非霍奇金淋巴瘤患儿增殖诱导配体及其受体mRNA水平的定量测定

目的采用实时荧光定量聚合酶链反应(RFQ-PCR)技术分析非霍奇金淋巴瘤(NHL)患儿外周血增殖诱导配体(APRIL)及其受体mRNA水平。方法在APRIL及其受体基因的高保守区设计相应引物和荧光探针,实时检测PCR产物的荧光强度,根据标准品建立的标准曲线,由软件自动计算出待测样本中靶基因中APRIL和B细胞成熟抗原(BCMA)水平,并以靶基因和内参β2微球蛋白(β2M)mRNA水平的比值作为评价靶基因表达水平的指标。结果RFQ-PCR检测靶基因mRNA水平的线性范围为10-109ng/L,批内和批间重复性测定的变异系数(cv)分别为1.68%-5.97%和6.40%-10.58%。NHL 22例APRIL及其受体BCMA和穿膜蛋白活化物(TACI)mRNA表达水平均显著高于正常儿童(P<0.05)。结论成功建立RFQ-PCR检测APRIL及其受体mRNA水平的方法,具有较好的检测灵敏度和重复性;APRIL在儿童NHL的发病过程中可能通过受体BCMA和TACI起重要作用。

肝脏自然杀伤细胞对梗阻性黄疸小鼠模型急性肝损伤的影响及其机制

目的探讨肝脏自然杀伤（NK）细胞对梗阻性黄疸小鼠模型急性肝损伤的影响及其机制。方法将80只小鼠随机分为A组：手术±聚肌胞（PolyI：C）组（n=20）、B组：手术±磷酸盐缓冲液（PBS）组（n=20）、C组：假手术±PolyI：C组（n=20）、D组：假手术±PBS组（n=20）。手术组行胆总管双重结扎术构建梗阻性黄疸模型，假手术组仅游离胆总管。A、C组腹腔注射PolyI：C，B、D组注射等量PBS作为对照。于第7天比较各组血清丙氨酸转氨酶（ALT）、肝组织病理学及实时荧光定量聚合酶链反应检测肝脏NK细胞表面标志（NK1．1）、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）及肿瘤坏死因子（TNF）-α mRNA表达量变化。结果手术组血清ALT[A：（562．33±173．28）U／L，B：（383．09±144．56）U／L]高于假手术组[C：（26．204-3．97）U／L，13：（25．38±4．63）U／L]，A组较B组升高（P〈0．05）。肝脏HE染色A组较B组坏死面积增大。NK1．1mRNA相对表达量A组为159．96±17．26、B组为36．04±4．42、C组为87．79±6．68、D组为1．00±0．25，各组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。TRAILmRNA与TNF—αmRNA表达量分别为A组11．83±0．88、5．79±0．94，B组1．96±0．29、3．03±0．60，C组1．05±0．17、1．47±0．06，D组1．104-0．12、1．00±0．13，A组高于B组（P〈0．01），C组与D组比较差异元统计学意义（P〉0．05）。结论PolyI：C诱导小鼠NK细胞活化及肝内聚集，加重梗阻性黄疸小鼠肝损伤，其可能通过TRAIL途径参与梗阻性黄疸小鼠模型急性肝损伤。