三硝基苯三磷酸腺苷鞘内注射对大鼠内脏高敏感性的影响

背景:P2X受体在感觉神经元中表达丰富,近年研究表明其在伤害性信息的传导过程中起有重要作用。目的:研究选择性P2X受体拮抗剂三硝基苯三磷酸腺苷(TNP-ATP)鞘内注射对大鼠内脏高敏感性的影响,了解P2X受体与内脏高敏感性的关系。方法:30只健康Wistar大鼠随机分为5组,每组6只。以慢性避水应激建立内脏高敏感模型(S组),以假应激作为对照(C组),分别予鞘内注射0.9%NaCl溶液10μl(SNaCl组和CNaCl组)、TNP-ATP50μg/10μ1(ST50组和CT50组)和TNP-ATP25μg/10μl(ST25组)。以结直肠扩张(CRD)时的腹壁肌电图内脏运动反射(VMR)幅度值和脊髓灰质c-fos蛋白的表达为指标观察内脏敏感性的变化。结果:鞘内注射后,SNaCl组CRD时的VMR幅度值(40mmHg:P<0.05;60和80mmHg:P<0.01)和脊髓灰质c-fos免疫阳性细胞数(1区:P<0.01;3区:P<0.05)较CNaCl组显著增加;ST50组VMR幅度值(40和80mmHg:P<0.05;60mmHg:P<0.01)和c-fos免疫阳性细胞数(1区和3区:P<0.05)较SNaCl组显著降低;ST25组VMR幅度值和c-fos免疫阳性细胞数无明显变化。结论:TNP-ATP50μg/10μl鞘内注射可降低大鼠的内脏高敏感性,提示在心理应激所致的内脏高敏感过程中有P2X受体参与。

高脂血症时血清二乙基对硝基苯磷酸酯酶活性的变化

目的 :研究tritonWR 13 3 9致小鼠高脂血症时血清二乙基对硝基苯磷酸酯酶 (ParaoxonaseI ,PON 1)活性的变化及PON 1活性与血浆脂质含量之间的关系。方法 :在小鼠尾静脉注射tritonWR13 3 9后的 3h ,6h ,12h ,2 4h ,48h ,72h ,眼球摘除术取血 ,用酶标法测定小鼠血浆总胆固醇 (TC) ,甘油三酯 (TG ) ,高密度脂蛋白 -胆固醇 (HDL -C) ,载脂蛋白AI (ApoAI) ,载脂蛋白B (ApoB含量 ) ,并计算出ApoAI/ApoB ,HDL -C/TC比值 ,用分光光度计法测定PONI活性。结果 :TritonWR 13 3 9尾静脉注射后 3h ,小鼠血浆TC和TG含量即急剧增高 ,与对照组相比 ,P <0 .0 1,分别在注射后 2 4h和 3h达到峰值 ,随后逐渐下降 ,其中血浆TG含量在注射后 48h即恢复正常水平。tritonWR13 3 9尾静脉注射后 3h ,小鼠血浆HDL -C和ApoB含量急剧增高 ,与对照组相比 ,P <0 .0 5,分别在注射后 2 4h和 6h达到峰值 ,随后逐渐下降 ,分别在注射后 48h和 72h恢复正常水平。tritonWR13 3 9尾静脉注射后 3h ,小鼠血浆ApoAI含量即急剧降低 ,与对照组相比 ,P <0 .0 5,随后逐渐增高 ,在注射后 6h即恢复正常水平。tritonWR 13 3 9尾静脉注射后 3h ,小鼠血浆ApoAI/ApoB和HDL-C/TC比值减少 ,与对照组相比 ,P <0 .0 1,随后逐渐增高 ,其中ApoAI/ApoB比值在 72h恢复?

双(对硝基苯)磷酸酯的制备

双(对硝基苯)磷酸酯是核苷合成的催化剂,它的制备由对硝基苯酚与三氯氧磷反应,然后经水解、酸化而得。

耐热对硝基苯磷酸酶的酶学性质

通过分离纯化和酶学性质测定 ,确定耐热对硝基苯磷酸酶 (p nitrophenylphosphatase)是金属酶蛋白 ,活性部位含有镁离子 ;该酶是中度耐热蛋白质 ,金属离子有助于提高其热稳定性 .该酶的Km 为 3 0 31mmol L ,Vmax为 313 5 μmol·min-1·mg-1;二级结构中大约有 74 5 %α螺旋 ,2 5 5 % β转角 .在pH 7 0～ 12 0范围内相当稳定 .该酶在SDS溶液中稳定性较差 ,在TritonX 10 0溶液中较为稳定 ,在Tween 2 0溶液中很稳定 .

2,4-二硝基苯肼柱前衍生高效液相色谱法测定1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶稳态动力学参数

利用含羰基化合物与2,4-二硝基苯肼在酸性条件下反应得到的产物腙对紫外-可见光有吸收的特性,采用柱前衍生高效液相色谱法测定了1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶稳态动力学参数。酶反应产物1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸在碱性磷酸酶的作用下生成去磷酸化产物1-脱氧-D-木酮糖,然后与2,4-二硝基苯肼衍生成腙。衍生化反应的适宜条件为:HClO4浓度为1.5%,反应温度37℃,反应时间60 min,2,4-二硝基苯肼与1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸的摩尔比为6∶1。色谱条件:0～17 min,40%～80%甲醇;18～20 min,40%甲醇。结果表明,本方法具有较高的灵敏度和良好的线性关系,1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸的检出限为1.0 mg/L,在0.005～1.0 g/L范围内线性相关系数为0.999,相对标准偏差小于5.0%(n=3),标准回收率为102.22%。用本方法测得的1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶稳态动力学参数Km、Vmax和Kcat与文献报道一致。

双-对硝基苯磷酸酯钠对麻醉家兔没食子酸丙酯药物代谢动力学的影响(英文)

用高效液相色谱测定家兔给予没食子酸丙酯 (PG) 15和 30mg·kg-1后 1 0 ,2 0 ,3 5 ,7 0 ,10 0 ,2 0 0 ,30 0和 40 0min的血浆浓度 ,分析所得血药浓度 时间曲线符合二室开放性模型 .给家兔ip双 对硝基苯磷酸酯钠 (BNPP) 3 4mg·kg-1,再ivPG 15和 30mg·kg-1,所测BNPP组与对照组PG血浆浓度有显著不同 ,t1/ 2 β,MRT以及AUC较对照组显著延长或增加 ,而k10 及Cl显著缩短 ,组间比较均P <0 0 5 ,P <0 0 1,P <0 0 0 1.ivPG5 0 ,10 0及 2 0 0min后其肝 ,肾和血桨中PG浓度也较对照组增高 ,组间比较均P <0 0 5 ,结果表明BNPP对PG在家兔体内的代谢速率有明显影响 .

苯乙腈定向硝化制备对硝基苯乙腈

研究了用浓HNO3和多聚磷酸作硝化剂 ,定向硝化苯乙腈制备对硝基苯乙腈的方法。 15g质量分数为 96 %的苯乙腈滴加到 2 7.5mL质量分数为 6 8%的HNO3和多聚磷酸混合物中 ,在 2 0～ 2 5℃下反应 2h后 ,反应产物用乙醇水溶液重结晶得对硝基苯乙腈 12 9g,对硝基苯乙腈收率为 6 4 6 9% ,w(对硝基苯乙腈 ) =99 11%

杨树叶改性吸附剂对硝基苯的吸附性能研究

在探究磷酸改性杨树叶的条件基础上,研究接触时间、硝基苯溶液初始浓度、温度等因素对改性过后的杨树叶吸附硝基苯性能的影响。结果表明,在25℃,用2 mol/L磷酸溶液按照15 m L/g的改性剂用量改性后,杨树叶对硝基苯的吸附在70 min左右达到基本平衡,吸附过程满足准二级吸附动力学模型。随着硝基苯溶液初始浓度的增加,吸附率不断降低,吸附等温线满足Freundlich方程。吸附过程为放热过程,随着温度的升高,吸附效果下降。

硝基苯在BMimPF_6中的紫外光谱及电还原特性

应用紫外光谱和循环伏安法研究了硝基苯和离子液体BMim PF6的相互作用及其电还原特性。结果表明,硝基苯与紫外光谱受离子液体作用的影响,硝基的吸收峰红移,末端吸收消失。硝基苯电还原的传递系数α随浓度变化而减小。扩散系数D随浓度升高先降低后稍升高。

作用于pNPP的磷酸酶在凝胶中的特异性染色

A simple, rapid and sensitive staining method for detecting the phosphatase in polyacrylamide gels was developed, in which p-nitrophenyl phosphate (pNPP) was used as substrate.This method was based on the activity of p - nitrophenylphosphatase (pNPPase) to release Pi from pNPP within the polyacrylamide gels which then combines with lead ion to form the lead phosphate and precipitates in the gel as white bands. These bands can be changed to dark brown bands on a transparent background due to formation of PbS by treating with (NH4)2S within the gel.The crude extracts of H22a hepatoma ascites cells and normal mouse liver cells were analyzed by this method and found that there are some difference between the two kinds of cells.

新型磷酸酯酶模型配体的合成及其Zn(Ⅱ)配合物催化PNPP水解反应研究

以N,O,O′-三(对甲苯磺酰基)-双(2-羟乙基)胺为起始物,经季铵化、Hoffmann消去,得到了含两个咪唑功能基的仿生配体1,1再经水解、亲核取代反应,合成了含两个咪唑功能基的仿生配体2;化合物1、2的结构经IR、1HNMR和MS谱证实.催化活性研究表明:pH=7时,配体2的Zn(II)配合物催化PNPP水解的表观速率常数是PNPP自身水解的3.004×103倍,其水解能很好地遵从一级反应的动力学行为.

对硝基苯乙腈的制备

对硝基苯乙腈是合成药物的重要中间体。也用于制备液晶及农用化学品。它的制备方法有两种：一是苯乙腈直接和混酸（浓HNO3或H2SO4）反应，对硝基苯乙腈收率为48%，二是对硝基苄基卤和NaCN反应，用DMSO为溶剂，并在反应混合物中加入一定量的浓H2SO4，产品收率为40%，现介绍用浓HNO3和多聚磷酸作硝化剂，定向硝化苯乙腈制备对硝基苯乙腈的方法，15g质量分数为96%的苯乙腈滴加到27.5mL质量分数为68%的HNO3和多聚磷酸混合物中，在20～25℃下反应2h，反应产物用乙醇水溶液重结晶得对硝基苯乙腈12.9g，产品的收率为64.29%，ω（对硝基苯乙腈）=99.11%。

基于离子液体修饰碳纳米管电极的碱性磷酸酶电化学检测

利用自制的离子液体修饰碳纳米管电极(CNTs-ILE),在对CNTs-ILE的特性及对碱性磷酸酶(AP)酶促反应的底物磷酸对硝基苯酯(PNPP)和产物对硝基苯酚(PNP)进行电化学研究的基础上,采用安培法对酶促反应进程实现了持续动态的检测。实验表明,CNTs-ILE的循环伏安特性优于传统玻碳电极,且它在检测PNP时呈现出良好的抗钝化特性。当AP浓度范围在1.0～100 U/L时,电流大小与AP的浓度呈良好的线性关系。本方法可快速检测AP浓度,检测时间在20 min内。CNTs-ILE具有良好的抗钝化、操作简单及制作成本低等特点,在碱性磷酸酶的检测领域中有望得到进一步发展。在传统ELISA基础上,利用CNTs-ILE对具体样本最终的AP酶促反应产物进行电化学检测,通过峰值电流大小确定抗原浓度,为检测以AP为标记酶的抗原和抗体提供了理论依据。

磷酸银-介孔炭复合光催化材料性能的研究

采用共沉淀法将介孔炭与磷酸银结合,制备出磷酸银-介孔炭复合光催化材料。利用扫描电子显微镜(SEM)、透射电子显微镜(TEM)和X射线衍射等技术手段对所制备材料进行表征,结果表明随着介孔炭负载量的增大,生成的磷酸银粒子尺寸减小。所制备材料中的磷酸银为立方体型,介孔炭的加入不会影响其晶体结构,可以制得性能稳定的复合材料。采用氮气吸-脱附测试对复合光催化材料进行光催化性能的评价,主要考察了不同介孔炭负载量对材料的光催化性能的影响。同时,通过光催化实验发现,当介孔炭负载量为10%时,所得的磷酸银-介孔炭复合光催化材料光催化效果最佳,并且所制备的复合光催化材料具有再循环使用的能力。

中华鳖肝脏蛋白磷酸酶的酶学特性分析

通过对中华鳖肝脏中蛋白质磷酸酶（PP2A）的提取和纯化，进而对PP2A进行了酶学分析，结果表明：PP2A在pH值为6．0～8．0，温度为0℃以下条件下存放相对比较稳定，不容易失活。以对硝基苯磷酸二钠（pNPP）为底物，测定PP2A的最适反应条件为pH7．0，温度30℃，底物浓度为18～30μmol／mL。

基于不同方法测定土壤酸性磷酸酶活性的比较

土壤酸性磷酸酶与有机磷的矿化及植物的磷素营养关系最为密切。目前国内学者在测定酸性磷酸酶活性时主要参照关松荫《土壤酶及其研究法》中以磷酸苯二钠为基质的测定方法,而国外学者主要参照Dick《Methods of Soil Enzymology》中以对硝基苯磷酸二钠为基质的测定方法(PNPP)。但是,在以磷酸苯二钠为基质测定生成物的过程中,常出现显色程度不明显的问题;另外,采用不同基质测定酸性磷酸酶活性也造成了测定方法选择的困难。为合理选择土壤酸性磷酸酶活性的测定方法,本研究选用酸性、中性和碱性土壤各10个土样,分别采用以磷酸苯二钠为基质,且在显色阶段分别加入pH5.0醋酸盐缓冲液(DPP 1)和pH9.4硼酸盐缓冲液(DPP 2)的方法,以及PNPP方法测定土壤酸性磷酸酶活性。同时也研究了不同pH缓冲液和苯酚浓度对生成物显色反应的影响。结果表明:以磷酸苯二钠为基质、在显色反应阶段加入pH≤6的缓冲液时,苯酚和2,6-二溴苯醌氯亚胺不显色;当加入pH≥8的缓冲液时,两者之间显色且苯酚浓度和吸光值的Pearson相关系数极显著。这说明pH低是导致高苯酚浓度和2,6-二溴苯醌氯亚胺显色效果差的一个主要原因。此外,采用PNPP方法测定时,在酸性、中性和碱性土壤中,10个样本酸性磷酸酶活性的变异系数分别较DPP 2增加了70.04%、42.44%和21.17%;极差分别是DPP 2的27.18倍、26.85倍和39.43倍。总之,如果选用磷酸苯二钠为基质测定土壤酸性磷酸酶活性,应在显色阶段加入碱性硼酸盐缓冲液;选用对硝基苯磷酸二钠为基质,是更为简单和灵敏的方法。

以蛋白质磷酸酶CDC25A/B为靶标的抗癌药筛选体系的构建

目的通过克隆和表达人蛋白质磷酸酶CDC25A/B融合蛋白,探讨构建高通量靶向抗癌药筛选体系的途径。方法采用RT-PCR技术克隆人CDC25A/B催化区结构域cDNA序列,构建pGEX-4T-1-CDC25A/B原核表达质粒,表达和纯化携带还原型谷胱甘肽(GSH)标签的融合蛋白。以对硝基苯基磷酸盐(pNPP)为底物,在96孔板上建立分别以GST-CDC25A/B为靶标的筛选体系,应用维生素K3(VK3)进行验证性抑制剂筛选。结果成功表达和纯化了GST-CDC25A/B融合蛋白,建立了相应的高通量磷酸酶抑制剂筛选体系。在相同反应条件下,GST-CDC25B对pNPP的水解活性是GST-CDC25A的6倍。VK3对CDC25A/B的半数抑制浓度(IC50)分别为0.8和1.8μg/ml。结论通过表达和纯化CDC25A/B催化区结构域与GST的融合蛋白,可以高效率的建立靶酶抑制剂高通量筛选体系,为进一步研发VK3衍生物类新型靶向抗癌药奠定了基础。

405例5～14岁儿童血清碱性磷酸酶活性观察

目的观察5～14岁儿童血清碱性磷酸酶(ALP)活性与成人的差别,以及学龄儿童(7～14岁)与学龄前儿童(5～6岁)ALP的变化。方法采用国际临床化学协会(IFCC)推荐的对硝基苯磷酸盐速率法,并用全自动生化分析仪测定。结果学龄前儿童203例ALP平均值230.8±60.0U·L-1;学龄儿童202例ALP平均值222.3±121.9U·L-1;健康成人296例ALP平均78.3±21.7U·L-1,经两两配对t检验,3组之间均为有极显著性差异(P<0.01)。结论儿童ALP活性显著高于成人;学龄前儿童和学龄儿童ALP平均值比较接近,但后者离散度更大。

含三个咪唑基氮杂多齿配体的合成及其Zn(Ⅱ)配合物催化PNPP水解反应的研究

以三乙醇胺和二氯亚砜为起始物,经中间产物1合成了含三个咪唑功能基的仿生配体2;化合物2的结构经IR和1HNMR谱得到证实.催化活性研究表明:pH=7.0时,配体2的Zn(II)配合物催化PNPP水解的表观速率常数是PNPP自身水解的480倍,其水解能够很好地遵从一级反应的动力学行为.

高纯度,高活力碱性磷酸单酯酶的制备

碱性磷酸单酯酶(简称AKP)Alkaline ph-osphatase(Orthophosphoric monoester pho-sphahydrolase EC 3·1·3·1)是一种用途广泛的生物化学试剂,它能专一性地水解磷酸单酯化合物而释放出无机磷。目前主要应用于核酸研究,如在遗传工程研究中用于核苷酸顺序的分析、测定及其基因的重组,分离;在医学科研上它是酶标免疫测定技术的常用工具酶之一;添加AKP的药用化妆品,有益于皮肤细胞的再生和新陈代谢;此外,还可用于核苷酸脱磷,生产核苷等。