血清CLDN5、OCLN和ZO1与颅脑损伤急性期患者损伤程度及预后的关系

目的探讨非开放性颅脑损伤急性期患者血清中封闭蛋白5(CLDN5)、密封蛋白(OCLN)和紧密连接蛋白1(ZO1)的含量与患者损伤严重程度及预后的关系。方法收集2014年2月至2015年2月非开放性颅脑损伤急性期患者92例。患者入院后立即留取外周血,检测血清中CLDN5、OCLN和ZO1的含量,分析三者与患者格拉斯哥昏迷评分(GCS)、颅内血肿体积的关系以及对患者预后的判断价值。结果不同GCS的患者间血清CLDN5和OCLN含量均有统计学差异(均P<0.05);不同血肿体积的患者间CLDN5和OCLN含量均有统计学差异(均P<0.05);死亡患者的血清CLDN5和OCLN含量明显高于存活组(均P<0.05),在不同GCS、血肿体积和预后的患者间比较,ZO1含量均无统计学差异(均p>0.05)。GCS与血清CLDN5、OCLN含量均呈负相关(r_(CLDN5)=-0.84,r_(OCLN)=-0.85,均P<0.01),与ZO1无相关性(r_(ZO1)=0.14,P>0.05);血肿体积与血清CLDN5、OCLN和ZO1含量均呈正相关(r_(CLDN5)=0.82,r_(OCLN)=0.93,r_(ZO1)=0.82,均P<0.01)。结论血清CLDN5、OCLN可以作为急性颅脑损伤患者病情严重程度和预后判断的有效生物标志物。

自发性脑出血患者血清血管内皮细胞紧密连接蛋白水平的意义

目的探讨急性脑出血患者血清封闭蛋白5(claudin 5,CLDN5)、紧密连接蛋白1(zonula occludens 1,ZO1)在自发性脑出血血肿体积扩大判断中的价值。方法选取2016年6月至10月自发性脑出血患者共89例。记录患者年龄、性别、高血压病史、格拉斯哥昏迷评分(GCS)评分、就诊时间、出血部位、初次出血量等一般资料,入院后即采用ELISA法检测静脉血CLDN5、ZO1水平。入院24h内复查头颅CT并计算出血量,根据血肿是否扩大分为扩大组和稳定组,分析CLDN5、ZO1水平与血肿扩大的关系。结果自发性脑出血血肿扩大患者的外周血CLDN5、ZO1水平(456.05±114.48)、(244.90±66.53)pg/ml明显增高,与血肿稳定组(293.17±82.64)、(194.63±42.09)pg/ml比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。扩大组、稳定组GCS评分比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。多因素logistic回归分析发现,CLDN5和ZO1水平是自发性脑出血血肿扩大的独立危险因素。CLDN5预测血肿扩大的AUC为0.853(95%CI:0.766~0.941,P<0.001),ZO1的AUC为0.754(95%CI:0.651~0.857,P<0.001)。结论 CLDN5、ZO1水平在自发性脑出血血肿扩大患者中明显升高,是血肿扩大的独立危险因素,可用于早期预测血肿是否会扩大。

血必净注射液通过PI3K/Akt/FOXO1信号通路上调claudin-5表达改善ARDS大鼠肺血管屏障功能

目的探讨血必净注射液上调紧密连接蛋白claudin-5表达的信号通路。方法利用脂多糖(LPS)建立急性呼吸窘迫综合征(ARDS)动物模型和细胞模型。①体内实验:将20只雄性SD大鼠随机分为4组,每组5只。正常对照组大鼠不做任何处理;LPS诱导组腹腔注射10 mg/kg LPS 12 h;血必净对照组腹腔注射1 mg/kg血必净注射液,每日2次,连续3 d;血必净干预组用血必净注射液预处理后腹腔注射10 mg/kg LPS 12 h。取大鼠肺脏,检测肺湿/干质量比值(W/D)和大鼠肺组织形态学改变;免疫组织化学染色(IHC)和蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测大鼠肺组织claudin-5、磷酸化叉头框蛋白O1(p-FOXO1)、总叉头框蛋白O1(t-FOXO1)、磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-Akt)、总Akt(t-Akt)蛋白表达。②体外实验:将人肺微血管内皮细胞(HPMECs)分为6组,每组5孔。正常对照组、血必净对照组(与2 g/L血必净共同孵育24 h)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)通路抑制剂LY294002对照组(与10μmol/L LY294002共同孵育1 h)、LPS诱导组(与1 mg/L LPS共同孵育12 h)、血必净干预组(用2 g/L血必净预处理24 h后与1 mg/L LPS共同孵育12 h)、LY294002干预组(与10μmol/L LY294002共同孵育1 h后加入2 g/L血必净孵育24 h,然后再与1 mg/L LPS共同孵育12 h)。用Western blotting检测每组HPMECs中claudin-5、p-FOXO1、t-FOXO1、p-Akt、t-Akt蛋白的表达。结果体内实验结果:①肺组织W/D比值:LPS诱导组较正常对照组显著升高(6.79±0.42比4.19±0.13),经血必净干预后较LPS组明显下降(4.92±0.38比6.79±0.42,P<0.01)。②肺组织形态学改变:与正常对照组比较,LPS诱导组损伤严重,经血必净干预后明显改善。③claudin-5、p-Akt/t-Akt、p-FOXO1/t-FOXO1蛋白表达水平:LPS诱导组各蛋白均较正常对照组明显降低〔claudin-5蛋白(claudin-5/GAPDH):0.33±0.03比1.03±0.07,p-Akt/t-Akt:0.18±0.02比1.01±0.13,p-FOXO1/t-FOXO1:0.16±0.06比1.00±0.19,均P<0.01〕;经血必净干预后表达水平较LPS诱导组显著增高〔claudin-5表达(claudin-5/GAPDH):0.53±0.05比0.33±0.03,p-Akt/t-Akt:0.56±0.12比0.18±0.02,p-FOXO1/t-FOXO1:0.68±0.10比0.16±0.06,均P<0.01〕。体外实验结果:LPS诱导组及血必净干预组claudin-5蛋白均较正常对照组明显降低(claudin-5/β-actin:0.45±0.03、0.80±0.08比1.01±0.15,均P<0.01);LY294002干预后claudin-5表达较血必净干预组明显下降(claudin-5/β-actin:0.41±0.02比0.80±0.08,P<0.01)。结论血必净通过PI3K/Akt/FOXO1信号通路上调claudin-5,从而改善ARDS的肺血管屏障功能。