针灸治疗对氯苯丙氨酸(PCPA)失眠模型大鼠基础研究进展

针灸干预治疗对氯苯丙氨酸(PCPA)诱导失眠模型大鼠的实验文献进行搜集、整理,发现与针灸改善失眠作用相关的基础研究主要集中在动物行为学、免疫功能、神经递质系统、氧化应激反应等方面,研究表明针灸是通过对这些异常的生物学行为或微观分子产生良性调节作用,以神经-体液调节为基础的多靶点、多途径发挥改善睡眠作用。本研究对这些研究文献进行综述,一方面表明了针灸促眠作用的有效性,为临床治疗提供依据,另一方面分析了当前探索针灸改善睡眠机制研究中存在的问题和不足,并对今后的研究提出了建议和期望。

酸枣仁、石菖蒲、夜交藤、百合、郁金5味中药对对氯苯丙氨酸致失眠模型大鼠睡眠作用的影响

目的观察酸枣仁、石菖蒲、夜交藤、百合、郁金5味中药对失眠模型大鼠睡眠作用的影响。方法大鼠腹腔注射对氯苯丙氨酸(PCPA)混悬液制备大鼠失眠模型。将造模成功大鼠随机分为模型对照组、地西泮组、酸枣仁组、石菖蒲组、夜交藤组、百合组、郁金组,另设空白对照组。地西泮组(1 g/kg)、酸枣仁组(18 g/kg)、石菖蒲组(12 g/kg)、夜交藤组(18 g/kg)、百合组(14.4 g/kg)、郁金组(12 g/kg)大鼠连续7 d给予相应浓度药液,模型对照组和空白对照组连续7 d给予生理盐水灌胃。给药期间,观察大鼠一般状态;给药结束后,观察大鼠体质量变化、睡眠潜伏期、总睡眠时间。结果地西泮组、酸枣仁组、夜交藤组、百合组、郁金组、石菖蒲组大鼠的睡眠潜伏期明显短于模型对照组,其中地西泮组、酸枣仁组、夜交藤组、百合组大鼠的睡眠潜伏期有显著性缩短(P<0.01);地西泮组、酸枣仁组、百合组、郁金组大鼠的睡眠持续时间明显长于模型对照组,其中地西泮组大鼠的睡眠持续时间延长最显著(P<0.01),酸枣仁组、百合组、郁金组有延长趋势。结论酸枣仁、石菖蒲、夜交藤、百合、郁金单味药对改善失眠大鼠模型睡眠作用具有一定效果,但尚需进一步深入研究。

黄连温胆汤对氯苯丙氨酸致失眠小鼠的睡眠改善及γ-氨基丁酸能系统通路递质含量及受体表达的影响

目的观察黄连温胆汤对氯苯丙氨酸(PCPA)致失眠小鼠的睡眠改善作用及对γ-氨基丁酸(GABA)能系统通路相关受体及递质的影响,探讨其治疗失眠的作用机制。方法将48只雄性KM小鼠随机分为空白组、模型组、地西泮组(2 mg·kg^(-1))及黄连温胆汤低、中、高剂量组(8.45、16.90、33.80 g·kg^(-1))。除空白组外,其余各组小鼠均腹腔注射450 mg·kg^(-1)PCPA(每日1次,连续2 d)建立小鼠失眠模型。造模成功后,各组小鼠灌胃给予相对应药物,每日1次,连续灌胃7 d。观察记录各组小鼠的活动次数、体质量及戊巴比妥钠阈上剂量诱导的睡眠潜伏期、睡眠时间;采用ELISA法测定小鼠脑组织中谷氨酸(GLU)、GABA含量,计算GLU/GABA比值;采用免疫组织化学法测定脑组织中谷氨酸脱羧酶65/67(GAD65/67)、γ-氨基丁酸转运蛋白亚型1(GAT-1)、γ-氨基丁酸A受体α1亚型(GABA ARα1)、γ-氨基丁酸A受体γ-2亚型(GABA ARγ-2)及Na+-K+-Cl-协同转运蛋白1(NKCC1)的表达情况;采用Western Blot法测定小鼠脑组织中GAD65/67、GABA ARα1及NKCC1蛋白的表达情况。结果与空白组比较,模型组小鼠戊巴比妥钠阀上剂量诱导的睡眠潜伏期显著延长(P<0.01),睡眠时间显著缩短(P<0.01),活动次数显著增加(P<0.01),体质量显著降低(P<0.01),脑组织中的GABA含量明显下降(P<0.05),GLU含量及GLU/GABA比值显著升高(P<0.01),脑组织中GAD65/67、GABA ARα1蛋白表达显著下调(P<0.01),NKCC1蛋白表达显著上调(P<0.01)。与模型组比较,黄连温胆汤可有效缩短戊巴比妥钠阀上剂量诱导的小鼠睡眠潜伏期(P<0.05,P<0.01),并延长小鼠睡眠时间(P<0.01),减少造模后小鼠活动次数(P<0.01),使体质量显著上升(P<0.05,P<0.01),升高脑组织中的GABA含量(P<0.01),降低GLU含量及GLU/GABA比值(P<0.01),并显著上调脑组织中GAD65/67、GAT-1、GABA ARα1、GABA ARγ-2蛋白表达(P<0.01),下调NKCC1蛋白表达(P<0.01)。结论黄连温胆汤具有较好的镇静催眠作用,对PCPA致失眠小鼠有睡眠改善作用,可能与其调节小鼠脑内GABA能系统通路神经递质含量及受体表达有关。

基于步态分析系统的DL-4-氯苯基丙氨酸致大鼠失眠模型的研究

目的研究DL-4-氯苯基丙氨酸(4-Chloro-DL-phenylalanine,PCPA)致失眠大鼠的步态行为变化。方法采用每天一次连续两天腹腔注射PCPA(300 mg/kg)建立失眠大鼠模型,检测模型动物行为学变化,并记录其步态行为学变化。结果与正常对照动物比较,第三天,PCPA致失眠大鼠自主活动明显升高(P<0.001),第六天无明显差异(P>0.05);第三、第六两天步速明显降低、步行周期明显升高、步幅明显下降、步宽明显减少(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论 PCPA致失眠大鼠模型,自主活动明显增加,步态行为学出现异常,主要体现在步速、步行周期、步幅、步宽、侧向移动标准偏差等指标上,可为评价失眠动物模型提供依据。

食醋调吴茱萸穴位贴敷对氯苯丙氨酸失眠大鼠在体皮肤的渗透过程及作用机制研究

目的探讨食醋调吴茱萸穴位贴敷对对氯苯丙氨酸(PCPA)所致失眠大鼠在体皮肤渗透过程及作用机制。方法SPF级7周龄SD雄性健康大鼠162只分成正常组,模型组,阳性对照组(地西泮1 mg/kg,10 ml/kg),食醋调吴茱萸小、中、大剂量组(剂量为2、4、8 g/kg;每组分为涌泉穴组和神阙穴组)。正常组、模型组和阳性对照组(地西泮)每组10只,其余各组22只,其中10只用于观察脑组织神经递质γ-氨基丁酸(GABA)含量及GABAA1 mRNA表达,另外12只用于观察食醋调吴茱萸穴位贴敷对大鼠在体皮肤的渗透过程。除正常组外其余各组均使用PCPA法造模。给药组每天贴敷给药4 h,连续给药7 d后,获取大鼠脑组织标本,采用酶联免疫吸附试验法检测神经递质GABA含量,采用实时荧光定量PCR检测GABAA1 mRNA的表达水平。第7天给药结束后1 h(T_(1))、给药结束后4 h(T_(2))、给药结束后8 h(T_(3)),以及贴敷给药8 h清除药物后1 h(T_(4)),取大鼠涌泉穴、神阙穴部位皮肤制作冰冻切片,用激光共聚焦显微镜观察食醋调吴茱萸穴位贴敷的在体皮肤渗透过程。结果与模型组比较,食醋调吴茱萸穴位贴敷大、中、小剂量组大鼠下丘脑、脑干、海马GABA含量升高,差异有统计学意义(P<0.05);食醋调吴茱萸穴位贴敷中、高剂量组大鼠下丘脑、脑干、海马GABAA1 mRNA表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。两个穴位食醋调吴茱萸穴位贴敷大、中、小剂量组组内不同时间点平均荧光强度比较,差异有统计学意义(P<0.05);两个穴位食醋调吴茱萸穴位贴敷大、中、小剂量组T_(1)~T_(4)时平均荧光强度比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论食醋调吴茱萸穴位贴敷具有改善失眠的作用,其作用机制可能与上调脑组织GABA含量及GABAA1 mRNA的表达水平有关。食醋调吴茱萸穴位贴敷具有良好的经皮渗透性。

五味子对对氯苯丙氨酸致失眠大鼠Toll样受体7信号通路相关基因mRNA表达的影响

目的:研究五味子对对氯苯丙氨酸(PCPA)致失眠大鼠Toll样受体7(TLR7)信号通路相关基因mRNA表达的影响。方法:将32只大鼠随机分为空白组、模型组、五味子组、安定组,每组8只。模型组、五味子组、安定组大鼠腹腔注射PCPA建立失眠模型。五味子组给予五味子提取物灌胃,安定组给予地西泮混悬液灌胃,余组不予处理。采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测各组大鼠脾脏TLR7、干扰素调节因子7(IRF7)、干扰素α(IFN-α)的mRNA水平。结果:造模后,模型组大鼠体质量下降,出现毛少无光、易受惊、烦躁易怒、昼夜节律消失等现象。模型组、安定组大鼠体质量均低于空白组(P<0.05)。给予五味子提取物灌胃后,五味子组与空白组大鼠体质量比较,差异无统计学意义(P>0.05),两组大鼠身体状态均相对较好,毛发有光泽,白天安静倦卧,无烦躁、易怒等症状。荧光定量PCR仪检测结果显示,模型组TLR7、IRF7、IFN-α的mRNA表达水平均明显高于空白组(P<0.01);五味子组、安定组TLR7、IRF7 mRNA表达水平均明显低于模型组(P<0.01);安定组IFN-α mRNA水平低于模型组(P<0.05)。结论:五味子能改善PCPA诱导失眠大鼠的睡眠,其机制可能是通过下调TLR7信号通路的相关基因发挥治疗作用。

百合水提物对对氯苯丙氨酸失眠模型大鼠睡眠改善作用研究

目的研究不同剂量的百合水提取物对对氯苯丙氨酸(p-chlorophenylalanine,PCPA)失眠模型大鼠睡眠的改善作用。方法大鼠腹腔注射PCPA混悬液制备大鼠失眠模型。造模成功大鼠随机分为模型对照组、百合水提物低剂量组[100 mg/(kg·d)]、百合水提物中剂量组[200 mg/(kg·d)]、百合水提物高剂量组[300 mg/(kg·d)],另设正常对照组。各给药组大鼠连续7 d给予相应浓度药液灌胃,模型对照组和正常对照组连续7 d给予生理盐水灌胃。给药期间,观察大鼠一般状态;给药结束后,观察大鼠体质量变化、睡眠潜伏期、总睡眠时间,同时评价不同脑组织中五羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)、5-羟基吲哚乙酸(5-hydroxyindole acetic acid,5-HIAA)、多巴胺(dopamine,DA)含量的变化。结果百合水提物各剂量组大鼠的一般状态均优于模型对照组,体质量增加量与正常对照组无显著差异(P>0.05);与模型对照组相比,百合水提物低、中、高各剂量组的睡眠时间显著延长(P<0.05),延长率分别为50.14%、54.02%、60.19%,且各组大鼠不同脑组织中的5-HT含量显著升高(P<0.05,P<0.01);百合水提物中、高剂量组的睡眠潜伏期显著缩短(P<0.05),缩短率分别36.51%、38.73%,两个组大鼠不同脑组织中的5-HIAA含量显著升高(P<0.05,P<0.01),下丘脑、中缝核中的DA含量显著降低(P<0.05);与模型对照组比较,海马中仅百合水提物高剂量组的DA含量显著降低(P<0.05)。结论百合水提物具有改善PCPA失眠模型大鼠睡眠情况的作用。

中药治疗对氯苯丙氨酸失眠模型大鼠影响的基础研究进展

失眠作为一种常见的疾患,给人们的正常工作和生活带来严重的不良影响,甚至会诱发或加重多种身体疾病。目前催眠镇静的药物以苯二氮卓类和巴比妥类为主,虽起效快,但均可引起不可避免的不良反应。大量研究表明中药治疗失眠具有无成瘾性、依赖性等特点。腹腔注射氯苯丙氨酸是目前常用的失眠造模方法,通过搜集、整理中药对PCPA诱导失眠模型大鼠影响的实验文献,从动物行为学改变及作用机制等方面进行阐述,以期为研究者更深入地研究中药治疗失眠的机制提供参考。

花生红衣水提物对对氯苯丙氨酸失眠模型大鼠神经递质的影响

目的观察花生红衣水提物对对氯苯丙氨酸(PCPA)所致失眠模型大鼠的治疗作用并探讨其可能的作用机制。方法60只SD雄性大鼠,随机分为正常对照组、模型对照组、地西泮阳性对照组、花生红衣水提取物高、中、低剂量(650、325、162.5 mg/kg)组,每组10只。除正常对照组外,其余各组均采用腹腔注射400 mg/kg对氯苯丙氨酸(PCPA)混悬液,制备失眠大鼠模型,连续注射3 d,大鼠昼夜节律消失,模型制备成功。造模成功后花生红衣水提物高、中、低剂量组,阳性药组,按照1 mL/100 g体重灌胃给药,正常对照组与模型对照组给予等体积生理盐水灌胃,连续7 d,观察记录各组大鼠实验期间睡眠潜伏期、睡眠时间和体质量的变化。ELISA法测定各组大鼠下丘脑中神经递质5⁃羟色胺(5⁃HT)、褪黑素(MT)的含量。结果与正常对照组相比,模型组大鼠睡眠潜伏期明显延长(P<0.05),睡眠时间显著缩短(P<0.05),脑组织中5⁃HT和MT含量均明显减少(P<0.05)。与模型组相比,花生红衣水提取物(高、中、低)剂量组和阳性对照组大鼠,睡眠潜伏期明显缩短(P<0.05),睡眠时间显著延长(P<0.05);可显著升高脑组织中5⁃HT和MT的含量(P<0.05)。结论花生红衣水提取物可改善由PCPA引起的失眠,其作用机制可能与提高大鼠下丘脑组织中5⁃HT和MT的含量有关,为花生红衣水提物治疗失眠提供了实验依据。

射干制剂对氯苯丙氨酸致失眠大鼠单胺类神经递质的影响

探讨射干制剂对氯苯丙氨酸致失眠大鼠单胺类神经递质的影响。方法:选取60只SD大鼠按随机数字表法将其分为空白组、模型组、朱砂安神丸组、射干制剂低剂量、中剂量组和高剂量组,每组10只。除空白组外,其余各组大鼠均建立失眠模型,建立成功后,除空白组和模型组给予蒸馏水灌胃,其余各组均给予相应的药物灌胃。比较各组大鼠脑组织5-羟色胺(5-HT)、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)、多巴胺(DA)和去甲肾上腺素(NA)水平。结果:射干制剂组大鼠脑组织5-HT、5-HIAA含量高于模型组(P0.05),DA、NA含量低于模型组(P0.05);射干制剂高剂量组大鼠脑组织5-HT、5-HIAA含量高于朱砂安神丸组(P0.05),NA含量低于朱砂安神丸组(P0.05),射干制剂中剂量组与朱砂安神丸组比较相当(P>0.05)。结论:射干制剂高剂量治疗失眠症状较朱砂安神丸以及中低剂量药物浓度作用效果更好,值得临床应用。

酸枣仁汤对DL-4-氯苯基丙氨酸所致失眠的药效学研究

目的:探讨酸枣仁汤治疗DL-4-氯苯基丙氨酸所致失眠大鼠的药理作用机制。方法:将50只大鼠随机分为正常对照组、模型组、地西泮组、酸枣仁汤大剂量组、酸枣仁汤小剂量组,每组10只,适应性喂养2 d,2 d后开始给药,并每天称体质量,大剂量组灌胃给予酸枣仁汤12 g·kg^(-1),小剂量组灌胃给予酸枣仁汤6 g·kg^(-1),地西泮组灌胃给予地西泮溶液1 mg·kg^(-1),正常对照组与模型组根据体质量灌胃等体积蒸馏水。建立DL-4-氯苯基丙氨酸(PCPA)大鼠失眠模型,观察酸枣仁汤对失眠大鼠自主活动次数的影响,Elisa法检测其脑内5-羟色胺(5-hydroxytvyptarmne,5-HT)、谷氨酸(glutamate,GLU)、伽马氨基丁酸(gamma amino butyric acid,GABA)、去甲肾上腺素(noradren dline,NE)及其代谢产物五羟吲哚乙酸(5-HIAA)的含量。结果:与模型组比较,地西泮组、酸枣仁汤大剂量组、酸枣仁汤小剂量组大鼠自主活动次数高于模型组,但差异无统计学意义(P>0.05);酸枣仁汤大剂量组、酸枣仁汤小剂量组5-HT、5-HIAA、GABA、GLU、NE的含量均有明显变化,与模型组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:酸枣仁汤小剂量组可以明显改善PCPA所致失眠对大鼠的影响,主要体现在大鼠自主活动次数的增加,以及5-HT、5-HIAA等指标的恢复。

酸枣仁汤对PCPA致失眠大鼠大脑皮质代谢型谷氨酸受体mGluR1、mGluR2的影响

目的:观察对氯苯丙氨酸(PCPA)致失眠大鼠大脑皮质中代谢型谷氨酸受体mGluR1、mGluR2表达的改变情况,以及酸枣仁汤(SZRD)对PCPA所致失眠大鼠脑皮质中代谢型谷氨酸受体mGluR1、mGluR2表达的影响,探讨酸枣仁汤治疗失眠可能的作用机制。方法:将36只SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、SZRD对照组、SZRD高剂量组15g/(kg·d)、SZRD中剂量组7.5g/(kg·d)、SZRD低剂量组3.75g/(kg·d),每组6只。采取腹腔注射PCPA的方法建立失眠大鼠模型,各组灌胃相应药物7天后,取大脑皮质,采用免疫组织化学染色法检测mGluR1、mGluR2表达情况。结果:PCPA模型组大鼠大脑皮质中mGluR1、mGluR2的表达明显增高,与空白对照组比较差异具有统计学意义(P<0.01)。SRZD高、中、低剂量组大鼠大脑皮质中mGluR1、mGluR2表达均降低,SZRD高剂量组大鼠大脑皮质中mGluR1、mGluR2的表达与PCPA模型组比较差异具有统计学意义(P<0.01)。SZRD中剂量组大鼠大脑皮质中mGluR1、mGluR2的表达与PCPA模型组比较差异具有统计学意义(P<0.01)。SZRD低剂量组大鼠mGluR1的表达与PCPA模型组比较差异无统计学意义(P>0.05),而两组mGluR2表达比较差异具有统计学意义(P<0.01)。SZRD对照组大鼠大脑皮质中mGluR1、mGluR2的表达与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:PCPA致失眠大鼠大脑皮质中mGluR1、mGluR2的表达量升高,酸枣仁汤能调节PCPA所致失眠大鼠脑皮质中mGluR1、mGluR2的表达,提示酸枣仁汤治疗失眠的机制可能与激活大鼠脑皮质内谷氨酸受体的表达有关。

松郁安神方对失眠大鼠脑组织氨基酸类神经递质的影响

目的观察松郁安神方对氯苯丙氨酸(PCPA)致失眠大鼠脑组织谷氨酸(Glu)及γ-氨基丁酸(GABA)含量的影响,探讨其治疗失眠可能的作用机制。方法腹腔注射PCPA建立大鼠失眠模型,造模成功后,连续7d用松郁安神方进行灌胃。高效液相色谱法检测对照组、PCPA模型组及松郁安神方高、低剂量治疗组大鼠大脑皮层Glu和GABA含量。结果与对照组比较,模型组大鼠皮层Glu和GABA含量升高,Glu增加比较明显(P<0.001),且Glu/GABA比例增大(P<0.05);经松郁安神方干预后Glu均明显下降,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.01),且Glu/GABA比例显著减小(P<0.05)。结论松郁安神方具有镇静安神作用,其机制可能与调节兴奋性氨基酸神经递质的含量有关。

失眠模型大鼠脑干γ-氨基丁酸转运体-1表达的变化

目的检测失眠模型大鼠脑干组织中γ-氨基丁酸转运体-1(GAT-1)mRNA及GAT-1蛋白的表达变化。方法36只SD大鼠随机分为失眠模型组、生理盐水对照组和地西泮干预组。腹腔注射对氯苯丙氨酸(PCPA)制作大鼠失眠模型。采用RT-PCR法和Western blot法分别检测大鼠脑干组织中GAT-1 mRNA和GAT-1蛋白的表达变化。结果与对照组相比,模型组和干预组GAT-1 mRNA及GAT-1蛋白的表达均降低(P<0.01),干预组较模型组表达更低(P<0.01)。结论脑干GAT-1表达下调可能与失眠后机体的保护性机制有关;地西泮下调GAT-1可能是其发挥催眠作用的机制之一。

滋阴养血安神方对PCPA诱导失眠小鼠睡眠的影响

目的:探讨滋阴养血安神方对睡眠剥夺小鼠睡眠的影响及其机制。方法:利用腹腔注射对氯苯丙氨酸(PCPA)制造睡眠剥夺模型,模定失眠小鼠戊巴比妥钠致睡眠的阈下及阈上剂量,分6组,空白对照组、模型组、滋阴养血安神方低剂量组(73 g/kg)、滋阴养血安神方中剂量组(146 g/kg)、滋阴养血安神方高剂量组(292 g/kg)、地西泮组(1.5 mg/kg),造模并给药7 d后,给予戊巴比妥钠诱导睡眠,观察对小鼠睡眠的影响,并检测小鼠海马5-羟色胺(5-HT)含量。结果:滋阴养血安神方可增加阈下剂量戊巴比妥钠小鼠睡眠个数,缩短阈上剂量戊巴比妥钠的小鼠入睡潜伏期,与模型组对比有显著性差异(P<0.01),能延长阈上剂量戊巴比妥钠诱导的睡眠时间,与模型组对比有显著性差异(P<0.01);滋阴养血安神方高剂量组小鼠脑内5-HT含量显著高于模型组,与模型组对比有显著性差异(P<0.05)。结论:滋阴养血安神方具有镇静、催眠作用,对失眠症的有一定的治疗作用,其对小鼠睡眠的影响机制之一可能是通过升高脑内海马5-HT含量实现的。

滋阴养血安神方对PCPA诱导的失眠小鼠GABA能系统通路递质含量及受体表达的影响

目的:探讨滋阴养血安神方对睡眠剥夺小鼠GABA能系统氨基酸递质含量、受体表达及GAD67酶蛋白表达的影响。方法:利用腹腔注射氯苯丙氨酸(PCPA)制造睡眠剥夺模型,分6组,空白对照组、模型组、滋阴养血安神方低剂量组(73 g/kg)、滋阴养血安神方中剂量组(146 g/kg)、滋阴养血安神方高剂量组(292 g/kg)、地西泮组(2 mg·kg^-1·d^-1),造模并给药7 d后,检测小鼠下丘脑GABA受体GABAARα1蛋白表达及mRNA表达,检测下丘脑组织中关键酶GAD67蛋白含量。结果:滋阴养血安神方可提高GABAARα1、GAD67蛋白表达及GABAARα1mRNA表达(P<0.05)。结论:滋阴养血安神可以通过GABA能系统通路影响PCPA诱导的失眠小鼠GABAARα1、GAD67蛋白表达及GABAARα1mRNA表达影响PCPA诱导的失眠小鼠睡眠。

不同波形电针对PCPA致失眠大鼠下丘脑5-HT和GLu、GABA含量的影响

目的观察电针不同波形刺激对氯苯丙氨酸(PCPA)致失眠大鼠下丘脑5-羟色胺(5-HT)及谷氨酸(Glu)、?-氨基丁酸(GABA)含量的影响,探讨电针不同波形刺激对失眠的效应差异及作用机制。方法将50只SD大鼠随机分为正常组10只、模型组10只和电针组30只。电针组再随机分为电针1组、电针2组和电针3组,每组10只。除正常组外,其余各组大鼠均用PCPA建立大鼠失眠模型。各电针组均进行电针治疗,其中电针1组采用疏波,电针2组采用密波,电针3组采用疏密波。治疗6 d后,脱颈处死各组大鼠,采用酶联免疫吸附法测定下丘脑中5-HT、Glu、GABA含量。结果与空白组比较,模型组大鼠脑内5-HT含量明显减少(P<0.01);与模型组比较,3组电针组大鼠脑内5-HT含量均增加(P<0.01)。电针2组和电针3组大鼠脑内5-HT含量与电针1组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。电针3组大鼠脑内5-HT含量与电针2组比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。与空白组比较,模型组大鼠大脑皮质Glu、GABA含量均明显增高(P<0.01),Glu/GABA比值增大(P<0.01);与模型组比较,3组电针组大鼠大脑皮质Glu、GABA含量均显著减少(P<0.01),Glu/GABA比值减小(P<0.01)。电针2组和电针3组大鼠大脑皮质Glu、GABA含量与电针1组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。电针3组大鼠大脑皮质Glu、GABA含量与电针2组比较,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论电针可以调节失眠大鼠下丘脑内单胺类神经递质5-HT和氨基酸类神经递质Glu及GABA含量,减少脑内氨基酸毒性,从而发挥治疗失眠的作用。其中疏波电针治疗效果优于密波和疏密波。

探讨半夏-薏苡仁对PCPA失眠模型大鼠海马食欲素及其受体和血清细胞因子的调控作用

背景失眠症的发病率逐年增加,对人类身心健康造成严重危害。半夏-薏苡仁(BX-YYR)主要有效成分包括黄芩素、β-谷甾醇、豆甾醇等,但其治疗失眠症的具体作用机制尚不明确。目的 研究BX-YYR干预对氯苯丙氨酸(4-Chloro-DLphenylalanine,PCPA)失眠模型大鼠的食欲素(Orexin)及其受体、细胞相关因子的调控作用。方法 采用PCPA诱导失眠大鼠模型,将实验大鼠分为6组,每组15只,分别为正常组(N)、模型组(M)、地西泮组(D)和BX-YYR低(ZL)、中(ZM)、高(ZH)剂量组,各组按10 mL/kg进行对应灌胃处理,连续7 d。进行戊巴比妥钠翻正实验和旷场实验。HE染色观察海马结构,免疫组化观察海马B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2),酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β (interleukin-1β,IL-1β)、IL-2、IL-6和Orexin含量,RT-PCR法检测OX1R和OX2R mRNA表达;Western blot法检测OX1R和OX2R表达。结果 戊巴比妥钠翻正实验显示失眠模型大鼠睡眠潜伏期显著延长、睡眠持续时间显著缩短(P均<0.01);旷场实验中模型大鼠总活动距离减少、进入中央格距离和修饰次数增加(P均<0.01)。HE染色显示,M组海马CA1区神经元形态和结构损伤比较严重,BX-YYR各剂量组则相对减轻。免疫组化显示,与M组比较,ZH组大鼠海马Bcl-2阳性信号面积占比升高(P<0.01)。ELISA显示,与M组比较,D组和ZL、ZM、ZH组大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-2和IL-6显著降低(P均<0.05),D组和ZM、ZH组大鼠血清和海马Orexin水平显著降低(P均<0.01)。RT-PCR显示,与M组比较,ZL、ZM、ZH组海马OX1R mRNA表达降低(P均<0.05)。Western blot检测显示,与M组比较,ZL、ZM、ZH组大鼠海马OX1R表达降低(P均<0.01),D组和ZL组大鼠海马OX2R表达升高(P均<0.05)。结论 BX-YYR能够改善PCPA失眠模型大鼠的睡眠情况,同时调控血清TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-6水平,其作用机制可能与调节海马Orexin、OX1R、OX2R表达,上调Bcl-2表达,从而抑制海马神经元细胞凋亡有关。

背部经脉手法对PCPA失眠大鼠的行为学影响

目的观察背部经脉手法对对氯苯丙氨酸(PCPA)失眠大鼠的行为学影响。方法运用SPSS 18.0 for Windows软件生成随机数字表,随机函数为Rvuiform,种子号1234。将30只雄性清洁级SD失眠大鼠按随机数字表分为背部经脉手法组(A组)、空白对照组(B组)、药物治疗组(C组),每组10只。分别于PCPA药物造模前、造模后、治疗7 d后这3个时间点采集大鼠行为学数据,包括旷场实验(水平运动和垂直运动水平的运动总数)、力竭游泳实验、鼠尾悬吊实验数据的变化。结果治疗前三组大鼠力竭时间、旷场运动总数、挣扎次数、绝望时间比较,差异均无统计学意义(P> 0.05)。治疗后B组力竭时间及绝望时间均较治疗前降低(P <0.05);A组和C组治疗前后力竭时间及绝望时间比较,差异无统计学意义(P> 0.05)。与B组比较,A组和C组力竭时间均增加,差异有统计学意义(P <0.05);A组与C组力竭时间比较,差异无统计学意义(P> 0.05)。治疗后三组挣扎次数均较治疗前减少,差异有统计学意义(P <0.05)。结论 PCPA失眠大鼠存在行为学异常,可用于推拿治疗失眠的基础实验研究;行为学上,背部经脉手法和安定均可明显减缓失眠大鼠的运动能力、心肺功能和对新环境的探索能力的下降,是推拿手法改善失眠的客观体现。

加味半夏秫米汤对失眠模型大鼠下丘脑食欲素及其受体的调控作用

【目的】观察加味半夏秫米汤对对氯苯丙氨酸(PCPA)诱导的失眠模型大鼠的治疗作用及机制。【方法】将48只雄性SD大鼠随机分成6组,即正常组,模型组,中药低、中、高剂量组和地西泮组,每组8只。造模前连续7 d,中药低、中、高剂量组大鼠分别给予加味半夏秫米汤进行预防性治疗。除正常组外,其余各组大鼠均构建PCPA诱导失眠模型。第1天造模后,各组继续对应给药,连续7 d。监测体质量,进行旷场试验行为学检测,采用酶联免疫吸附分析(ELISA)检测血清中食欲素A(OXA)和食欲素B(OXB)含量,免疫组织化学法检测下丘脑食欲素受体1(OX1R)的表达,苏木素-伊红(HE)染色法观察大鼠下丘脑的病理变化。【结果】(1)造模前各组大鼠体质量增长趋势平稳,组间无明显差异;造模后除正常组外,其余各组大鼠体质量增长速度减缓甚至下降;给予加味半夏秫米汤14 d后,与模型组比较,中药中剂量组大鼠体质量上升显著(P<0.01)。(2)与正常组比较,模型组大鼠在旷场中活动总距离、中央区域的活动距离及进入中央区域的次数增加(P<0.01),血清OXA和OXB含量显著升高(P<0.01),下丘脑OX1R的表达显著升高(P<0.01),HE染色显示下丘脑胶质细胞轻度增生;与模型组比较,中药中剂量组和地西泮组大鼠在旷场中活动总距离、中央区域的活动距离及进入中央区域的次数减少(P<0.01),血清OXA和OXB含量显著降低(P<0.01),下丘脑OX1R的表达显著降低(P<0.01),HE染色显示大量神经元周围间隙增大,局部胶质细胞轻度增生。【结论】加味半夏秫米汤可通过下调血清中OXA和OXB的含量及下丘脑中OX1R的表达来改善大鼠失眠,减轻大鼠焦虑状态。