利用恒溶氧-补料分批技术高密度培养大肠杆菌生产重组肿瘤导向多肽LTL-TNF

目的 探讨重组肿瘤导向多肽 L TL - TNF工程菌的大规模培养与表达方法以获取重组 L TL TNF.方法 首先在试管和三角瓶中探讨工程菌的生长和表达规律 ,筛选其最适宿主菌、最佳培养及诱导表达条件 ,然后在 5 L 自控发酵罐中进行分批补料培养 .结果 保持培养过程中 30 %～ 40 %的溶解氧和限制性流加葡萄糖 ,工程菌 DH5 α/ p BV- L TL TNF在5 L 发酵罐中培养至终密度 A6 0 0 nm 40～ 5 0时 ,目的蛋白的表达最高 ,可达菌体总蛋白的 5 0 % ,L TL - TNF的含量达到5 .12 g· L- 1 ,发酵总时间在 12 h左右 .结论 确定了周期短、产率高且稳定可靠的发酵工艺 ,为重组肿瘤导向多肽L TL TNF工程菌的工业化生产奠定了基础 .

肿瘤血管导向肽与人突变IL-2融合蛋白的克隆、表达及生物学活性分析(英文)

目的获得具有生物学活性的与肿瘤血管导向肽(NGR)融合表达的突变人IL-2蛋白。方法将突变人IL-2与NGR的融合基因重组到表达载体pET-22b(+)并转化E.coliBL21(DE3),测序正确后,IPTG诱导表达,并对产物进行纯化、复性和鉴定。结果目的蛋白以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的40%以上,Westernblot分析显示纯化后的目的蛋白具有免疫结合活性,CTLL-2细胞增殖实验证明具有生物学活性。结论具有生物学活性的与肿瘤血管导向肽融合表达的重组人IL-2蛋白可成功地克隆并表达,为进一步的肿瘤导向治疗打下基础。

以多肽导向的靶向造影剂的研究

近年来，生物靶向造影剂的研究已从单杭和单抗片段Ｆ（ａｂ）２、Ｆａｂ深入到更小的多肽片段，即分子识别单位，包括Ｆｖ片段、抗原结合位点片段及小的生物活性肽。这些小的活性分子能够提供更理想的药代动力学性质，到达靶点和血液清除速度快，穿透能力强，本底小，质量好。现代分子工程技术已能合成出具有较好的标记位点、同时保持生物活性的各类多肽的类似物，使标记多肽成为可能。而种类繁多的功能肽以及它们与受体间高度的特异结合性，则为靶向造影剂的研究提供了广阔的天地。