棉花基因组封阻DNA制备方法探讨

棉花基因组大,重复序列含量高,在荧光原位杂交研究中,需要利用基因组封阻DNA降低背景信号。本试验以棉花基因组DNA为材料,通过煮沸法和超声波法进行处理,探讨棉花基因组封阻DNA的制备方法。结果表明,DNA样品沸水浴70min和80 min时,DNA片段长度主要集中在200～800 bp,可以满足封阻DNA的要求;超声波打断法处理影响参数较多,在总超声波处理时间10 min、间隔时间20 s、功率25%的条件下,超声时间60 s时,DNA片段大小主要集中于400 bp以下,基本可以满足长度要求。综合比较2种棉花封阻DNA制备方法,煮沸法要比超声波破打断易于控制,更适合于实验室常规采用。

GISH中杂交鲷亲本封阻DNA不同制备方法的效果

目的:基因组荧光原位杂交(GISH)作为一种细胞遗传学的研究方法,以其特定的优点被越来越广泛的应用于杂种染色体分析、染色体行为考察等方面。采用适当的封阻DNA制备方法得到合适的封阻DNA从而使得在基因组原位杂交中大大提高杂交效率,更能突显GISH方法的优势。方法:采用煮沸法和超声波破碎法对杂交鲷亲本真鲷(♀)、黑鲷(♂)DNA进行剪切研究了两种鲷类封阻DNA的制备。结果:煮沸15 min时DNA已被切断。煮沸70 min以后,DNA片段更加集中,主要分布在500bp左右。煮沸90 min或者煮沸120 min以后发现,DNA电泳条带主要分布于250 bp附近,已达到GISH所需封阻DNA片段大小的要求。结论:煮沸法对基因组DNA的剪切,与超声波清洗仪剪切DNA相比,具有更高的效率。研究结果为基因组荧光原位杂交的顺利进行提供了条件。