脆性X智力低下基因的体外封闭

目的 初步建立一种FMR1基因的体外封闭方法 ,并初步探讨将其用于脆性X综合征研究的可能性 ;方法 利用NO可以诱导FMR1基因启动子区CpG岛甲基化的原理 ,将人类新鲜的外周血单个核细胞在含有 5 0 0 μmol/L硝普钠及2 0 %新生牛血清的RPMI 16 4 0培养基中培养 ,诱导FMR1基因启动子区CpG岛甲基化 ,从而使FMR1基因封闭 ,通过逆转录PCR ,检测FMR1基因的表达 ;结果 培养后第 12h、2 4h、4 8h均未检测到FMR1基因的表达 ,第 72h以后 ,重新表达 ,若于培养满 4 8h及时更换培养液 ,则培养第 72h亦未见表达 ;结论 本方法可在体外有效地封闭人类外周血单个核细胞的FMR1基因 ,模拟了脆性X综合征患者细胞的基因特点 。

HBV感染基因封闭治疗中的两个研究热点

由于目前抗乙型肝炎病毒(HBV)感染的治疗效果并不令人满意,近年来一些学者提出了基因封闭治疗HBV感染的思路并进行了深入的研究。基因封闭涉及多个方面,其中反义技术和抑制性转录后调节序列结合蛋白是其中的两个主要部分,由于两者的高效性、高特异性和较强的可行性,使之成为现阶段基因封闭治疗研究中的两个热点。

强心汤对OMA1封闭心力衰竭大鼠心肌组织Caspase-3、Bax、Bcl-2表达的影响

目的:观察强心汤对大鼠心肌组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、Bcl-2家族相关x蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)表达的影响,探讨强心汤调控心肌细胞凋亡的可能作用机制。方法:采用结扎大鼠冠状动脉左前降支的方式建立慢性心力衰竭(CHF)大鼠模型,将50只SD大鼠按随机数字表法分为5组,分别为模型组、金属蛋白酶相关蛋白1(OMA1)封闭组、强心汤组、OMA1封闭+强心汤组、假手术组,其中假手术组大鼠的左冠状动脉只穿线不结扎。经心脏彩超检测提示大鼠左室射血分数(LVEF)下降20%~30%左右判定造模成功,成功造模后第2天开始,相应实验组分别进行OMA1基因封闭,等剂量强心汤混悬液、生理盐水灌胃处理,4周后使用心脏彩超检测各组大鼠心脏左室心功能指标,即左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)、LVEF。采用逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)、蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测大鼠心肌组织中OMA1及Caspase-3、Bcl-2、Bax的mRNA和蛋白表达情况。结果:与假手术组相比,模型组大鼠LVEDD、LVESD升高,LVEF降低,心肌组织OMA1及Caspase-3、Bax mRNA和蛋白表达均升高,Bcl-2 mRNA和蛋白表达均下降(P<0.05)。各干预组与模型组比较,干预组大鼠左室心功能明显改善,心肌组织的OMA1及Caspase-3、Bax、Bcl-2 mRNA和蛋白表达均优于模型组;各干预组间比较上述指标改善情况显示OMA1封闭组优于强心汤组,OMA1封闭+强心汤组优于OMA1封闭组和强心汤组(P<0.05)。结论:强心汤可能通过上调Bcl-2和下调OMA1、Bax、Caspase-3的表达水平,调控心肌线粒体功能和心肌凋亡,从而保护心肌,改善心功能。

封闭异氰酸酯几种反应的动力学

封闭异氰酸酯广泛地应用于各种单组分涂料、粉末涂料和胶粘剂中。近年来 ,随着人们对水性聚氨酯的重视和开发 ,封闭异氰酸酯的重视和使用程度进一步加大。本文对封闭异氰酸酯的相关反应的动力学进行了综述 。

肿瘤基因治疗前景

肿瘤基因治疗前景上海医科大学（２０００３２）孔宪寿癌症发生的分子基础是原癌基因的活化或（和）抑癌基因的失活或缺失，导致某些细胞分化不良和增植失控而形成肿瘤，因此癌症是一类基因异常所致的疾病。对癌症的根本治疗途径为基因治疗（ｇｅｎｅｔｈｅｒａｐｙ）。基...

肿瘤基因治疗

利用细胞工程技术将外源目的基因导入人体靶细胞或组织以取代有缺陷的基因，通过其正常表达，以达到防治肿瘤的目的。肿瘤基因治疗基本策略主要有以下几种方式：基因替代（gene replacement）、基因修饰（gene modification）、基因添加（gene addition）、基因补充（gene supplement）、基因封闭（gene block）。

siRNA及其在肿瘤研究中的应用

RNAi(RNAinterference)是体内一种新近发现的基因沉默现象。在多种生物体内发现 ,外源性dsRNA(双链RNA)诱导启动RNAi特异性抑制外来基因表达。体外应用长dsRNA在哺乳动物细胞只能引起非特异性的基因封闭作用 ,限制了RNAi的应用。最近发现 2 1ntsiRNA(smallinterferenceRNA)可以特异性抑制靶基因的表达 ,从而为RNAi在哺乳动物的研究开辟了新的方向。作为一种有效的基因封闭工具 ,siRNA在肿瘤研究中立即得到广泛应用。现总结国内外关于siRNA的作用特点、作用机制的相关文献 ,探讨siRNA在肿瘤研究中的应用及目前仍存在的问题 ,展望siR NA作为一种新型基因封闭工具的应用前景。

RNA干扰在乳腺癌研究中的应用

RNAi（RNA interference）是指内源性或外源性双链RNA（double—stranded RNA，dsRNA）分子在基因转录水平上关闭相应序列基因转录所致的细胞内有效的、特异性的基因封闭。RNAi现象广泛存在于生物界，是生物体抵御病毒或其他外来核酸人侵而保持自身遗传稳定的保护性机制，1998年，

细胞周期素D1反义cDNA治疗肝癌的研究

目的通过基因反义封闭技术抑制细胞周期素D1(CyclinD1)的表达,研究其对肝癌细胞增殖以及成瘤性的影响。方法以肝癌HepG2细胞株为研究对象,通过转染可表达CyclinD1反义互补脱氧核苷酸(AScDNA)的质粒后,观察CyclinD1反义cDNA对肝癌细胞CyclinD1基因表达、体外增殖活性及裸鼠体内成瘤性的影响。结果噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性显示转染表达反义CyclinD1的质粒后,HepG2细胞的增殖受到抑制,抑制作用在48h左右最强;逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测显示CyclinD1mRNA基因的表达明显被抑制;间接免疫荧光检测结果显示CyclinD1蛋白表达显著降低;流式细胞仪检测结果显示G0/G1期的细胞比例增高,G2+M和S期的细胞比例下降,HepG2细胞周期在G1期被阻滞;裸鼠成瘤试验显示肝癌HepG2细胞的成瘤性受到明显抑制。结论CyclinD1反义cDNA可以特异性的抑制肝癌HepG2细胞株CyclinD1蛋白的表达,从而调控细胞周期,抑制肝癌细胞增殖及体内成瘤性。CyclinD1反义cDNA对于肝细胞癌的生物治疗具有一定的应用前景。

强心汤对慢性心力衰竭模型大鼠心肌组织OMA1、OPA1表达及线粒体形态的影响

目的探讨强心汤治疗慢性心力衰竭的可能作用机制。方法50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、金属蛋白酶相关蛋白1(OMA1)封闭组、强心汤组、OMA1封闭+强心汤组,每组10只。除假手术组外其余各组大鼠采用结扎左冠状动脉前降支建立慢性心力衰竭大鼠模型,OMA1封闭组和OMA1封闭+强心汤组在建立模型前第1和第7天各尾静脉注射2×10^(10)pfu OMA1干扰腺病毒对大鼠OMA1表达封闭。自建模成功后第2天开始,强心汤组、OMA1封闭+强心汤组给予强心汤混悬液每次1.62g/kg灌胃,每天2次;其余各组给予2ml生理盐水灌胃,每天2次。各组均灌胃14天后检测心功能,包括左室舒张末期内径(LVDD)、左室收缩末期内径(LVDS)、射血分数(EF);采用RT-PCR和免疫组化检测各组大鼠心肌组织OMA1、视神经萎缩蛋白1(OPA1)mRNA表达及OMA1、OPA1、长链形式视神经萎缩蛋白1(L-OPA1)、短链形式视神经萎缩蛋白1(S-OPA1)蛋白表达,同时通过透射电镜观察各组大鼠心肌组织线粒体形态。结果与假手术组比较,模型组大鼠LVDD、LVDS升高,EF降低,心肌组织OMA1 mRNA和OMA1、S-OPA1蛋白表达升高,OPA1 mRNA和OPA1、L-OPA1蛋白表达降低(P<0.05),线粒体呈重度肿胀,大多线粒体板呈不规则形、膜内基质变淡,嵴断裂、消失。与模型组比较,各干预组大鼠上述各指标均明显改善,且OMA1封闭+强心汤组改善程度优于OMA1封闭组和强心汤组,OMA1封闭组改善程度优于强心汤组(P<0.05)。结论强心汤可能通过抑制OMA1表达、降低OPA1的蛋白水解及减少L-OPA1向S-OPA1过度裂解,从而发挥保护线粒体形态和改善心功能的作用,并且能与OMA1基因封闭发挥协同作用。

质粒介导RNAi靶向hTERT抑制K562细胞端粒酶活性的研究

目的研究质粒载体介导的 RNAi 靶向 hTERT 对白血病细胞株 K562 hTERT 基因封闭、端粒酶活性抑制的作用。方法针对 hTERTmRNA 化学合成3条 siRNA 链转染K562细胞,分别在24 h、48 h、72 h 检测对靶基因