相转移催化法合成1-O-(2,4-二硝基苯)-2-乙酰氨基-β-D-葡萄糖苷

This paper reports that in the presence of cetyltrimethyl ammonium bromide as phase transfer catalyst,D-glucosamine hydrochloride reacts with 2,4-dinitrophenol to synthesize 1-O-(2’,4’-dinitrophenyl)-2-acetamido-β-D-glucoside.Chemical structure of the new compound was confirmed by elemental analysis,IR and UV.

Koenigs-Knorr法制备2-氯-4-硝基苯基-β-D-葡萄糖苷

2-氯-4-硝基苯基糖苷是糖苷酶重要的底物.以2-氯-4-硝基酚和四乙酰溴代糖为原料,应用Koenigs - Knorr法制备了2-氯-4-硝基苯-β-D-葡萄糖苷.以无水碳酸钾作为缚酸剂,在丙酮中进行回流6 h,收率66%.产物经过红外光谱和核磁共振验证.

桔梗中β-D-葡萄糖苷酶的提取研究

以β-葡萄糖转苷酶水解对硝基苯酚-β-D-吡喃葡萄糖苷(pNPG)释放的对硝基苯酚(PNP)的量测定β-葡萄糖转苷酶活力为标准。采用稀盐溶液提取桔梗中β-葡萄糖苷酶,通过单因素控制变量法探究桔梗中β-葡萄糖苷酶的存在和活力,确定了最适提取温度为35℃,时间为2 h,料液比为1:25,盐浓度为0.20 mol/L。

氮苷1-(2,′3,′4,′6′-O-四乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基)-咪唑的制备

以D-葡萄糖(Ⅰ)、醋酸酐为原料,在无水吡啶中制得中间体1,2,3,4,6-O-五乙酰基-D-葡萄糖(Ⅱ),收率为87.5%。在HB r/CH3COOH条件下对Ⅱ异头碳上的乙酰基进行溴代,制得1-溴-2,3,4,6-O-四乙酰基-D-葡萄糖(Ⅲ),不经分离,在相转移催化剂TEBA催化下,Ⅲ直接与2,4-二硝基苯酚反应得到酚苷1-O-(2,′4′-二硝基苯)-2,3,4,6-O-四乙酰基-β-D-葡萄糖苷(Ⅳ),最后Ⅳ与1-三甲基硅基-咪唑在无水四氯化锡的催化下,室温反应52 h制得氮苷1-(2,′3,′4,′6′-O-四乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基)-咪唑(Ⅴ),此步反应收率为90%。

基于碳量子点的水果中β-葡萄糖苷酶活性测定方法研究

荧光法测定β-葡萄糖苷酶(β-D-glucosidase,β-Glu)活性具有简单、灵敏的特点,探索荧光法测定β-Glu活性的新方法具有重要意义。以茶汤(柑普茶)为碳源,通过自放热反应快速制备碳量子点(carbon dots, CDs),以其为荧光探针,基于荧光内滤效应建立了β-Glu活性的新方法。结果表明:所制备的CDs具有类石墨结构,粒径约4.5 nm,主要含有C、O、N等元素;CDs的最佳激发波长320 nm,最佳发射波长385 nm。将对硝基苯酚(p-nitrophenol,p-NP)加入CDs溶液中,能引起CDs的荧光强度明显降低,且CDs荧光猝灭程度lg(I_(0)/I)与p-NP浓度呈线性关系,基于此建立了一种定量分析p-NP的方法。利用对硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(p-NPG)在β-Glu催化作用下产生p-NP,通过荧光猝灭作用测定p-NP浓度可间接测定β-Glu活性。该方法的检出限为0.074 U/L,线性范围0.1~20 U/L。研究发现,CDs的发射谱带(385 nm)与p-NP在400 nm处的吸收峰有较大光谱重叠,且CDs的荧光寿命在加入p-NP后没有明显的变化,表明p-NP对CDs的荧光猝灭机理为内滤效应。实际样品分析表明该方法简便、快速、灵敏,可应用于水果中β-Glu活性的测定。

亳菊花中β-葡萄糖苷酶的提取和酶学性质研究

目的测定亳菊花中β-葡萄糖苷酶的活性，研究亳菊花中β葡萄糖苷酶的基本酶学性质。方法采用对硝基苯酚-β-D葡萄糖苷（4-nitrophenyl-β-D-glucopyranoside，pNPG）法考察亳菊花中β-葡萄糖苷酶活性测定的最佳条件及其酶学性质。结果当0．2mL酶液、20mmol／L pNPG0．2mL、0．6mL pH值为4．0的柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液在温度为50℃的水浴中反应45min时，酶活性最高。在此条件下对亳菊花的粗酶液中8I葡萄糖苷酶的基本酶学性质进行初步研究，结果表明该酶在30～50℃时，随着温度升高，酶活力有上升趋势，其热稳定性较好；pH值在3．2～5．4之间时，相对酶活性均在80％以上；酶在4℃下的保存稳定性较好。结论本研究所测定的亳菊花中β葡萄糖苷酶活性的最佳条件及酶学性质可为亳菊花炮制原理研究奠定基础。

甜菊叶片β-葡萄糖苷酶的提取及其性质研究

为研究β-葡萄糖苷酶在甜菊糖苷降解代谢中的作用,并为今后通过抑制甜菊糖苷的降解从而提高其含量的育种工作等奠定理论基础。本研究以甜菊为试验材料,首先对甜菊叶片β-葡萄糖苷酶的提取及酶活性测定方法进行了优化,并进一步对该酶性质进行了初步分析。结果表明,以pH 7.0的50 mmol/L磷酸缓冲液提取,研磨时添加等量PVP,粗酶液经20%~40%饱和度硫酸铵进行盐析的酶液其酶活性最高;以pNPG为底物测定其酶活性时37℃孵育60 min最佳。酶性质分析结果表明,该酶具有较高的热稳定性和pH值稳定性,其最适温度为30℃,最适pH 7.0;4℃保存时酶活性逐渐降低,至26天时酶活力仅余26.4%;在9种常见金属离子中Mn2+、Fe2+对该酶有显著的激活作用,而Cu^2+、Hg^2+对该酶的抑制作用较明显。

饲用玉米中淀粉含量测定方法的比较

采用3,5-二硝基水杨酸法和淀粉葡萄糖苷酶/α-淀粉酶法测定不同饲用玉米的淀粉含量。所测值分别与农作物品种审定委员会审定的淀粉含量进行比较,并分析该两种方法的相关性。结果表明:淀粉葡萄糖苷酶/α-淀粉酶法准确率高、重现性好,实验室操作易掌控,更适用于测定饲用玉米中淀粉含量。

一测多评法测定大花龙胆中环烯醚萜类和黄酮类成分的含量

目的拟用一测多评法同时测定大花龙胆Gentiana szechenyii中的环烯醚萜类成分和黄酮类成分的含量,并验证该方法在大花龙胆质量评价应用中的可行性和适用性。方法采用HPLC,以大花龙胆药材中2个典型成分大花龙胆苷A、异荭草苷为内参物,测定其与马钱苷酸、獐牙菜苷、乌奴龙胆苷D、平龙胆酯苷、异金雀花素-2″-O-吡喃葡萄糖苷、异金雀花素的相对校正因子,并用该相对校正因子计算其他几种成分的含量,实现一测多评;采用外标法测定药材中这8种成分的含量,并比较两者差异,以验证一测多评法的准确性和可行性;同时对不同产地药材质量进行评价。结果以大花龙胆苷A为内参物,马钱苷酸、獐芽菜苷、乌奴龙胆苷D、平龙胆酯苷的相对校正因子分别为1.901、0.994、0.974、1.398;以异荭草苷为内参物,异金雀花素-2″-O-吡喃葡萄糖苷、异金雀花素的相对校正因子分别为1.511、0.969。各相对校正因子重复性良好。一测多评法与外标法对24批大花龙胆中8个成分含量的测定结果无显著差异。结论所建立的一测多评法结果准确、可靠、重复性好,可为大花龙胆多指标质量评价提供参考。

壳寡糖含量的测定方法比较

目的:寻找一种简便有效测定壳寡糖的方法。方法:采用Elson-Morgan法、苯酚-硫酸法和3,5-二硝基水杨酸(DNS)法测定壳寡糖含量并进行比较。结果:Elson-Morgan法不适用于壳寡糖含量的测定;苯酚-硫酸法中盐酸氨基葡萄糖在200～3000μg范围与吸光度也有很好的线性关系,但苯酚-硫酸法对壳寡糖的测定值较实际值偏大;DNS法测定壳寡糖与实际值接近,平均回收率为96.1%,RSD为2.9%(n=6)。结论:DNS法操作简单、快速,重现性好,可直接用于壳寡糖含量的测定。

一种筛选胞外纤维素酶产生菌的快捷、灵敏、有效的方法

【目的】建立一种能快捷、灵敏、有效筛选高β-葡萄糖苷酶活性的胞外纤维素酶产生菌的方法,用于胞外纤维素酶产生菌检测筛选。【方法】将以微晶纤维素(Avicel)或羧甲基纤维素(CMC)为底物的胞外纤维素酶产生菌平板筛选法常用的刚果红或碘液浸泡染色改为碘液熏染,减少碘液的消耗和对环境的污染;建立以对硝基苯酚-β-1,4-葡萄糖苷(p NPG)为底物的β-葡萄糖苷酶发色底物平板筛选法;将两方法串联用于高β-葡萄糖苷酶活性的胞外纤维素酶产生菌的筛选。【结果】建立了分别以CMC和Avicel为底物结合碘液熏染的胞外纤维素酶产生菌平板筛选法和以p NPG为底物的β-葡萄糖苷酶发色底物平板筛选法,从56株真菌中筛选出了8株纤维素酶活性水平为++++的胞外纤维素酶产生菌,从后者筛选出4株高β-葡萄糖苷酶活性的胞外纤维素酶产生菌。【结论】将以CMC和Avicel为底物结合碘液熏染的平板筛选法和以p NPG为底物的发色底物平板筛选法串联,可快捷、灵敏、有效地用于高β-葡萄糖苷酶活性的胞外纤维素酶产生菌的筛选。