有机介质中酶促对羟基苯甘氨酸酯不对称水解的研究

为了进一步探讨利用有机介质中酶促外消旋对羟基苯甘氨酸酯不对称水解反应制备对映体纯对羟基苯甘氨酸的可能,优化反应条件,研究了不同来源的酶、有机介质及底物结构等因素对该反应的影响。结果表明,脂肪酶Novozym 435为最适催化剂;在所研究的四种有机溶剂中叔丁醇为最适有机介质;最适底物为对羟基苯甘氨酸甲酯。同时在该反应体系中,脂肪酶Novozym 435表现出较好的热稳定性和操作稳定性。

脂肪酶催化外消旋对羟基苯甘氨酸甲酯水解制备对映体纯D-对羟基苯甘氨酸的新方法

基于在反应体系中添加碳酸氢铵可有效地促进酶促外消旋对羟基苯甘氨酸甲酯不对称水解这一有趣现象的发现 ,探讨了利用有机介质中酶促外消旋对羟基苯甘氨酸甲酯不对称水解制备对映体纯 D 对羟基苯甘氨酸及其衍生物的可能性 ,研究了不同来源的酶、摇床转速、水含量、对羟基苯甘氨酸甲酯浓度、反应介质及温度等因素对该反应的影响 .结果表明 ,在所研究的 11种酶中脂肪酶Novozym 4 35对该反应的催化活性和对映体选择性较高 ,叔丁醇为最合适的反应介质 ,最适水含量为0 4 % (V/V) ,对羟基苯甘氨酸甲酯的适宜浓度为 2 0mmol/L ,最适摇床转速和反应温度分别为 130r/min和 30℃ .在此优化条件下反应 2 6h后 ,底物转化率和产物ee分别为 39 8%和 95 2 % .

含离子液体介质中脂肪酶高效催化对羟基苯甘氨酸甲酯不对称氨解

利用离子液体C_6MIm·BF_4(20%,v/v)/叔丁醇混合介质中脂肪酶Novozym 435催化对羟基苯甘氨酸甲酯不对称氨解反应,高效地制备了对映体纯D-对羟基苯甘氨酸酰胺。该反应的最适氨源为氨基甲酸铵,其较佳浓度为120~160mmol·L^(-1);最适水活度、反应温度、pH值、对羟基苯甘氨酸甲酯浓度分别为0.55~0.75、35~40℃、7.5~8.0和40mmol·L^(-1)。在上述条件下,反应初速度和对映体选择比分别为5.88mmol·L^(-1)·h^(-1)和83(E值),反应6h,产率为47.6%,产物e.e.值为92.9%。与有机溶剂叔丁醇相比,脂肪酶Novozym 435在C_6MIm·BF_4(20%,v/v)/叔丁醇混合溶剂中的操作稳定性显著提高,反应7批次后,仍能维持90%以上的催化活性,而在叔丁醇反应介质中,仅能维持41%的催化活性。

添加剂对酶促外消旋对羟基苯甘氨酸甲酯不对称水解反应的影响

系统探讨了通过添加剂(β-环糊精、牛黄胆酸钠、6种表面活性剂、Ca2+、Mn2+)来调控Novozym435催化外消旋对羟基苯甘氨酸甲酯水解反应的酶活性和对映体选择性。结果表明在所研究的10种添加剂中,Mn2+(浓度大于3mg/ml)和表面活性剂CTAB可提高该酶促反应速度却降低对映体选择性,牛黄胆酸钠与Ca2+(浓度大于2mg/ml)对该反应有负面影响,其余6种添加剂(β-环糊精、吐温40、吐温80、司盘60、司盘80、十二烷基磺酸钠)则无任何影响。

对羟基苯甘氨酸乙二醇酯盐酸盐的合成研究

合成对羟基苯甘氨酸乙二醇酯盐酸盐时,对羟基苯甘氨酸∶乙二醇∶氯化亚砜=1∶1.5∶1.5,在-10℃～0℃下酰化8 h,pH=6,将20 mL CH2Cl2直接加入作溶剂,20 mL CH2Cl2与氯化亚砜混合后滴加,滴加时间为2 h～3 h,反应总收率为96%.

二苯基硅烷用于D-对羟基苯甘氨酸甲酯制备的新技术

为开发一种对设备腐蚀性小、生产成本低、产能大的D-对羟基苯甘氨酸甲酯生产新技术,尝试用二苯基硅烷作用于D-对羟基苯甘氨酸的甲酯化进程,效果较好。当V(无水甲醇):m(D-对羟基苯甘氨酸)=8.97 mL/g,反应温度为70℃,n(二苯基硅烷):n(D-对羟基苯甘氨酸)=1,反应时间为8 h时,实验结果最佳。目标产物摩尔收率为80.97%,外观为白色颗粒状晶状固体,含量(HPLC归一法)为99.16%,比旋光度为-150.23°,水分为0.21%,吸光度为0.013 AU,D-对羟基苯甘氨酸残留(HPLC归一法)为0.23%。

HPLC测定D-对羟基苯甘氨酸甲酯中的手性杂质

目的建立HPLC测定D-对羟基苯甘氨酸甲酯中潜在的手性杂质[杂质1:L-对羟基苯甘氨酸,杂质2:L-对羟基苯甘氨酸甲酯,杂质3:D-对羟基苯甘氨酸]的含量和限度。方法采用Crownpak CR(-)手性色谱柱(150 mm×4.0 mm,5μm);流动相:高氯酸溶液(pH 1.7)-甲醇(90︰10);检测波长为226 nm;流速:0.7 m L·min^(-1);柱温:25℃。结果杂质1、杂质2和杂质3均在其定量限浓度~2.400μg·m L^(-1)内线性良好(r分别为1.000 0,0.999 9,0.999 9),平均回收率分别为99.97%,100.30%和103.18%,RSD分别为0.30%,0.64%和0.62%(n=9)。结论该方法专属性强,准确、方便,可以作为D-对羟基苯甘氨酸甲酯中手性杂质1、杂质2和杂质3的液相分析方法。

离子液体的组成及溶剂性质与木瓜蛋白酶催化特性的关系

离子液体的组成及溶剂性质对木瓜蛋白酶催化D,L-对羟基苯甘氨酸甲酯不对称水解反应有重要的影响.木瓜蛋白酶在含CnMIm·BF4(n=2～6)介质中表现出较高的活性、对映体选择性及稳定性,而在含有C4MIm·HSO4,C4MIm·Cl,C4MIm·NO3,C4MIm·CH3COO的介质中表现较低的对应值.在含有CnMIm·BF4(n=2～6)的介质中,酶活性随离子液体的极性增大而提高,但在含有C4MIm·HSO4,C4MIm·Cl,C4MIm·NO3,C4MIm·CH3COO的介质中随离子液体的极性增大反而降低.木瓜蛋白酶的对映体选择性和稳定性均随着离子液体的疏水性增大而提高.荧光分析结果表明,离子液体对酶分子构象具有显著的影响.在CnMIm·BF4(n=2～6)的介质中,木瓜蛋白酶的最大荧光发射波长(λmax)均蓝移,而在含有C4MIm·HSO4,C4MIm·Cl,C4MIm·NO3或C4MIm·CH3COO的介质中,λmax均红移.与CnMIm·BF4(n=2～6)相比,在C4MIm·HSO4,C4MIm·Cl,C4MIm·NO3或C4MIm·CH3COO中,酶分子构象的变化较大,暴露的疏水区域较多.

HPLC-多波长法同时测定三种医药中间体的研究

目的通过HPLC等度洗脱多波长法对乙醛酸、D-对羟基苯甘氨酸、D-对羟基苯甘氨酸甲酯等三种医药中间体进行同时测定。方法将样品用流动相进行处理,采用ZORBAX Extend-C1_8色谱柱(4.6×150 mm,5μm)分离,流动相为0.1%磷酸二氢钠溶液∶乙腈(95∶5),流速:1mL·min^(-1),柱温25℃。并用外标法定量。结果三种成分在0.01～0.06mg·mL^(-1)范围内具有良好的线性关系,各成分相关系数r分别为0.999 1、0.999 5、0.999 9,平均回收率在98.40%～99.17%之间,精密度良好(RSD均低于1.2%)。结论高效液相色谱法测定乙醛酸、D-对羟基苯甘氨酸、D-对羟基苯甘氨酸甲酯的含量灵敏度高,重现性好,精密度和准确度高,可对该三种组分同时分析,并有望应用于相关医药产品的合成工艺和质量控制。