对羟苯甲酸3-羟化酶初步纯化及进化起源探讨

经超声破碎、硫酸铵分级沉淀、凝胶过滤、离子交换层析和SDS PAGE ,从Comamonastestosteroni菌株中获得了相对分子质量为 4 .5万的对羟苯甲酸 3 羟化酶 (POB3 HOase) ;测定了其N 末端 2 1个氨基酸序列 ,并与文献报道来源于不同菌株的POB3 HOase序列进行了同源性比较 ,结果提示它们具有相同的进化起源。

3-溴-4-羟基-5甲-氧基苯甲酸甲酯的合成

以香兰素为主要原料,经溴水溴代得溴代香兰素,再经氧化银氧化制取溴代香兰酸,最后与甲醇发生酯化反应,成功制得3溴--4羟-基-5甲-氧基苯甲酸甲酯,总收率66.4%。各步反应的生成物提纯后经过1H-NMR、IR进行表征。

(2-乙酰氧基)苯甲酸(3-硝氧甲基)苯酯的合成工艺改进

以阿司匹林为起始原料 ,在二环己基碳二亚胺 (DCC)和 4 二甲胺基吡啶 (DMAP)存在下 ,与间羟基苯甲醇进行酯化反应 ,生成 (2 乙酰氧基 )苯甲酸 (3 羟甲基 )苯酯 ,再经硝化反应得目标化合物NCX 4 0 16。此法较文献报道的方法操作及后处理简单 ,收率由 6 0 %左右提高到 6 8%。

25-羟维生素D_3-1α-羟化酶质粒转染对角质形成细胞增殖分化和凋亡的影响

目的:研究25-羟维生素D3-1α-羟化酶(1α-羟化酶)质粒转染对角质形成细胞增殖、分化和凋亡的影响。方法:体外培养小鼠角质形成细胞(KC)转染1α-羟化酶后,观察细胞在形态上的变化对分化进行研究;利用Giemsa染色法和Tunel荧光素原位末端标记法对凋亡诱导作用进行观察。利用小鼠阴道上皮有丝分裂模型和小鼠尾部鳞片表皮模型对1α-羟化酶质粒转染对KC增殖和分化的影响进行研究。结果:携带1α-羟化酶的质粒转染KC可以非常显著的促进其分化,剂量与效应呈正相关;10-6mol/L的维生素D3和0.015μg/μL1α羟化酶质粒转染联合应用即可诱导KC细胞凋亡。1α-羟化酶质粒转染可以非常显著的抑制小鼠阴道上皮有丝分裂(P<0.01),显著促进小鼠尾部鳞片表皮模型中颗粒层的形成(P<0.05)。结论:1α-羟化酶质粒转染角质形成细胞可以明显抑制其增殖,促进其分化,诱导其凋亡。1α-羟化酶质粒转染为以增殖过渡分化不全为特征的皮肤病比如银屑病以及某些肿瘤的基因治疗提供了新思路。

人前列腺癌细胞中1-α-羟化酶活性降低与25-羟维生素D3抑制生长的易感性降低的关系

流行病学、分子学、遗传学等的研究表明,维生素D在前列腺癌的发展、浸润中起着重要作用。在实验模型和临床实验中1,25-二羟维生素D3[1,25-(OH)2D3]对前列腺上皮细胞癌具有抗增生,促分化、抗转移/浸润的作用。由于存在血钙增高的副作用,临床直接应用1,25-

一种高效氧化3-羟甲基-7β-苯乙酰胺-3-头孢-4-羧酸二苯甲基酯的方法

以7-氨基头孢烷酸(7-ACA)为原料,经水解、氨基和羧基保护,制得3-羟甲基-7β-苯乙酰胺-3-头孢-4-羧酸二苯甲酯(Ⅰ),产率48%;并在乙腈中用2-碘酰基苯甲酸实现羟基选择性氧化,产物3-甲酰基-7β-苯乙酰胺-3-头孢-4-羧酸二苯甲酯(Ⅱ),收率达94%。

非21-羟化酶缺乏症的先天性肾上腺皮质增生症患儿临床和基因特点22例分析

目的分析非21-羟化酶缺乏症(hydroxylase deficiency,OHD)的先天性上腺皮质增生生症(CAH)临床特征及分子遗传学改变,探讨不同类型CAH的临床表型与基因型相关关系。方法收集于浙江大学医学院附属儿童医院内分泌科2017年7月至2022年4月期间就诊并基因确诊为CAH的患儿60例,其中非21-OHD的CAH患儿22例,回顾性分析其临床表现、实验室结果和基因检测结果。结果通过临床表现和基因诊断的22例非21-OHD患儿,其中女童11例,男童11例,年龄19 d到14.5岁。11β-OHD 8例(8/22);17α-OHD 7例(7/22);先天性类脂性肾上腺皮质增生症(congenital lipoid adrenal hyperplasia,CLAH)5例(5/22);P450氧化还原酶缺乏症(P450 oxidoreductase deficiency,PORD)1例(1/22);3β-羟类固醇脱氢酶2型缺乏症(3β-hydroxysteroid dehydrogenase type 2 defificiency,3βHSD2D)1例(1/22)。5类疾病均有外生殖器发育异常及色素沉着表现,其中17α-OHD组确诊年龄最大,22例患儿发现5种CAH相关基因(CYP11B1、CYP17A1、StAR、POR、HSD3B2),共检测到28种基因变异,其中发现10个未报道过的新变异(CYP11B1基因c.715_731del,c.240-2A>G,c.1359dupG,c.64C>T,c.346T>C,chr8:143957113-143994301,chr8:143957206-143994456片段缺失;CYP17A1基因c.1304T>C;StAR基因c.491C>A;HSD3B2基因c.484G>A),出现频率最高的c.1459_1467del(p.D487_F489del)占CYP17A1等位基因的50%。结论基因检测在早期诊断和治疗非21-OHD中具有重要作用。17α-OHD症检出率与11β-OHD症相仿,且发现p.D487_F489del和p.Y329Kfs是研究主要变异类型。3βHSD2D中发现1个c.484G>A(p.Glu162Lys)纯合突变,该突变既往未见有报道。

防风提取物通过5-羟色胺信号轴对腹泻型肠易激综合征大鼠结肠黏膜肥大细胞的影响

[目的]探讨防风提取物通过5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)信号轴对腹泻型肠易激综合征大鼠结肠黏膜肥大细胞的作用。[方法]60只清洁级健康SD大鼠中随机选择10只作为A组,剩余50只建立腹泻型肠易激综合征模型,建模成功46只,随机分为B组(11只)、C组(11只)、D组(12只)、E组(12只)。A组、B组灌胃5 mL蒸馏水;C组灌胃5-HT信号抑制剂昂丹司琼2.6mg/(kg·d)(溶于5 mL蒸馏水);D组灌胃防风提取物6.3mg/(kg·d)(溶于2.5 mL蒸馏水)+昂丹司琼2.6mg/(kg·d)(溶于2.5 mL蒸馏水);E组灌胃防风提取物6.3mg/(kg·d)(溶于5 mL蒸馏水)。观察各组大鼠精神心理行为变化,检测排便粪点数、直肠内玻璃小球排出时间;以苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法观察结肠黏膜组织病理学改变;甲苯胺蓝染色法检测结肠黏膜肥大细胞数、阳性面积;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,Real-time qPCR)检测结肠组织5-HT3受体(5-HT3 receptor,5-HT3R)、5-HT4受体(5-HT4 receptor,5-HT4R)、色氨酸羟化酶1(tryptophan hydroxylase 1,TPH1)mRNA相对表达量;Western blot检测结肠组织5-HT3R、5-HT4R、TPH1蛋白相对表达量。[结果]与A组比较,B组、C组、D组、E组水平运动次数、垂直运动次数减少,而且C组<B组<D组<E组(P<0.05)。与A组比较,B、C、D、E组粪点数增多,直肠内玻璃小球排出时间减少,且粪点数,E组<D组<B组<C组,直肠内玻璃小球排出时间,C组<B组<D组<E组(P<0.05)。HE染色显示,与B、C组比较,D、E组结肠黏膜上皮较完整,腺体排列较整齐,间质未见炎性细胞、红细胞,其中E组改善更显著。与A组比较,B、C、D、E组肥大细胞数、阳性面积增高,E组<D组<B组<C组(P<0.05)。与A组比较,B、C、D、E组5-HT3R、TPH1 mRNA及蛋白相对表达量升高,5-HT4R mRNA及蛋白相对表达量降低,且5-HT3R、TPH1 mRNA及蛋白相对表达量,E组<D组<B组<C组,5-HT4R mRNA及蛋白相对表达量,C组<B组<D组<E组(P<0.05)。[结论]防风提取物可减少腹泻型肠易激综合征大鼠结肠黏膜肥大细胞数,改善肥大细胞功能及大鼠行为,作用机制可能与调节5-HT信号轴有关。

实验2-(羟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-羧酸的合成研究

文章介绍了2-(羟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-羧酸的合成,适合于大学有机化学实验教学的合成实验。实验是在盐酸的催化下,用3,4-二氨基苯甲酸、羟基乙酸,发生缩合反应生成2-(羟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-羧酸。实验步骤涉及加热回流、抽滤、洗涤、旋转蒸发仪使用和熔点测定等操作技术以及红外光谱和核磁共振等化合物结构鉴定方法。该反应具有原料廉价、装置简易、操作简单、产率较高、反应完成时间短等优点。该实验在有机化学实验或开放型实验中具有较好的理论与教学意义。

重症急性胰腺炎大鼠肾脏1α-羟化酶表达与血钙变化的研究

目的 通过建立大鼠重症急性胰腺炎模型,观察大鼠肾脏1α-羟化酶表达和血清钙水平变化,探讨两者的变化是否有相关性.方法 SPF级雄性Wistar大鼠80只,按随机数字法分为假手术组（SO组）和重症急性胰腺炎组（SAP组）,各组分为1、3、6、12h4个时间点,各时间点10只.经胆胰管逆行注射5％牛磺胆酸钠建立大鼠SAP模型,在各时间点处死大鼠后检测血清淀粉酶、血清钙及血清肌酐与血清尿素氮水平,酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清1,25-二羟维生素D3水平,免疫组化检测肾脏组织1α-羟化酶表达部位及表达量,Western blotting法对肾脏组织中1α-羟化酶表达进行定量分析,光镜下观察胰腺组织及肾脏组织的病理变化,电镜下观察肾脏近曲小管上皮细胞的超微结构改变.结果 与SO组比较,SAP组肾脏组织病理损伤逐渐加重,1、3、6、12 h各时间点血清淀粉酶、血清肌酐、血清尿素氮水平升高（P＜0.05）,3h、6h、12h点血清钙水平及血清1,25-二羟维生素D3水平降低（P＜0.05）,Western blotting肾脏1α-羟化酶表达在1h、3h升高,在6h、12h表达降低（P＜0.05）.SAP组大鼠血清钙水平、1,25-二羟维生素D3水平、肾脏1α-羟化酶表达随时间点推移逐渐降低,Western blotting结果显示SAP组1、3、6、12 h各时间点肾脏1α-羟化酶表达与血清1,25-二羟维生素D3水平呈正相关（r=0.93,P＜0.01; r=0.95,P＜0.01;r =0.92,P＜0.01;r=0.88,P＜0.01）,3、6、12h各时间点肾脏1α-羟化酶表达与血清钙水平呈正相关（r=0.98,P＜0.01;r=0.95,P＜0.01;r=0.75,P＜0.01）.结论 SAP病程早期随着病情发展肾脏损伤逐渐加重,肾脏中1α-羟化酶表达逐渐降低,低钙血症的发生可能与肾脏中1α-羟化酶活性下降有关.

TMB-8抑制5-HT和KCl引起大鼠脑血流量减少

目的 研究TMB 8对 5 HT和KCl引起的大鼠脑血流量 (CBF)减少的作用。方法 用激光多普勒血流仪测量大鼠CBF ,在人工脑脊液灌流液中加入TMB 8和工具药进行干预。结果 1 2 5 ,2 5和 50 μmol·L-1 TMB 8对大鼠CBF无明显影响 ,TMB 8可抑制 5 HT引起的大鼠CBF减少。在 1 μmol·L-1 5 HT引起大鼠CBF持续下降的状态下 ,TMB 8可浓度依赖的增加大鼠CBF。TMB 8也可抑制KCl引起的大鼠CBF减少。在 2 0mmol·L-1 KCl引起大鼠CBF持续下降的状态下 ,TMB 8可浓度依赖的增加大鼠CBF。结论 TMB 8可抑制 5 HT和KCl引起的大鼠CBF减少 ,也可浓度依赖的增加被 5 HT和KCl所减少的大鼠CBF 。

CUS致大鼠抑郁行为涉及TNF-α及IDO-HAAO通路激活

目的研究慢性不可预见刺激(chronically unpredictable stress,CUS)致大鼠抑郁行为与肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、吲哚胺2,3-双加氧酶(indole-2,3-dioxygenase,IDO)及3-羟氨苯甲酸双加氧酶(3-hydroxyl amino acid oxygenase,HAAO)蛋白表达的关系。方法♂Sprague Dawley(SD)大鼠30只,随机分为对照组和模型组,采用孤养结合CUS连续刺激28 d建立大鼠抑郁症模型;以旷场实验和被动游泳实验评价大鼠抑郁行为,以Western blot法检测大鼠前脑皮层和海马TNF-α、IDO及HAAO蛋白表达。结果与对照组大鼠相比,模型组被动游泳实验不动时间明显延长(P<0.01)、旷场实验得分明显降低(P<0.01)、前脑皮层和海马的TNF-α、IDO及HAAO蛋白表达均明显升高(P<0.05)。结论 CUS诱导大鼠产生抑郁行为,其机制可能与激活脑内TNF-α及下游IDO-HAAO通路有关。

1,25-二羟维生素D3研究及应用进展

１，２５－二羟维生素Ｄ３研究及应用进展暨南大学医学院儿科（广州５１０６３２）曾友元综述刘佩玲审校１，２５－二羟维生素Ｄ３又称钙三醇，商品药名为罗钙全（ＲｏｃａｌｔｒｏｌｏｒＣａｌｃｉｔｒｉｄ），是ＶｉｔＤ３经肝、肾代谢后的主要活性形式，有着很重要的生...

hCG对成年小鼠睾丸Leydig细胞中睾酮生成酶的调节作用

目的 从分子水平探讨 h CG对成年小鼠睾丸 L eydig细胞中胆固醇侧链裂解酶 (P45 0 scc)、17α-羟化酶 (P45 0 c17)和 3β-羟甾脱氢酶 (3βHSD)的调节作用。 方法 体外培养成年小鼠睾丸 L eydig细胞 ,分别测定培养1、8h h CG刺激组及对照组细胞培养上清中睾酮含量 ,同时运用半定量 RT- PCR及核酸内切酶酶切方法测定两组细胞中 P45 0 scc、P45 0 c17及 I、VI两型总的 3βHSD的 m RNA水平 ,并测定了 I、VI两型 3βHSD m RNA的比值。 结果 1.培养 1、8h刺激组睾酮含量均明显高于对照组 (1h P<0 .0 1,8h P<0 .0 0 5 ) ;2 .培养 8h,刺激组 P45 0 scc和P45 0 c17m RNA水平明显高于对照组 (P<0 .0 5 ) ;而培养 1、8h刺激组 I、VI两型总的 3βHSD m RNA水平和对照组相比均无明显差异 (P>0 .0 5 ) ,但 VI型 3βHSD m RNA和 I型 3βHSD m RNA的比值逐渐增高。 结论 h CG能在转录水平刺激 P45 0 scc、P45 0 c17及 VI型 3βHSD的表达 ,促进睾酮生成。

补肾活血化痰方改善雄激素致不孕大鼠高雄激素血症的机制探讨

目的观察补肾活血化痰方(BHHR)对雄激素致不孕大鼠(ASR)高雄激素血症的治疗作用及治疗前后ASR卵巢内雄激素合成酶和代谢酶的表达量的变化,并探讨其可能的作用机制。方法 SD雌性大鼠于9日龄在颈背部皮下一次性注射丙酸睾丸酮(1.25 mg)制备ASR模型。将造模成功的ASR随机分为3组,分别为模型组(蒸馏水10 mL/kg灌胃)、二甲双胍治疗组(0.1 g/kg灌胃)和BHHR治疗组(10 mL/kg灌胃),每组各13只。另设正常对照组(n=10)。疗程(28 d)结束后观察大鼠的性周期恢复情况、体质量及卵巢质量/体质量比值。采用放射免疫分析法测定血清睾酮(T)水平;免疫组织化学定量方法检测卵巢3β-羟甾脱氢酶、细胞色素P450 17α-羟化酶/17,20-裂解酶和P450芳香化酶的表达量。结果 (1)性周期恢复:BHHR治疗组及二甲双胍治疗组中恢复性周期的大鼠数量多于模型组(P<0.01)。(2)体质量:模型组大鼠体质量高于正常对照组(P<0.01);BHHR治疗组与二甲双胍治疗组大鼠体质量均较模型组降低(P<0.01)。(3)卵巢质量/体质量比值:模型组大鼠卵巢质量/体质量比值高于正常对照组、BHHR治疗组及二甲双胍治疗组(P<0.01)。(4)血清T水平:模型组大鼠血清T值高于正常对照组、BHHR治疗组及二甲双胍治疗组(P<0.01)。(5)免疫组织化学结果:与模型组和正常对照组相比,BHHR治疗组大鼠P450arom表达升高(P<0.01);BHHR治疗组3β-羟甾脱氢酶、细胞色素P450 1 7α-羟化酶/17,20-裂解酶的表达与模型组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 BHHR可以降低ASR模型大鼠血清T水平,其机制可能是通过上调雄激素代谢酶P450arom的表达而实现的。

模拟微重力对大鼠睾丸中睾酮合成相关基因表达的影响

目的研究雄性大鼠在模拟微重力下睾丸组织中类固醇激素合成相关基因表达的变化,探讨微重力对睾丸中睾酮合成的影响,以及这种影响与血浆睾酮含量变化的关系。方法建立无隐睾尾部悬吊大鼠的模拟微重力模型;采用酶联免疫竞争(ELISA)法测定大鼠血浆睾酮的含量;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测睾丸组织中类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)、细胞色素P450-17α-羟化酶(P450c17)、3β-羟甾脱氢酶(3β-HSD)的mRNA水平的变化。结果雄性大鼠在模拟微重力条件下7d后,睾丸重量极显著减轻(P<0.01),血浆睾酮含量极显著下降(P<0.01),睾丸组织中StAR、P450c17、3β-HSD的mRNA水平显著下调(P<0.05)。结论模拟微重力引起雄性大鼠睾丸中StAR、P450c17、3β-HSD的表达下调,使睾酮合成途径受阻,导致睾酮分泌减少,进而造成血浆睾酮含量下降。

三种防晒剂的测定及在化妆品中的应用

建立了高效液相色谱法同时测定化妆品中二苯酮-3、二乙氨羟苯甲酰基苯甲酸己酯和丁基甲氧基二苯甲酰基甲烷的方法。采用ZORBAX SB-Aq液相色谱柱,甲醇-水(体积比90︰10)作为流动相,检测波长为356 nm。结果表明:在此条件下,这3种防晒剂能够有良好的分离效果,在10~100 mg/kg范围内线性良好,相关系数均大于0.999。该方法的检出限为2 mg/kg,回收率为93%~100.5%,相对标准偏差为0.7%~1.1%。

氨甲苯酸注射液日晒降解产物的研究

目的对氨甲苯酸注射液的日晒降解产物进行研究。方法考察日晒对氨甲苯酸注射液有关物质和pH值的影响,建立UHPLC-Q Exactive Focus MS法对样品中产生的杂质进行结构鉴定并进行毒性预测。结果日照10 d的氨甲苯酸注射液颜色变黄,采用UHPLC-Q Exactive Focus MS推测该杂质的结构为3-羟基-4-羟甲基苯甲酸,当样品中该杂质含量超过0.1%时溶液颜色变黄,对杂质的毒性预测显示,该杂质属遗传毒性5级。结论氨甲苯酸注射液在光和热同时作用下产生杂质3-羟基-4-羟甲基苯甲酸,同时4-甲酰基苯甲酸含量和其他杂质总量明显增加,提示氨甲苯酸注射液应采用棕色安瓿包装为宜,避免阳光直射。

先天性肾上腺皮质增生症罕见类型

先天性肾上腺皮质增生症（CAH）是一组因肾上腺皮质激素合成途径中酶缺陷引起的常染色体隐性遗传病,除常见的21-羟化酶、11β-羟化酶缺陷外,尚包括3β-羟类固醇脱氢酶缺乏症、17α-羟化酶缺乏症及先天性类脂质性肾上腺皮质增生症（CLAH）等罕见类型,临床表现多样,易漏诊或误诊.现重点介绍以上3个罕见类型CAH的分子遗传学、病理生理、临床表现及诊疗原则.