复方中草药对小丑鱼非特异性免疫、消化酶活性的影响及对刺激隐核虫杀灭效果分析

刺激隐核虫寄生感染引起的“白点病”不仅危害水族箱观赏鱼类,还会对水族馆大水体海水观赏鱼带来毁灭性打击,是海水观赏鱼养殖业危害最为严重的病害之一。本研究探讨了在基础饲料中添加不同剂量复方中草药“XCY-1”(苦参、地肤子、蛇床子、黄芪、甘草等按一定比例混合,超微粉碎后收集备用)对小丑鱼血清、肝脏中非特异性免疫指标和肠道消化酶活性指标变化及不同用药方式对防治刺激隐核虫病的效果。研究结果显示,投喂复方中草药“XCY-1”可使小丑鱼血清中溶菌酶(LZM)、超氧化物歧化酶(SOD)、碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP),肝脏中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、过氧化氢酶(CAT)、总抗氧化能力(T-AOC)活性均呈现先升后降趋势,第21 d各项非特异性免疫指标达到最高值,其中20 g/kg剂量组效果最好,能显著提高小丑鱼的免疫能力;肠道中淀粉酶(AMS)、脂肪酶(LPS)和胰蛋白酶在各取样点活性均高于对照组,20 g/kg剂量组在各取样点胰蛋白酶和AMS活性高于其他剂量组,20 g/kg和40 g/kg剂量组在各取样点LPS活性最高。复方中草药“XCY-1”药浴对刺激隐核虫幼虫的体外杀灭结果显示:4 h内,50 mg/L药物浓度即对刺激隐核虫幼虫具有一定的杀灭效果,400 mg/L药物浓度即可杀灭全部幼虫;当药物浓度达到800 mg/L时,3 h内幼虫全部死亡。不同用药方式防治小丑鱼刺激隐核虫病:实验分为4组,A组20 g/kg剂量组,口服无药浴;B组20 g/kg剂量组,口服且同时按50 mg/L进行药浴;C组20 g/kg剂量组,口服且同时按100 mg/L进行药浴;D组为对照组,仅投喂基础饲料。结果显示:实验第6 d,A、B、C三个药物组与对照组的存活率分别为:51.1%、53.3%、57.7%、0,药物组存活率显著高于对照组(P<0.05);三个药物处理组每片鳃上仅有0~2个滋养体,对照组每片鳃上滋养体数量是用药组65倍。综上所述,饲料中添加复方中草药“XCY-1”可以提升小丑鱼血清、肝脏非特异性免疫指标和肠道消化酶活性,对刺激隐核虫病起到积极的预防和治疗效果。20 g/kg剂量组、投喂时间14~21 d时效果最佳。该研究为开发无公害、环保型天然植物源杀虫药提供理论参考和技术支撑。

小丑鱼亲鱼培育技术要点

小丑鱼也称海葵鱼,隶属于雀鲷科、双锯鱼属,约有28种。小丑鱼色彩美丽,是珊瑚礁中可爱的“小精灵”,已成为大众最为喜爱的观赏鱼之一,相关产业在发展休闲渔业、促进农户增产增收等方面具有广阔的市场前景。项目组在天津市海水养殖产业技术体系等支持下,利用示范基地相关设施设备开展了小丑鱼亲鱼培育工作,现将相关技术要点介绍如下。

喷点雪印小丑鱼的胚胎及仔、稚、幼鱼形态发育观察

为建立喷点雪印小丑鱼(Amphiprion sp.)人工繁育技术,在人工模拟自然条件下对其繁殖习性、胚胎发育及胚后发育进行观察。结果表明:喷点雪印小丑鱼受精卵长径为1.9~2.1 mm,短径为0.93~0.95 mm;胚胎发育主要经历受精卵期→胚盘期→卵裂期→囊胚期→原肠胚期→神经胚期→器官形成期→孵化期等;在水温为(27±0.5)℃时,受精卵约需197 h孵化出膜。初孵仔鱼全长(4.415±0.412)mm,身体透明,鳍膜明显,卵黄囊仅剩小部分残留,并已开口摄食。9日龄全长(6.813±0.835)mm,鳍膜消失,各鳍基本形成,头部开始出现纹带,进入稚鱼期。21日龄全长(10.581±2.659)mm,身体被鳞,体色、纹路开始分化。35日龄全长(15.512±4.927)mm,形成4种不同体色、纹路的幼鱼。作为人工选育的品系,喷点雪印小丑鱼胚后发育过程中最为明显的变化是幼鱼期体色、纹路等形态特征的形成与分化。

小丑鱼繁育用SS型轮虫培育技术

小丑鱼初孵仔鱼口裂较小,且一般适宜在水温(28±3)℃、盐度20~25的环境下生长,因此一般选择SS型轮虫作为饲喂饵料。褶皱臂尾轮虫生命力强、繁殖快、营养丰富、大小适宜、易于培养,是多种鱼的开口饵料。通过等位酶研究,Gómez A等(1995)将该种轮虫群体分为L、SM和SS型3类,其中SS型平均体长为(148.7±1.3)微米,平均体宽为(120±0.9)微米(Ciros P J等,2001)。2022年项目组在天津某水产养殖公司建立了SS型轮虫培养体系,现将技术总结如下。

公子小丑鱼性逆转过程中性腺的组织学观察

公子小丑鱼是典型的性逆转物种,其生长发育过程中先是雄性,继而转变为雌性,且性别转化不可逆转。本实验随机选取不同规格(3.8~10.0 cm)的野生公子小丑鱼26条,记录体长和体重,进行石蜡切片和HE染色,将不同时期公子小丑鱼的性腺发育变化与体长和体重耦合起来。分析体长与体重,得到公式y = 1.6943x − 6.2626 (y为体重,x为体长)。研究表明,当公子小丑鱼体长 ≤ 6.9厘米,体重 ≤ 5.4克时,处于雄性阶段,当公子小丑鱼体长 ≥ 6.9厘米,体重 ≥ 5.4克时,处于雌性阶段。本研究对于小丑鱼的亲本构建及育种有一定的参考价值。

小丑鱼规模化繁育技术研究

小丑鱼，也称海葵鱼，属于雀鲷科，双锯鱼属，共有28种，它们是珊瑚礁中可爱的小精灵，色彩美丽且性情温和，健壮活泼易饲养，几乎所有饲养海水观赏鱼的人都会优先选择它们作为入门的品种。

小丑鱼幼鱼人工配合饲料初步研究

[目的]研制经济适用的小丑鱼幼鱼人工配合饲料。[方法]利用自制的2种配合饲料和鲜虾肉（对照组）投喂全长2cm左右的克氏双锯鱼和白条双锯鱼幼鱼进行56d的养殖试验，以评价自制配合饲料对小丑鱼生长和色彩的效果。[结果]结果表明，不同饲料（饲料A、饲料B及鲜虾肉）对2种小丑鱼幼鱼生长影响无显著差异，饲料B在饲料A的基础上添加了一定量的虾青素，使用7～10d即具有明显的增色作用，达到了鲜虾所不能达到的着色效果。饲料A和饲料B交替使用比使用鲜鱼虾具有明显的优势。[结论]人工饲料取代鲜活饵料是可行的。

毕加索小丑鱼胚胎发育的形态学观察

通过人工模拟自然环境,饲养毕加索小丑鱼直至性成熟,观察其繁殖习性及胚胎发育过程中不同时期的形态变化.结果表明,毕加索小丑鱼的胚胎发育主要经历受精卵期→胚盘期→卵裂期→囊胚期→原肠胚期→神经胚期→器官形成期→孵化期等.毕加索小丑鱼每次产卵量为300~600粒左右,黏性卵,成片附着于瓦盆上,种鱼具有明显的护卵行为.受精卵为橘黄色,长椭圆形,长径2.2±0.1 mm,短径0.92±0.10 mm.在26±1℃水温条件下,毕加索小丑鱼的胚胎发育过程大约需要217 h左右.

温度和体长对红小丑鱼(Amphiprion frenatus)耗氧率和窒息点的影响

采用静态呼吸室法,研究了体长2～7 cm红小丑鱼（Amphiprion frenatus）的单位体长耗氧率、单位体重耗氧率和窒息点,及其与体长（体重）和温度的关系。结果显示,红小丑鱼单位体长耗氧率与体长正相关,在26～30℃时,可用方程ORL=0.074L1.111表示,而在22℃时,方程为ORL=0.044L1.127。温度对单位体长耗氧率的影响因鱼体长不同而有差异,2 cm组和7 cm组红小丑鱼单位体长耗氧率随温度升高先升高后下降,3.5cm组和5 cm组红小丑鱼单位体长耗氧率随温度升高而升高,但同体长组26℃和30℃时单位体长耗氧率无显著差异,26～30℃为红小丑鱼的最适水温。温度和体长对红小丑鱼的窒息点没有显著影响,其平均值为（1.268±0.219）mg·L-1。单位体重耗氧率为0.387～2.217 mg·h-1·g-1,与温度呈正相关,与体重呈负相关。各组红小丑鱼的Q10值在22～26℃时均大于2,26～30℃时2 cm组和7 cm组Q10值分别为0.85和1.30,均小于2。总体而言,红小丑鱼对水温变化的适应能力较弱,在养殖过程中应保持水温的稳定或小幅升降,特别是当水温在26℃以下时更应如此;红小丑鱼可根据体长不同进行分段养殖,并可根据体长及对应的单位体长耗氧率来确定合理的养殖与装运密度。

小丑鱼室内循环水养殖设施与技术

为了实现规模化人工养殖小丑鱼(Amphiprioninae),研发了小丑鱼室内循环水养殖设施和技术。1组循环水养殖系统由10个玻璃钢养殖桶和1个水处理玻璃缸及管道系统组成,采用物理过滤、生化过滤、藻板过滤进行循环水处理。1组循环水养殖系统每3个月可养殖产出全长约3.5 cm的商品小丑鱼5 000尾,养殖存活率达80%以上。从2014年至2015年,利用该设施养殖生产出商品小丑鱼10余万尾。和常规的食用海水鱼循环水养殖设施相比,小丑鱼室内循环水养殖系统主要减少了蛋白分离器、气浮机、微滤机等设备,增加了藻板过滤设施。研究表明,小丑鱼室内循环水养殖系统建造成本低、运行能耗低、管理维护简单、水质稳定,可基本实现全封闭循环水养殖,适合进行小丑鱼等海水珊瑚礁观赏鱼类的规模化养殖生产。

基于转录组测序技术对调控毕加索小丑鱼(Picassoclownfish)白化体征关键基因的研究

毕加索小丑鱼(Picasso clownfish)因其皮肤中的白色斑块分布杂乱抽象而得名,同时也由于其白色斑块的形成无规律性和稀缺性,属于名贵的小丑鱼,因此,解析毕加索小丑鱼的皮肤白斑形成机制,可以为毕加索小丑鱼的人工育种提供理论依据。在本研究中,我们对3种体色毕加索小丑鱼的背鳍和臀鳍之间的身体相同部位3种色块(黑色、黄色、白色)的皮肤进行进行了转录组测序。研究结果显示,与黄色和黑色皮肤组织相比,在白色皮肤组织中存在大量差异表达基因。其中与黑色素产生相关的信号通路(例如黑色素生成、Hedgehog信号通路和Wnt信号通路)中的基因在白色皮肤组织中呈下调表达趋势。进一步对3种颜色皮肤组织中参与黑色素生成途径的基因进行详细分析,发现上游调控基因(如ednrba和mitfa)表达量从黑色到黄色至白色皮肤组织中逐步下调,但下游参与黑色素合成的核心基因(包括tyr、tyrp1b和dct)则在白色皮肤组织中表达出现显著下调。最后,本研究通过荧光定量PCR验证了转录组数据的可靠性。本研究结果将为今后人为干扰基因表达从而达到调控小丑鱼体色提供理论依据。

基于线粒体16S rRNA、COX1和Cytb基因探讨11种小丑鱼的系统发育关系

采用线粒体16S rRNA、COX1和Cytb基因测定11种小丑鱼的序列,分析其基因序列差异和遗传距离关系,并用邻接法、最大似然法和贝叶斯法构建系统进化树,探讨了11种小丑鱼的系统发育关系。序列分析结果显示,经比对处理后的3个基因总长度4 388bp,其中多态位点1 028个,简约信息位点616个,转换与颠换比为2.12,A+T的平均含量为54.7%,高于C+G的平均含量45.3%。系统发育关系表明:(1)双锯鱼亚科为单系发生,但双锯鱼属不为单系发生,建议对棘颊雀鲷属重新定位;在双锯鱼属中,公子小丑鱼Amphiprion ocellaris和黑边公子小丑鱼Amphiprion percula聚为一支,为双锯鱼亚科分子亲缘关系基础;(2)透红小丑鱼Premnas biaculeatus在双锯鱼属的定位较为模糊,贝叶斯树显示透红小丑鱼P.biaculeatus与公子小丑鱼A.ocellaris和黑边公子小丑鱼A.percula聚成一支并位于该支的底端,而NJ树和ML树中透红小丑鱼却没能和公子小丑鱼A.ocellaris和黑边公子小丑鱼A.percula聚为一支,而是和其他小丑鱼汇聚成一支;(3)透红小丑鱼P.biaculeatus与金透红小丑鱼Premnas epigrammata是同一种。

透红小丑鱼的繁殖习性、胚胎发育和胚后发育

为了补充确定透红小丑鱼的分类地位，对透红小丑鱼的繁殖习性及胚胎发育等进行了观察。结果表明：透红小丑鱼的产卵时间持续近1h 20min，产卵量多达1400粒；受精卵长径1．5—1．7mm，短径0．63～0．67mm；胚胎发育过程包括胚盘期、卵裂期、囊胚期、原肠胚期、神经胚期、器官形成期和孵化期共7个时期；在水温（26．5±0．5）℃时，受精卵约需198h15rain孵化出膜；初孵仔鱼全长3．0～3．6mm，18d进入稚鱼期，45d进入幼鱼期。

南极磷虾粉替代鱼粉对公子小丑鱼生长性能、饲料利用和体色的影响

以初始体质量为0.70±0.04g的公子小丑鱼为研究对象,采用南极磷虾粉分别替代饲料中0%、30%、60%和90%的鱼粉,配制四种等氮等能饲料(对照组S0、S30、S60和S90),在循环水养殖系统中开展50d的投喂实验,研究南极磷虾粉替代鱼粉对公子小丑鱼生长性能、饲料利用和体色的影响。结果表明:随着南极磷虾粉替代鱼粉比例的升高,公子小丑鱼的质量增加率WG和特定生长率SGR均呈现先上升后下降的趋势,且30%替代组显著高于其他组。饲料系数FCE在不同处理组间也存在显著性差异,南极磷虾粉替代30%鱼粉组的小丑鱼饲料系数最低。基于特定生长率和饲料系数的二次回归模型计算南极磷虾粉替代鱼粉的最佳比例为40.24%~41.77%。饲料中添加南极磷虾粉投喂公子小丑鱼后,其头部、背部和尾部橘黄色斑块的颜色亮度L*、a*和b*色度值都出现不同程度的升高,说明南极磷虾粉增强了小丑鱼的色彩饱和度,起到了着色作用。

天津地区公子小丑鱼繁育技术初探

本文对公子小丑鱼这一观赏鱼养殖品种进行繁殖试验，旨在为天津地区家庭式水族缸养殖的种源保证进行尝试性研究。其中产卵量为600粒／次，总共产卵3次，产卵约2100粒,共孵出仔鱼约1600尾。培育25cm幼鱼632尾．孵化率约76.2％，仔鱼成活率为39.5％。

小丑鱼集约化循环水繁殖设施和技术

为了商业化繁殖小丑鱼,研发了小丑鱼集约化循环水繁殖设施和技术。繁殖设施主要由木架、培育缸、管道系统、水处理底缸等组成,1组集约化循环水繁殖设施可培育21对小丑鱼亲鱼。试验结果:人工培育条件下小丑鱼的繁殖习性相似,常年连续产卵,正常产卵间隔为9~15 d,每次产卵500~2 500粒,原缸孵化,正常孵化率在50%以上,水温27℃时,孵化时间为7~8 d。结果表明,小丑鱼集约化循环水繁殖设施在较小的室内空间可培育较多的小丑鱼亲鱼,并且培育水质良好、稳定,繁殖设施中的小丑鱼亲鱼可连续并稳定地保持较高的产卵量和孵化率,达到商业化繁殖生产的要求。

高效液相色谱法测定红小丑鱼中虾青素和叶黄素含量

为建立检测红小丑鱼皮肤和鳍组织中虾青素、叶黄素含量的高效液相色谱分析方法。样品经丙酮提取,甲基叔丁基醚萃取,纯水分离杂质,LC-NH2净化,C18色谱柱分离,流动相为甲醇∶水(98∶2,v/v),紫外检测波长475 nm,外标法定量。虾青素和叶黄素标准品0.02~1μg/m L线性关系良好,虾青素相关系数为0.998,叶黄素相关系数为0.999,加标回收率分别为79.92%~90.32%和78.51%~97.60%,相对标准偏差分别为6.35%~7.07%和10.79%~13.41%。该方法前处理简单,能同时测定红小丑鱼组织中虾青素和叶黄素含量。

温度和pH对公子小丑鱼幼鱼消化酶活性的影响

研究了温度和pH对人工养殖下的公子小丑鱼(Amphiprion ocellaris)幼鱼的胃、肝脏、肠道中蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶活性的影响,并对各部位消化酶活性进行比较。结果表明,在胃、肝脏、肠道中均可以检测出蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶的活性,其中蛋白酶活性顺序为胃>肠道>肝脏,淀粉酶活性顺序为肠道>肝脏>胃,脂肪酶活性顺序为肠道>肝脏>胃。胃、肝脏、前肠、中肠、后肠蛋白酶的最适pH值分别为2.2、7.5、7.0、7.0和8.0;淀粉酶肝脏的最适pH值为6.0,其余部位均为7.0;脂肪酶肝脏的最适pH值为7.0,其余部位均为7.5。胃、肝脏、肠道的蛋白酶最适温度均为40℃;胃淀粉酶最适温度为40℃,肝淀粉酶最适温度为35℃,肠道淀粉酶最适温度为30℃;胃、肝脏、肠道的脂肪酶的最适温度均为40℃。

珊瑚礁鱼类公子小丑鱼人工繁殖和育苗技术

目前,热带海水观赏鱼作为宠物正越来越引起人们的关注,观赏鱼贸易正在成为世界范围内快速增长的产业[1]。但是,超过95%的海水观赏鱼都是从珊瑚礁中捕捞的[2],由于采用不恰当的捕捉方式,会对珊瑚和鱼类造成巨大的伤害。随着自然资源的日益枯竭以及人们环保意识的日益提高。

虾青素对红小丑鱼消化酶活性的影响

本实验以初始体质量为(4.88±0.90)g、体长为(4.85±0.32)cm的红小丑鱼(Amphiprion frenatus)为养殖对象,研究饲料中添加0(对照组)、2‰、4‰、6‰、8‰的虾青素对红小丑鱼消化酶活性的影响。本试验每组3个重复,每个重复6尾鱼,饱食投喂2次/d(投喂时间为08∶30和14∶30),试验周期为20 d。结果表明:添加虾青素组的红小丑鱼胃肠消化酶活性均高于未添加虾青素组,当虾青素添加量为4‰时,红小丑鱼前肠蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶以及后肠淀粉酶活性达到最高(P<0.05);当添加量为6‰时,其胃脂肪酶和淀粉酶活性最高(P<0.05);当添加量为8‰时,其胃和后肠的蛋白酶以及后肠脂肪酶的活性达到最高(P<0.05)。因此,在饲料中添加4‰~8‰的虾青素能够较有效地提高红小丑鱼消化器官的消化酶活性。