2-氯-4-硝基苯-麦芽三糖苷作为α-淀粉酶底物的实验研究

目的 :研究α -淀粉酶及其底物2 -氯 -4 -硝基苯 -麦芽三糖苷 (CNP -G3)酶促反应过程中的激动剂、抑制剂、最适 pH、米氏常数等。方法 :以测定酶促反应速度的方式分别进行研究。结果 :阳离子中仅钙离子和氨离子对α -淀粉酶有轻度的激活作用 ,阴离子中的氯离子对α -淀粉酶有强大的激活作用 ,约是迭氮钠的4倍 ,醋酸离子也有弱激活作用 ,硫酸、磷酸氢、碳酸离子无激活作用 ;乙二胺四乙酸是酶的强抑制剂 ;酶的最适pH为5.9～6.1 ;酶以CNP -G3为底物时的Km值约为0.22mmol/L ;麦芽糖对α -淀粉酶有显著的抑制作用 ;EGTA为钙离子螯合剂 ,可调节反应速率。结论 :α -淀粉/CNP -G3酶促反应系统研究可用于酶活性和激动剂测定。

2-氯-4-硝基苯-β-D-半乳糖麦芽二糖苷作底物测定淀粉酶总活性

目的 建立 2 氯 4 硝基苯 β D 半乳糖 麦芽二糖苷 (GalG2 CNP)作底物测定淀粉酶的方法。方法 用连续监测法对pH值 ,Km值及最适底物浓度等反应条件进行实验研究 ,并对建立的方法进行评价。结果 用双试剂连续监测法 ;试剂Ⅰ :含KSCN 2 0 0mmol/L ,CaCl2 6 .7mmol/L ,NaCl 40 0mmol/L ;试剂Ⅱ :含GalG2 CNP 2 0mmol/L ;均用pH6 .0 5 0mmol/LMES缓冲液。线性范围达 12 0 0U/L批内CV =2 .77% ,批间CV =3 .5 6 % ,与参考方法 (EPS -G7)有良好的相关性。结论 本法操作简便 ,结果准确 。

七-O-乙酰基-β-麦芽糖基羧酸酯的NMR研究

通过对 6种七 O 乙酰基 β 麦芽糖基羧酸酯的1 HNMR和IR谱的分析 ,确证其糖苷键为 β 构型 ,对其一般特征进行了对比和讨论 ,用1 H 1 HCOSY ,gHMQC ,gHMBC等技术对它们的1 H和1

2-氯-4-硝基苯基-β-D-吡喃岩藻糖苷的合成

2-氯-4-硝基苯基糖苷是一类重要的糖基酶底物试剂,在相关酶抑制剂制备、酶生物活性研究中有着广泛的应用。以D-半乳糖为原料,通过4步反应得到中间体D-岩藻糖;再经乙酰化制备1,2,3,4-三-O-乙酰基-α,β-D-吡喃岩藻糖,溴代反应获得1-溴-2,3,4-三-O-乙酰基-α-D-吡喃岩藻糖,通过溴代糖与2-氯-4-硝基苯酚偶联,立体选择性获得2-氯-4-硝基苯-2,3,4-三-O-乙酰基-β-D-吡喃岩藻糖基糖苷,最后脱除乙酰基保护得标题化合物。该化合物可以作为一种新型的β-D-岩藻糖苷酶底物试剂,用于酶活性测试,其合成方法未见文献报道。

桔梗中β-D-葡萄糖苷酶的提取研究

以β-葡萄糖转苷酶水解对硝基苯酚-β-D-吡喃葡萄糖苷(pNPG)释放的对硝基苯酚(PNP)的量测定β-葡萄糖转苷酶活力为标准。采用稀盐溶液提取桔梗中β-葡萄糖苷酶,通过单因素控制变量法探究桔梗中β-葡萄糖苷酶的存在和活力,确定了最适提取温度为35℃,时间为2 h,料液比为1:25,盐浓度为0.20 mol/L。

两种α-糖苷酶抑制剂体外筛选模型的改良与比较

α-糖苷酶抑制剂可以控制餐后血糖浓度波动,从而达到预防和治疗糖尿病的作用。本文对两种α-糖苷酶抑制剂体外筛选模型进行了改进。结果表明,以阿卡波糖作阳性对照,两种模型均适用于以脱脂乳为生长介质的产α-糖苷酶抑制剂的乳酸菌的筛选。选取12株特定乳酸菌分别用两种模型测其发酵脱脂乳上清对α-糖苷酶的抑制活性,两种模型筛选结果一致,但测得的抑制活性呈现一定的差异。当加入到脱脂乳中的阿卡波糖浓度较低时,以麦芽糖为底物的酶-抑制剂模型测得的α-糖苷酶抑制活性高于以4-硝基酚-α-D-吡喃葡萄糖苷(PNPG)为底物的酶-抑制剂模型。

α-淀粉酶的2种测定方法比较

对 2种测定α－淀粉酶的方法进行比较，结果表明 2－氯－ 4－硝基苯酚－α－麦芽三糖苷 (CNP－ G3)法与用亚乙基封闭的对硝基苯酚－α－麦芽七糖苷 (EPS或 PNP－ G7)法相关性良好， CNP－ G3法的优点为直接、一步测定α－淀粉酶活性，不需要辅助酶，试剂稳定， CNP－ G3的用量少，价格低廉，是目前较为理想的测定α－淀粉酶的方法。

CNP-G_3法与PNP-G_7法测定α-淀粉酶的比较

通过对α-淀粉酶的两种测定方法进行比较,结果表明2-氯-4-硝基苯酚-α-麦芽三糖苷(CNP-G3)法与对硝基苯酚-α-麦芽七糖苷(PNP-G7)法相关性良好,CNP-G3法的优点为不需要辅助酶,直接、一步测定α-淀粉酶的活性,试剂稳定,CNP-G3的用量少,价格低廉,是较为理想的测α-淀粉酶的方法。

一种微量、快速测定植物种子β-淀粉酶活性的方法

针对3,5-二硝基水杨酸(DNS)法的缺点,以对硝基苯酚麦芽五糖(PNPG5)为底物,建立并改进了植物种子β-淀粉酶活性测定的方法。本方法具有微量和快速的特点;进一步通过对4种植物材料种子的酶活性测定以及α-淀粉酶的干扰评估实验,证实了该法可以运用于植物种子β-淀粉酶活性的专一性测定。

CNP-G3法测定淀粉酶和统一测定标准的建议

目的对2-氯-对硝基苯麦芽三糖苷(CNP-G3)法进行试验和评价,讨论统一测定标准的可行性。方法测试CNP-G3法的精密度、线性、参考范围和干扰试验,同时检测健康体检人群的血清109例,尿液106例。结果反应线性范围达2 673 U/L,批内精密度分别达到0.6%(83 U/L)和0.4%(300 U/L),批间精密度分别达到2.26%(77 U/L)和2.53%(244 U/L),血清参考范围26～87 U/L(双侧),尿液参考范围22～504 U/L(双侧)。抗坏血酸、胆红素、浊度不影响测定结果,但血红蛋白达3 g/L以上时结果出现负偏差。结论CNP-G3法作为直接测定法之一,其性能满足临床要求。但目前方法学混乱,建议统一用临床化学国际联盟法的靶值作为标准进行校正,以期缩小各实验室的变异系数。

用CNP-G3法测定α-淀粉酶

目的：用CNP-G3法测定α-淀粉酶。方法：我室在日立7020型生化分析仪上建立了以2—氯—4—硝基酚—α-麦芽三糖苷(CNP—G3)为底物直接测定α-淀粉酶的程序，并对此方法做了初步评价。结果：CNP-G3稳定性好，干粉可长期保存，工作试剂在4℃避光保存可稳定4周；淀粉酶浓度2000U／L以内线性良好，r=0．9988，批内CVl．03％～1．93％，批间CV1．36％—2．43％；平均回收率95．4％；以黄疸、溶血、脂浊血清进行干扰试验。结论：TG8．6mmol／L、TBIL3261μmol／L、Hb2．1g／L均不影响本法测定；与EPS法比较相关良好，Y=0．97X+5．4l，r=0．9936。

血清氯化物酶法测定

目的 建立血清氯化物的α 淀粉酶及其底物 2 氯 4 硝基苯 α D 麦芽三糖苷 (CNP G3)直接测定方法。方法 根据氯离子是α 淀粉酶的激动剂原理建立氯化物测定方法 ,并做方法学评价。结果 测定结果的平均偏差率为 0 4 6 % ;线性范围 5 0～1 5 0mmol/L ;平均回收率为 1 0 0 6 2 % ;批内CV <1 2 4 % ,日间CV <1 86 % ,总CV1 4 5 %～ 2 2 4 % ;加入高浓度的维生素C、葡萄糖、蔗糖、果糖、α 淀粉酶、三酰甘油、血红蛋白、胆红素、钙离子、溴离子、碘离子、氟离子、硫氰酸钾、对硝基酚、叠氮钠和硫酸铵均未显示干扰。与硫氰酸汞比色法 (MTC) ( x±s)比较 :MTC法 (X) :(95 6 6± 1 4 .4 5 )mmol/L ,酶法 (Y) :(95 6 2± 1 4 .93)mmol/L ,t=0 .0 78,P >0 5 ,Y =1 .0 1 6X - 1 .5 87,r=0 .984 ,n =93,P <0 .0 0 1 ;与离子选择电极法 (ISE) ( x±s)比较 :ISE法 (X) :(99.0 0±1 3.1 1 )mmol/L ,本法 (Y) (98.6 1± 1 2 .70 )mmol/L ,t=0 .1 4 0 ,P >0 .5 ,Y =0 .96 2X +3.375 ,r=0 .993,n =4 4 ,P <0 .0 0 1。溶解的工作试剂 (R1、R2 ) 2～ 8℃冷藏至少可以稳定 1 4天。结论 该方法测定成本低 ,准确、精密、线性范围宽 ,稳定性好 ,在抗卤族元素溴、碘及硫氰酸等阴离子的干扰方面 。

血清氯化物酶法测定

目的建立血清氯化物的α-淀粉酶及其底物2-氯-4-硝基苯-α-D-麦芽三糖苷(CNP-G3)直接测定方法。方法根据氯离子是α-淀粉酶的激动剂原理建立氯化物测定方法,并做方法学评价。结果测定结果的平均偏差率为0.46%;线性范围50~150mmol/L;平均回收率为100.62%;批内CV1.24%,日间CV1.86%,总CV1.45%~2.24%;加入高浓度的维生素C、葡萄糖、蔗糖、果糖、α-淀粉酶、三酰甘油、血红蛋白、胆红素、钙离子、溴离子、碘离子、氟离子、硫氰酸钾、对硝基酚、叠氮钠和硫酸铵均未显示干扰。与硫氰酸汞比色法(MTC)(x±s)比较:MTC法(x):(95.66±14.45)mrnol/L,酶法(Y):(95.62±14.93)mmol/L,t=0.078,P<0.5,Y=1.016X-1.587,r=0.984,n=93,P<0.001;与离子选择电极法(ISE)(x±s)比较:ISE法(X):(99.00±13.11)mmol/L,本法(Y)(98.61±12.70)mmol/L,t=0.140,P<0.5,Y=0.962X+3.375,r=0.993,n=44,P<0.001。溶解的工作试剂(R1、R2)2~8℃冷藏至少可以稳定l4天。结论该方法测定成本低,准确、精密、线性范围宽,稳定性好,在抗卤族元素溴、碘及硫氰酸等阴离子的干扰方面,显著优于其他方法。