus(Diels)Kudo)的地上部分分离到8个化合物,通过波谱分析鉴定,化合物1-3为新的对映-贝壳杉烯类二萜化合物,命名为腺花香茶菜素N、O和P;4个已知二萜为白叶香茶菜戊素(4)、无毛狭叶香茶菜素C(5)、腺花香茶菜甲素(6)和白叶香茶菜乙素(7),同时得到一个高度不饱和脂肪酸9,16-二羰基-10,12,14-三烯-十八碳酸(8)。根据ROESY波谱,对化合物4的结构进行了修正。化合物1对K562细胞显示出明显的细胞毒活性(IC50=0.45 μg/mL)。

不同产地半边旗中11β-羟基-15-氧-对映贝壳杉-16-烯-19-酸19-β-D-葡萄糖的含量测定

目的:建立半边旗中11β-羟基-15-氧-对映贝壳杉-16-烯-19-酸19-β-D-葡萄糖的含量测定方法。方法:采用HPLC法,ODSC18柱(25mm×4.6mm,5μm);流动相为甲醇-4mM的醋酸铵水溶液(2∶3),流速为1.0ml.min-1,检测波长为242nm。结果:11β-羟基-15-氧-对映贝壳杉-16-烯-19-酸19-β-D-葡萄糖在0.8～4.8μg范围内呈良好的线性关系(r=0.9998);半边旗中11β-羟基-15-氧-对映贝壳杉-16-烯-19-酸19-β-D-葡萄糖的含量,广东湛江产最高,为4.609mg·g-1生药,广东廉江最低为1.515mg·g-1生药。结论:本方法简便、可靠,适用于半边旗中11β-羟基-15-氧-对映贝壳杉-16-烯-19-酸19-β-D-葡萄糖的含量测定。

藏药小叶毛球莸中对映-贝壳杉烯型二萜类成分研究

目的:研究藏药小叶毛球莸的化学成分。方法:采用溶剂法和色谱法提取分离化学成分,并用波谱方法鉴定化学成分结构。结果:从藏药小叶毛球莸中分离得到2个对映-贝壳杉烯型二萜类化合物:冬凌草甲素(1)和nodosin(2),并首次报道了该两个化合物在甲醇(CD3OD)中的1H和13C-NMR数据。结论:对映-贝壳杉烯型二萜类化合物为首次从莸属植物中分离得到。

高氧化态对映-贝壳杉烯二萜类天然产物的全合成

J.Am.Chem.Soc.2017,139,6098~6101唇形科香茶菜属植物是我国民间广泛使用的中草药,迄今为止已从中分离得到1000余个对映-贝壳杉烯二萜类化合物（ent-kaurenoids）.这类天然产物大多具有较强的抗菌活性、抗疟活性、抗肿瘤活性和抗病毒活性等.同时,

利用UPLC法对玉米须萜类物质提取工艺的比较分析

为研究玉米须中萜类成分的提取工艺。本文以玉米须中含有的玉米烯F(1)、3β-羟基-对映-贝壳杉-15-烯-17-酸-18-酯(2)和4α-羟基-19-降-对映贝壳杉烷型-15-烯-17-酸(3)为标准品,建立了玉米须提取物中三种萜类成分含量的测定UPLC分析方法。其色谱条件为:采用Polar C_(18) 100Ȧ(4.6 mm×150 mm,2.6μm)色谱柱,以甲醇(A)、0.1%磷酸-水溶液(B)为流动相梯度洗脱,流速1.0 mL/min,柱温40℃,波长220 nm,进样量5μL。结果表明,玉米烯F(1)在0.96~192.0μg/mL范围内,3β-羟基-对映-贝壳杉-15-烯-17-酸-18-酯(2)和4α-羟基-19-降-对映贝壳杉烷型-15-烯-17-酸(3)在5.0~200.0μg/mL范围内线性关系良好(r>0.9993),定量限(LOQ,S/N=10)均在5.0~10.0μg/g之间,平均加样回收率为89.1%~105.8%,相对标准偏差(RSD)均小于2%。表明该方法具有较高的准确度和检测灵敏度,能够准确地对玉米须样品中三种萜类成分进行定量分析,为玉米须萜类成分的进一步深化研究提供科学参考。利用该分析方法优化玉米须中三个萜类成分的提取工艺为:采用加热回流提取法,20%甲醇-水溶液作为提取溶剂,料液比为1:25,提取时间1 h。

冬凌草甲素和冬凌草乙素与谷胱苷肽的迈克尔加成反应

采用紫外光谱动力学方法测定了抗肿瘤对映贝壳杉烯二萜冬凌草甲素和冬凌草乙素与谷胱苷肽迈克尔加成反应的级数、速率常数和平衡常数.结果表明,冬凌草甲素和冬凌草乙素与与谷胱苷肽迈克尔加成反应符合二级动力学方程,25℃下的速率常数分别为16.196 0L·(mol·s)-1和7.480 5L·(mol·s)-1,平衡常数分别为177.98L/mol和85.60L/mol.冬凌草甲素与谷胱苷肽迈克尔加成反应速率和反应程度均比冬凌草乙素的大得多,反应活性更好.对映贝壳杉烯二萜通过与机体发生迈克尔加成反应而产生抗肿瘤作用;因此,冬凌草甲素可能比冬凌草乙素具有更好的抗肿瘤活性.

广西甜茶化学成分的研究

目的:研究广西甜茶(Rubus suavissimus S.Lee)叶中的活性成分。方法:利用反复硅胶柱层析的方法对广西甜茶进行分离和纯化,通过IR、MS、NMR等光谱技术和化学方法鉴定化合物的结构。结果:从广西甜茶叶中分离得到2个对映-贝壳杉烯型二萜类化合物,经鉴定化合物Ⅰ为对映-13-羟基-贝壳杉-16-烯-19-羧酸(ent-13-hydrox-y-kauran-16-en-19-oic acid),化合物Ⅱ为对映-贝壳杉-16-烯-19-酸-13-O-β-D-葡萄糖苷(ent-kauran-16-en-19-oic-13-O-β-D-glucoside)。结论:化合物Ⅱ为首次从该植物中分得。

旱生香茶菜二萜化合物细胞毒活性的三维构效研究

应用比较分子力场法(COMFA)研究了一系列旱生香茶菜二萜化合物对人红细胞白血病(K562)、人早幼粒白血病(HL60)、人胃腺癌(MKN28)和人结肠癌(HCT)细胞体外抗肿瘤活性进行了三维定量构效关系的初步研究,其结果将为香茶菜二萜的结构修饰和简化,先导化合物的发现提供理论依据。

高效液相色谱法测定半边旗抗肿瘤有效成分5F的含量

目的 建立半边旗抗肿瘤有效成分 11α 羟基 15 氧 16烯 对映贝壳杉烷 19 酸 (5F)的HPLC定量测定方法。方法 流动相由乙腈 甲醇 5 0mmol·L-1醋酸盐缓冲液 (30∶5∶6 5 ,pH4 .1)组成 ;流速 1.0mL·min-1,检测波长 2 4 2nm。结果 5～ 15 0mg·L-1范围内呈线性 (r =0 .9997) ,日内、日间RSD 1.8%～ 4 .8% ,回收率 95 .5 %。结论 该方法精密度高、专一性好、能准确检测半边旗 5F含量。

5F对人高转移巨细胞肺癌PGCL_3细胞PTEN、MMP-9表达的影响

目的研究Ent-11α-hydroxy-15-oxo-kaur-16-en-19-oic-acid(以下简称5F)对人高转移巨细胞肺癌PGCL3细胞毒性、侵袭能力及PTEN、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法 MTT法检测5F对PGCL3细胞增殖抑制的影响;用Transwell小室法检测5F对PGCL3细胞侵袭能力和趋化性运动能力的影响;RT-PCR和Western blot方法检测5F对PGCL3细胞侵袭转移相关基因PTEN、MMP-9表达水平的影响。结果 5F对PGCL3细胞的增殖、侵袭及运动能力均有明显的抑制作用(均P<0.05)。5F作用于人PGCL3细胞24h,能明显上调PTEN mRNA和蛋白的表达,下调MMP-9mRNA和蛋白的表达。结论 5F能抑制PGCL3细胞的增殖、侵袭和迁移能力,其机制可能是通过上调PTEN和下调MMP-9表达水平而实现的。

半边旗5F注射液的质量标准研究

目的：建立半边旗注射液的质量标准。方法：采用薄层色谱法对半边旗注射液进行鉴别；采用高效液相色谱法测定主要成分11α-羟基-15-氧-16-烯-对映贝壳杉烷-19-酸（5F）的含量，色谱柱为Hypersil C18（4．6mm×250mm，5μm），流动相为甲醇-水-冰醋酸（55：45：0.045），检测波长254nm，流速1．0mL·min^-1，柱温35℃；采用pH计法、离子火焰法和沉淀法分别测定注射液pH，K^＋、鞣质、蛋白质、草酸盐以及重金属含量。结果：薄层鉴别斑点清晰，重现性好。高效液相色谱法测定5F在30～240mg·L^-1,线性关系良好（r=0.9998），平均加样回收率为99．8％。连续3批注射液pH7．80～8．20，K^＋浓度小于10mmol·L^-1，注射液的鞣质、蛋白质、草酸盐以及重金属含量都符合药典规定。结论：本实验建立的分析方法灵敏可靠，可作为半边旗注射液的质量控制方法。

腺花香茶菜二萜成分研究

由腺花香茶菜全草的丙酮提取物中分离得到２个对映－贝壳杉烯型二萜，利用红外、紫外、质谱和核磁共振等光谱方法，对这２个化合物的结构进行了鉴定．

迈克尔加成反应预测冬凌草活性成分及其乙酰化产物抗肿瘤活性（英文）

为了快速、简便地评价冬凌草(Isodon rubescens(Hemsley)H.Hara)活性成分的抗肿瘤活性,以冬凌草活性成分冬凌草甲素和冬凌草乙素及其乙酰化产物与对硝基苯甲酰乙酸乙酯(ENBA)进行迈克尔加成反应,以反应动力学得出迈克尔加成反应的反应活性,首次以反应活性预测了对冬凌草甲素(1)、冬凌草乙素(2)、1,14-二乙酰基冬凌草甲素(1a)和1,6-二乙酰基冬凌草乙素(2a)4个对映-贝壳杉烯的抗肿瘤活性。结果表明:4种活性成分的迈克尔加成反应均符合二级动力学方程,反应活性1>1a>2>2a,根据阿伦尼乌斯公式,测得冬凌草甲素活化能(Ea)为(38.7±5.8)kJ/mol,冬凌草乙素Ea为(46.8±7.1)kJ/mol。采用~1H NMR和^(13) C NMR等波谱技术鉴定冬凌草甲素与ENBA经迈克尔加成反应得到的新化合物为1α,6β,7β,14β-四羟基-7α,20-环氧-17-(2-(3-(4-硝基苯基))-3-氧-丙酸乙酯)-对映贝壳杉烷-15-酮,命名为nitrobenoridonin(1b)。4个对映-贝壳杉烯具有较强的体外抗肿瘤活性,经测定它们的抗肿瘤活性大小依次为1>1a>2>2a,与其迈克尔加成反应活性排序一致,表明迈克尔加成反应活性与抗肿瘤活性之间存在较好的相关性,可以通过测定迈克尔加成反应活性预测对映-贝壳杉烯的抗肿瘤活性。

两似蟹甲草化学成分研究

目的：对两似蟹甲草化学成分进行研究。方法：对两似蟹甲草的化学成分利用各种色谱方法分离精制，利用各种波谱方法鉴定其结构。结果：从该药用植物中分离得到四种化合物，利用波谱方法确定它们的结构分别为对映坝壳杉-16-烯-19-羧酸（1）、13β-贝壳杉-16β-醇（2）、β-谷甾醇（3）及1-甘油醇廿六烷酸酯（4）。结论：化合物1～4均为首次从该植物分离得到，其中化合物1、2为从本属植物中首次得到。