对映-贝壳杉烯型二萜类化合物J32对胰腺癌细胞的作用及机制

目的探讨对映-贝壳杉烯型二萜类化合物J32对胰腺癌细胞SW1990的作用及机制。方法将SW1990细胞随机分为对照组、0.5μmol·L^(-1) J32组、1.0μmol·L^(-1) J32组、2.0μmol·L^(-1) J32组、4.0μmol·L^(-1) J32组,分别用含终浓度0.0、0.5、1.0、2.0、4.0μmol·L^(-1) J32的培养基培养。采用细胞划痕试验检测细胞迁移能力,单克隆形成试验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况、细胞中活性氧水平及细胞周期,磷酸化H2组蛋白家族成员X(γ-H2AX)免疫荧光法检测细胞DNA损伤程度,Western blot法检测共济失调毛细血管扩张和Rad3相关蛋白(ATR)-细胞周期检查点激酶1(Chk1)-p53-细胞周期素D1(Cyclin D1)通路相关蛋白以及凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)、caspase-3、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)表达。结果培养24、48 h时,1.0μmol·L^(-1) J32组、2.0μmol·L^(-1) J32组、4.0μmol·L^(-1) J32组细胞的迁移能力显著低于对照组(P<0.05),2.0μmol·L^(-1) J32组、4.0μmol·L^(-1) J32组细胞的迁移能力均显著低于1.0μmol·L^(-1) J32组(P<0.05),4.0μmol·L^(-1) J32组细胞的迁移能力显著低于2.0μmol·L^(-1) J32组(P<0.05)。0.5μmol·L^(-1) J32组、1.0μmol·L^(-1) J32组细胞的增殖能力显著低于对照组(P<0.05),1.0μmol·L^(-1) J32组细胞的增殖能力显著低于0.5μmol·L^(-1) J32组(P<0.05)。1.0μmol·L^(-1) J32组、2.0μmol·L^(-1) J32组、4.0μmol·L^(-1) J32组细胞的凋亡率显著高于对照组(P<0.05),2.0μmol·L^(-1) J32组、4.0μmol·L^(-1) J32组细胞的凋亡率显著高于1.0μmol·L^(-1) J32组(P<0.05),4.0μmol·L^(-1) J32组细胞的凋亡率显著高于2.0μmol·L^(-1) J32组(P<0.05)。1.0μmol·L^(-1) J32组、2.0μmol·L^(-1) J32组、4.0μmol·L^(-1) J32组细胞的活性氧水平显著高于对照组(P<0.05),2.0μmol·L^(-1) J32组、4.0μmol·L^(-1) J32组细胞的活性氧水平显著高于1.0μmol·L^(-1) J32组(P<0.05),4.0μmol·L^(-1) J32组细胞的活性氧水平显著高于2.0μmol·L^(-1) J32组(P<0.05)。1.0μmol·L^(-1) J32组、2.0μmol·L^(-1) J32组细胞的DNA损伤程度显著高于对照组(P<0.05),2.0μmol·L^(-1) J32组细胞的DNA损伤程度显著高于1.0μmol·L^(-1) J32组(P<0.05)。1.0μmol·L^(-1) J32组、2.0μmol·L^(-1) J32组细胞中G 1/S期细胞占比显著高于对照组(P<0.05),2.0μmol·L^(-1) J32组细胞中G 1/S期细胞占比显著高于1.0μmol·L^(-1) J32组(P<0.05)。对照组、1.0μmol·L^(-1) J32组、2.0μmol·L^(-1) J32组、4.0μmol·L^(-1) J32组细胞中,随着J32浓度的增加,磷酸化ATR/ATR值及磷酸化p53蛋白表达呈升高趋势(F=25.534、3.970,P<0.05),Chk1、CyclinD1蛋白表达呈降低趋势(F=19.532、0.485,P<0.05);促凋亡蛋白caspase-3、Bax的表达呈升高趋势(F=0.219、4.314,P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达呈下降趋势(F=0.324,P<0.05)。结论对映-贝壳杉烯型二萜类化合物J32可呈浓度依赖性地抑制胰腺癌SW1990细胞的迁移和增殖、促进细胞凋亡及提高细胞内活性氧水平,此外,J32可促进细胞发生DNA损伤及细胞周期阻滞,其作用机制可能与ATR-Chk1-p53-Cyclin D1通路相关。

尾叶香茶菜中对映-贝壳杉烯型二萜

尾叶香茶菜中对映－贝壳杉烯型二萜王艳红１）陈耀祖２）孙汉董３）金东史４）（１）中山大学化学与化学工程学院，广州５１０２７５；２）浙江大学化学系；３）中国科学院昆明植物研究所植化室；４）朝鲜国家科学院植物研究所）关键词唇形科，香茶菜属，尾叶香茶菜，对...

藏药小叶毛球莸中对映-贝壳杉烯型二萜类成分研究

目的:研究藏药小叶毛球莸的化学成分。方法:采用溶剂法和色谱法提取分离化学成分,并用波谱方法鉴定化学成分结构。结果:从藏药小叶毛球莸中分离得到2个对映-贝壳杉烯型二萜类化合物:冬凌草甲素(1)和nodosin(2),并首次报道了该两个化合物在甲醇(CD3OD)中的1H和13C-NMR数据。结论:对映-贝壳杉烯型二萜类化合物为首次从莸属植物中分离得到。

13-羟基-对映贝壳杉烯类二萜绝对构型的确定

通过系列１３羟基对映贝壳杉烯二萜的园二色散光谱的数据分析，提出一种确定对映贝壳杉烯二萜绝对构型的方法。

对映-贝壳杉烷型二萜Leukamenin E对人早幼粒白血病HL-60细胞分化的诱导作用

目的：研究对映-贝壳杉烷型二萜Leukamenin E对人早幼粒白血病HL-60细胞分化的诱导作用。方法：采用台盼蓝染色法、吉姆萨染色法、NBT还原力测定法、荧光颗粒吞噬法及流式细胞术分别检测0（空白对照）、0.3、0.6、0.9、1.2μmol/L的Leukamenin E及1.2μmol/L全反式维甲酸（ATRA）作用于HL-60细胞24、48、72、96 h后对细胞数目的影响,以及作用72 h后细胞核形态、NBT还原能力（以NBT阳性细胞率计）、细胞吞噬能力（以荧光探针P的荧光强度计）以及细胞表面抗原CD11b表达的改变情况。结果：与空白对照比较,0.3-1.2μmol/L的Leukamenin E及1.2μmol/L的ATRA作用48、72、96 h后HL-60细胞数目减少,且作用72 h后带状核细胞和分叶状核细胞数目增加（P〈0.01）,细胞NBT阳性细胞率和细胞表面CD11b表达水平增加（P〈0.01）,P荧光强度增强。结论：Leukamenin E可诱导HL-60向成熟粒细胞分化,与白血病分化治疗剂ATRA具有相似的分化诱导特点。

牛尾草中一新的对映-贝壳杉烷型二萜(英文)

从牛尾草 [Isodonternifolius (D .Don)Kudo]的地上部分分离得到一个新的对映 -贝壳杉烷型二萜 ,命名为牛尾草素H (1) ,通过波谱方法鉴定了它的结构。此外 ,还分离得到 5个已知的对映 -贝壳杉烷型二萜化合物 :香茶菜醛 (2 ) ,长管香茶菜素A ,E和G (3- 5 ) ,开展香茶菜素E (6 ) ,以及木樨草素 (7) ,芹菜素 (8) ,α -香树脂醇 (9) ,乌索酸 (10 )和2α -羟基乌索酸 (11)。

对映-贝壳杉烷型二萜类化合物对土壤纤毛虫群落的毒性效应

选取小陇山自然保护区麻沿林区的土壤纤毛虫并通过盆栽实验从纤毛虫的群落结构、丰度和食性三方面研究了对映-贝壳杉烷型二萜类化合物对纤毛虫群落的毒性作用。纤毛虫群落结构采用"非浸没式培养法"进行分析,物种鉴定采用活体观察和蛋白银染色法,同时采用直接计数法分析土壤纤毛虫的丰度。共鉴定到纤毛虫88种,隶属于3纲11目29科42属,其中对照组75种;分析表明二萜化合物可导致土壤纤毛虫群落结构的衰退演替;双因子方差分析显示纤毛虫物种数在二萜化合物各浓度处理组间呈现极显著差异(F5,9=137.776,P<0.01),并在不同时间处理组间呈显著差异(F5,9=2.607,P<0.05);线性回归分析显示土壤纤毛虫总物种数随着二萜类化合物浓度的升高有下降趋势,具有良好的直线线性关系(R2=0.9521)。当二萜类化合物浓度超过32.5 mg/kg时土壤纤毛虫优势种由膨胀肾形虫、长篮环虫、大口薄咽虫和长圆膜袋虫演替为膨胀肾形虫、长篮环虫、苔藓膜袋虫、水藓薄咽虫和大弹跳虫,且C/P系数从小于1变为大于1,当施药浓度超过62.5 mg/kg时,优势种演替为大弹跳虫、小尖毛虫、有肋薄咽虫和一种前口虫。同时,分析还显示肾形目对二萜化合物有较高的耐受能力,下毛目、前口目和篮口目对二萜类化合物有一定的耐受能力。对纤毛虫食性研究发现二萜类化合物对纤毛虫的影响还与纤毛虫的食性有关,尤其对肉食性纤毛虫危害最大。比较分析显示,在相同暴露时间,不同施药浓度下土壤纤毛虫丰度与对照组相比均有极明显的降低,而同一施药浓度,随着暴露时间逐渐延长,纤毛虫的数量逐渐回升,但即使土壤中二萜类化合物残留浓度很低,也对纤毛虫群落有显著的抑制作用。非参数多个独立样本检验分析结果表明各浓度组间纤毛虫的丰度存在极显著差异。结果表明,不同浓度的对二萜化合物对土壤纤毛虫群落结构在种类组成和丰度方面均成具有强烈的扰动作用。

疏花毛萼香茶菜中一新的对映-贝壳杉烷型二萜(英文)

从疏花毛萼香茶菜 (Isodoneriocalyxvar.laxiflora)叶中分离得到一新的对映 -贝壳杉烷型二萜 ,命名为疏花丁素 (1) ,通过波谱方法鉴定了它的结构。此外 ,还分离得到 6个已知对映 -贝壳杉烷型二萜化合物 :疏花甲素 (2 ) ,毛萼晶A -C (3～ 5)和Q (6 ) ,毛萼乙素(7) ,以及cirsimaritin (8)和 2α -羟基乌索酸 (9)。

旱生香茶菜中三个新的对映 -贝壳杉烷型二萜(英文)

从旱生香茶菜 (Isodonxerophilus)叶中分离得到 3个新的对映 -贝壳杉烷型二萜 ,旱生香茶菜素G ,H和I。通过波谱方法鉴定了它们的结构。

对映-贝壳杉烯二萜分子内氢键对6,7位羟基化学反应性影响研究

对映-贝壳杉烯二萜分子在激烈条件下进行乙酰化反应,反应发生在半缩醛羟基,而非仲羟基上;该反常现象的产生可能是由于6位仲羟基与15位羰基之间形成了分子内氢键,本文根据~1H NMR变温实验观察分子在不同温度时6位和7位羟基质子的化学位移变化值△δ/T(H_z·K^(-1)),证明了上述假定。

冬凌草中的新对映-贝壳杉烷二萜化合物

对河南省济源地区产冬凌草 [Isodonrubescens (Hemsl.)Hara]再次进行了深入的研究 ,从其叶的乙酸乙酯提取物中分离得到了 16个化合物 ,其中 1和 2为两个新的 7,2 0 环氧 -对映 -贝壳杉烷类二萜化合物 ,其结构通过波谱分析确定为16(S) 羟甲基 1α ,6β ,7β ,11β 四羟基 7α ,2 0 环氧 -对映 -贝壳杉烷 15 酮 (1)和 16(R) 羟甲基 1α ,6β ,7β ,14 β 四羟基 7α ,2 0 环氧 -对映 -贝壳杉烷 15 酮 (2 ) ,分别命名为冬凌草己素 (1)和庚素 (2 ) ;其余的已知化合物分别鉴定为lasiodonin (3) ,冬凌草甲素 (oridonin ,4) ,乙素 (ponicidin) ,丙素 (rubescensinC) ,丁素 (rubescensinD) ,牛尾草丙素 (rabdoterninC) ,荛花香茶菜乙素 (wikstroemioidinB) ,enmenol 1α O β D glucoside ,enmenol,胡麻素 (pedalitin) ,水杨酸 ,乌索酸 ,β

贵州冬凌草中的对映-贝壳杉烷二萜化合物

从贵州产冬凌草[Isodon rubescens(Hemsl.)Hara]中分离得到12个6,7-断裂-7,20-内酯-对映-贝壳杉烷二萜化合物,经波谱分析鉴定了它们的结构,其中有7个新化合物,分别命名为贵州冬凌草乙素～辛素(guidongnins B～H,1～7),以及卢氏冬凌草甲素(8)、卢氏冬凌草乙素(9)、贵州冬凌草素(10)、狭叶香茶菜素(angustifolin,11)和6-表狭叶香茶菜素(6-epiangustifolin,12)等5个已知化合物.另外,将作者原命名的贵州冬凌草素(guidongnin,10)更名为贵州冬凌草甲素(guidognin A,10),并利用二维核磁共振波谱技术修订了卢氏冬凌草乙素的结构.

对映-贝壳杉烷二萜化合物Rabdosin B对人肝癌细胞HepG2生长的影响

采用显微观察法、生长曲线法检测RabdosinB对人肝癌细胞HepG2的增殖抑制和致死效应；同时采用考马斯亮蓝染色法检测该化合物对与细胞贴壁性相关的应力纤维的影响，以探讨对映-贝壳杉烷二萜化合物RabdosinB对人肝癌细胞HepG2的增殖影响及致其死亡的作用．研究结果表明：RabdosinB低浓度条件下（3．125～12．5μmol·L^-1），人肝癌细胞HepG2增殖受到明显的抑制；高浓度条件下（25～50μmol·L^-1），处理时间为0～24h时，HepG2细胞的增殖被完全抑制；当药物持续处理24～60h时，细胞显示出明显的致死效应，其中25μmol·L^-1处理组细胞显示了凋亡特征，而50μmol·L^-1处理组则显示了坏死现象．细胞的应力纤维随药物浓度增加，其数量逐渐减少，最后降解．由此所得结论是：RabdosinB表现了显著的细胞毒性，在低浓度条件下抑制细胞生长，高浓度条件下可通过凋亡和坏死途径致细胞死亡．其机理尚需进一步研究．

细胞体系和非细胞体系下对映-贝壳杉烷二萜化合物Rabdosin B对DNA损伤作用的研究

采用单细胞凝胶电泳法检测Rabdosin B在细胞体系下对人肝癌细胞HepG2 DNA的损伤作用,运用紫外光谱、圆二色谱和琼脂糖凝胶电泳法检测该化合物在非细胞体系下对小牛胸腺DNA空间结构的影响.结果表明,6～15μmol.L-1 Rabdosin B处理HepG2细胞24 h和48 h后,细胞DNA损伤率与对照组相比其差异极显著,并呈时间及浓度依赖性.在非细胞体系下,较低浓度（1～50μmol.L-1）Rabdosin B对小牛胸腺DNA有一定的损伤作用,表现为嵌插和解旋;而较高浓度（10～25 mmol.L-1）的Rabdosin B对pBR322 DNA有较强的切割作用.二萜化合物Rabdosin B对人肝癌细胞HepG2 DNA的损伤作用极可能是抑制HepG2细胞生长和启动细胞凋亡程序的直接诱因.

对映-贝壳杉烷二萜Leukamenin E对人早幼粒白血病细胞HL-60生长抑制及凋亡诱导的影响

利用台盼蓝排染法检测Leukamenin E对HL-60细胞生长的抑制作用；在倒置显微镜及荧光显微镜下分别检测细胞和细胞核形态变化；进一步采用流式细胞术和AO/EB荧光双染法检测Leukamenin E对 HL-60细胞周期分布的影响及诱导细胞凋亡的作用．结果表明，化合物Leukamenin E对HL-60细胞生长有很强的抑制作用，在低浓度和短时间条件下抑制 HL-60细胞的生长，高浓度（2.1～2.7μmol·L -1）及长时间（＞36 h）条件下对细胞具有致死作用，呈时间-剂量依赖性；1.5～2.7μmol·L -1 Leukamenin E处理24 h和48 h均引起了HL-60细胞显著的S期阻滞，同时产生显著的细胞凋亡（P＜0.01），且存在时间-剂量效应；与对照组相比， Leukamenin E处理组产生肾形核，并伴随有多核的产生．

刺齿凤尾蕨中对映-贝壳杉烷二萜类化学成分研究

目的研究刺齿凤尾蕨中的对映-贝壳杉烷二萜类化学成分。方法将刺齿凤尾蕨用95%乙醇提取后,通过有机溶剂萃取,提取液过聚酰胺树脂,中、高压制备液相色谱等多种色谱技术得到单体化合物。运用NMR、ESI-MS等波谱学技术进行结构鉴定。研究各单体化合物对皮质酮诱导PC12细胞损伤的保护作用。结果从该植物提取物中分离并鉴定了10个二萜类化合物,分别为ent-kaurane-16β,17,19-triol-3-one(1),broussonetone A(2),broussonetone B(3),3α-angeloyloxy-17-hydroxyentkaur-15-en^(-1)9-oic acid(4),3α-tigloyloxy-17-hydroxy-ent-kaur-15-en^(-1)9-oic acid(5),tricalysiolide C(6),tricalysiolide D(7),12α-(β-D-glucopyranosyloxy)-7β-hydroxykaurenolide(8),7β-(β-Dglucopyranosyloxy)-12α-hydroxykaurenolide(9)和acantrifoside D(10)。化合物8、9和10对皮质酮诱导PC12细胞损伤具有较强的保护作用。结论化合物1~10,均首次从刺齿凤尾蕨中分离获得。

不同产地半边旗中11β-羟基-15-氧-对映贝壳杉-16-烯-19-酸19-β-D-葡萄糖的含量测定

目的:建立半边旗中11β-羟基-15-氧-对映贝壳杉-16-烯-19-酸19-β-D-葡萄糖的含量测定方法。方法:采用HPLC法,ODSC18柱(25mm×4.6mm,5μm);流动相为甲醇-4mM的醋酸铵水溶液(2∶3),流速为1.0ml.min-1,检测波长为242nm。结果:11β-羟基-15-氧-对映贝壳杉-16-烯-19-酸19-β-D-葡萄糖在0.8～4.8μg范围内呈良好的线性关系(r=0.9998);半边旗中11β-羟基-15-氧-对映贝壳杉-16-烯-19-酸19-β-D-葡萄糖的含量,广东湛江产最高,为4.609mg·g-1生药,广东廉江最低为1.515mg·g-1生药。结论:本方法简便、可靠,适用于半边旗中11β-羟基-15-氧-对映贝壳杉-16-烯-19-酸19-β-D-葡萄糖的含量测定。

对映-贝壳杉烷二萜化合物KamebacetalA诱导人肝癌细胞Hep-G2凋亡的荧光检测

目的:验证香茶菜中天然二萜化合物具有诱导细胞凋亡及抑制肿瘤生长的作用。方法:选用二萜化合物Kamebaceta-l A对Hep-G2细胞进行诱导,Hoechst33258荧光染色,观察细胞凋亡情况。结果:低浓度药物处理细胞72h,即出现早期凋亡形态特征,中浓度药物处理24h,即出现典型的凋亡小体。高浓度药物处理细胞72h,细胞已完全崩解成碎片。结论:二萜化合物Kamebac-etal A具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用,且凋亡细胞的形态学特征随药物浓度的升高和处理时间的延长而愈加明显。

圆滑番荔枝树皮中一个新的贝壳杉烷型二萜

对番荔枝科植物圆滑番荔枝(Annona glabraL inn.)树皮的化学成分进行了研究,分离得到一个新的贝壳杉烷型二萜。树皮15 kg,95%乙醇回流提取3次,每次2 h。浸膏混悬于适量水中,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取。所得乙酸乙酯部分再经过反复硅胶柱层析及重结晶后,得到一个贝壳杉烷型二萜类化合物1,经理化及波谱分析,其结构确证为一个新的贝壳杉烷型二萜,命名为:16α-羟基-17-乙酰氧基-对映-贝壳杉烷-19-羧酸。

新型对映-贝壳杉烷二萜化合物jaridonin体外抗肿瘤活性及其作用机制探讨

目的研究新型二萜类化合物jaridonin体外抗肿瘤活性及其诱导癌细胞凋亡的部分作用机制。方法采用噻唑蓝(MTT)法检测jaridonin对HeLa、Spc-A1、HT-29、EC-1等4种人癌细胞株增殖抑制作用并计算IC50值,光学显微镜进行细胞形态学观察,流式细胞术分析其对细胞周期、细胞凋亡以及线粒体膜电位的影响,Western blot法检测jaridonin对细胞凋亡通路相关蛋白表达的影响。结果 Jaridonin能较好抑制4种癌细胞的增殖,并能显著诱导细胞凋亡。Jaridonin作用于EC-1细胞后明显引起G2/M期细胞周期阻滞,上调p53,Bax,p21和p27蛋白表达水平,使线粒体膜电位下降以致细胞色素C从线粒体释放到细胞质,活化caspase-9和caspase-3,诱导细胞凋亡。结论 Jaridonin对食管癌细胞有明显的抑制生长及诱导凋亡作用,其作用机制可能与诱导细胞周期阻滞以及激活线粒体凋亡途径有关。