食醋调吴茱萸穴位贴敷对氯苯丙氨酸失眠大鼠在体皮肤的渗透过程及作用机制研究

目的探讨食醋调吴茱萸穴位贴敷对对氯苯丙氨酸(PCPA)所致失眠大鼠在体皮肤渗透过程及作用机制。方法SPF级7周龄SD雄性健康大鼠162只分成正常组,模型组,阳性对照组(地西泮1 mg/kg,10 ml/kg),食醋调吴茱萸小、中、大剂量组(剂量为2、4、8 g/kg;每组分为涌泉穴组和神阙穴组)。正常组、模型组和阳性对照组(地西泮)每组10只,其余各组22只,其中10只用于观察脑组织神经递质γ-氨基丁酸(GABA)含量及GABAA1 mRNA表达,另外12只用于观察食醋调吴茱萸穴位贴敷对大鼠在体皮肤的渗透过程。除正常组外其余各组均使用PCPA法造模。给药组每天贴敷给药4 h,连续给药7 d后,获取大鼠脑组织标本,采用酶联免疫吸附试验法检测神经递质GABA含量,采用实时荧光定量PCR检测GABAA1 mRNA的表达水平。第7天给药结束后1 h(T_(1))、给药结束后4 h(T_(2))、给药结束后8 h(T_(3)),以及贴敷给药8 h清除药物后1 h(T_(4)),取大鼠涌泉穴、神阙穴部位皮肤制作冰冻切片,用激光共聚焦显微镜观察食醋调吴茱萸穴位贴敷的在体皮肤渗透过程。结果与模型组比较,食醋调吴茱萸穴位贴敷大、中、小剂量组大鼠下丘脑、脑干、海马GABA含量升高,差异有统计学意义(P<0.05);食醋调吴茱萸穴位贴敷中、高剂量组大鼠下丘脑、脑干、海马GABAA1 mRNA表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。两个穴位食醋调吴茱萸穴位贴敷大、中、小剂量组组内不同时间点平均荧光强度比较,差异有统计学意义(P<0.05);两个穴位食醋调吴茱萸穴位贴敷大、中、小剂量组T_(1)~T_(4)时平均荧光强度比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论食醋调吴茱萸穴位贴敷具有改善失眠的作用,其作用机制可能与上调脑组织GABA含量及GABAA1 mRNA的表达水平有关。食醋调吴茱萸穴位贴敷具有良好的经皮渗透性。

探讨蛇床子催眠活性组分对PCPA失眠大鼠褪黑素合成限速酶AANAT的调控作用

目的:观察蛇床子催眠活性组分(CHC)对对氯苯丙氨酸(PCPA)失眠大鼠行为学、褪黑素(MT)合成限速酶芳基烷基胺N-乙酰基转移酶(AANAT)的影响,探讨其对松果体的保护机制。方法:60只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常、模型,MT阳性药,CHC高、中、低剂量6组,每组10只。除正常组其余各组腹腔注射4.5%PCPA混悬液,10 mL·kg^(-1),连续2 d,建立大鼠PCPA失眠模型。造模后正常及模型组灌胃等体积2%聚山梨酯-80,MT组(10 mg·kg^(-1),CHC高、中、低(60,30,15 mg·kg^(-1)给予10 mL·kg^(-1)给药体积的药物,每日1次,连续7 d。给药4 d后分别进行旷场活动、高架十字迷宫、戊巴比妥钠协同睡眠试验,采用酶联免疫吸附法检测血清MT;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)测定松果体MT合成关键酶AANAT mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测松果体AANAT蛋白表达变化。结果:与正常组比较,模型组大鼠旷场活动总距离、站立次数、中心区持续时间明显增加(P<0.05,P<0.01),高架开臂次数及时间比例下降(P<0.05),入睡潜伏期显著延长(P<0.01);与模型组比较,低剂量组无明显差异,其余各组大鼠活动总距离均减少(P<0.05,P<0.01),高架开臂次数百分比升高(P<0.05),入睡潜伏期缩短、睡眠时间明显延长(P<0.05,P<0.01)。与正常组比较,模型组MT含量显著下降(P<0.01);与模型组比较,低剂量组差异无明显统计学意义,其余各组血清MT不同程度的升高(P<0.05)。与正常组比较,模型组AANAT mRNA表达量,AANAT蛋白表达量下降(P<0.01);与模型组比较,MT组,CHC高剂量组表达量明显增加(P<0.05)。结论:CHC改善PCPA失眠行为学指标、增加松果体细胞合成分泌MT,提高血清MT水平,与上调松果体AANAT mRNA及其蛋白的表达有关。