腹腔积液中人硫氧还蛋白过表达与小儿腹膜间皮细胞炎症的关系探讨

目的探讨腹腔积液中人硫氧还蛋白(human thioredoxin,hTRX)过表达与小儿腹膜间皮细胞炎症的关联。方法实验设计分4组:对照组(B-Z组),rhTRX高剂量组(G-Y组),rhTRX中剂量组(Z-Y组),rhTRXl低剂量组(L-Y组);采用MTT比色法检测小儿腹膜间皮细胞的存活率;用试剂盒进行T淋巴细胞亚群的测定;测定4组小儿腹膜间皮细胞培养上清液中炎性因子IFN-γ的浓度;采用RT-PCR和酶联免疫吸附法测定各组中的干扰素-γ(IFN-γ)基因和蛋白的表达水平。结果与B-Z组相比,L-Y组、Z-Y组和G-Y组IFN-γ浓度下降( P <0.05),随rhTRX剂量的增加,小儿腹膜间皮细胞的存活率升高( P <0.05);RT-PCR和ELISA结果显示L-Y组中IFN-γ的表达水平无明显下降,Z-Y组和G-Y组细胞的IFN-γ表达水平与B-Z组相比有明显下降( P <0.05)。结论 腹腔积液中hTRX过表达对小儿腹膜间皮细胞炎症具有抑制作用。

转化生长因子-β1对大鼠腹膜间皮细胞炎症因子及细胞外基质表达的影响

目的研究转化生长因子-β1(TGF-β1)对大鼠腹膜间皮细胞炎症因子表达和细胞外基质(ECM)积聚的影响。方法体外培养SD大鼠原代腹膜间皮细胞,静止24h后,采用RT-PCR检测TGF-β1(10ng/ml)刺激后0、3、6、12、24、48h单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白介素-6(IL-6)、Ⅰ型胶原(Collagen I)、纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)mRNA的表达情况;Western blot检测TGF-β1(10ng/ml)刺激后0、4、12、24、48h Collagen I和PAI-1表达情况;ELISA法检测MCP-1和IL-6表达情况。结果 TGF-β1处理6h后MCP-1、IL-6和PAI-1mRNA即开始逐渐升高,与0h组的差异均有统计学意义(均P<0.05),24h后显著升高(均P<0.01);TGF-β1处理12h后Collagen I mRNA表达开始明显升高,与0h比较差异有统计学意义(P<0.05),24h后有显著升高(P<0.01);TGF-β1处理4h后IL-6表达水平升高(P<0.05),24h后显著升高(P<0.01);处理12h后MCP-1和PAI-1表达水平较0h明显升高(P<0.05),处理24h后Collagen I表达水平显著升高(P<0.05);TGF-β1显著增加MCP-1、IL-6、Collagen I、PAI-1及其mRNA的表达上调。结论 TGF-β1可能通过诱导大鼠腹膜间皮细胞炎症因子上调表达和ECM积聚导致腹膜纤维化。

辛伐他汀对炎症状态下人腹膜间皮细胞促纤维化细胞生长因子TGF-β_1和CTGF表达的影响

目的探讨辛伐他汀对体外培养的人腹膜间皮细胞在肿瘤坏死因子-a(tumor necrosis factor-a,TNF-a)诱导后转化细胞因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)表达的影响。方法胰蛋白酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞进行原代培养并传代,分为五组(每组设3个样本):空白对照组(完全培养液)、单纯TNF-a(1000ng/L)诱导组和TNF-a(1000ng/L)诱导加低、中、高剂量辛伐他汀(2.5、5和10μmol/L)组。采用MTT(单四唑)检测各组间皮细胞的活性;半定量RT-PCR检测细胞内TGF-β1和CTGFmRNA表达;ELISA检测细胞上清液中TGF-β1和CTGF的蛋白质水平,细胞沉淀用BCA蛋白检测方法测定细胞蛋白质含量,用以校正ELISA结果。结果辛伐他汀能显著改善TNF-a诱导后人腹膜间皮细胞的活性(P<0.05),并能显著降低TNF-a诱导后人腹膜间皮细胞TGF-β1和CTGF的表达(P<0.05),两者在蛋白质和基因水平均呈剂量依赖关系。结论辛伐他汀能抑制炎症状态下人腹膜间皮细胞TGF-β1和CTGF的表达。

小儿先天性心脏病术后急性肾功能不全应用腹膜透析治疗的效果分析

探讨小儿先天性心脏病术后急性肾功能不全应用腹膜透析治疗的效果。方法 对2021年至2023年12月医院收治的45例先天性心脏病术后急性肾功能不全患儿予以腹膜透析治疗,观察45例患儿治疗前后肾功能指标、炎症因子、电解质水平变化,并记录45例患儿尿量、乳酸及尿素氮等恢复时间,统计45例患儿死亡率。结果 治疗后,45例患儿的各项肾功能指标(Cr、BUN、β2MG及PRO)均低于治疗前(P<0.05);45例患儿的各项炎症因子水平(hs-CRP、IL-6、IL-8及TNF-α)均低于治疗前(P<0.05);45例患儿的各项电解质水平(HCO3-、Ca2+、K+)均高于治疗前(P<0.05);45例患儿的尿量恢复正常时间为1~5d,平均(3.11±0.87)d,乳酸恢复正常时间为1~4d,平均(2.87±0.35)d,尿素氮恢复正常时间1~5d,平均(3.38±0.98)d,且45例患儿中有41例康复出院,4例死亡,死亡率为8.89%。结论 小儿先天性心脏病术后急性肾功能不全应用腹膜透析治疗,能够明显改善其肾功能,减轻其炎症反应,纠正其电解质紊乱,加快其指标恢复,降低其死亡率。

苦参碱对高糖致大鼠腹膜间皮细胞NF-κB p65表达的影响

目的探讨苦参碱对高糖致大鼠腹膜间皮细胞NF-κB p65表达的影响及其在腹膜炎症发病机制中的作用,为临床防治腹膜硬化提供部分实验依据。方法将30只健康雄性SD大鼠随机分成3组:对照组(n=10,NS组):腹腔每天注射生理盐水30 m l;模型组(n=10,HGC组):腹腔每天注射4.25%的葡萄糖腹透液30 m l+每周1次腹腔注射红霉素6.25万单位;治疗组(n=10,HGM组):腹腔每天注射4.25%葡萄糖腹透液+苦参碱溶液30 m l+每周1次腹腔注射红霉素6.25万单位。8周后分别处死每组各10只大鼠,取腹膜组织以链霉亲和素过氧化物酶(SP)免疫组织化学法行NF-κB p65蛋白检测,并取腹膜组织行HE及M asson染色病检。结果 与NS组比较,HGC和HGM组腹膜间皮细胞NF-κB p65表达上调,但HGC组显著高于HGM组(P<0.05)。结论苦参碱能拮抗高糖引起的NF-κB p65表达上调,减轻腹膜慢性炎症,延缓腹膜纤维化的发生。

间皮细胞及其在腹膜粘连中的研究进展

腹膜粘连仍是腹部手术后常见的并发症。腹膜内纤维性粘连可以引起严重的机械性肠梗阻、女性不育及慢性盆腔痛。其原因包括手术损伤、炎症反应、异物残留、组织缺血等。目前预防纤维性粘连的方法有抗炎症反应、应用抗生素、物理和化学性屏障。但临床上尚无广泛应用的好方法。对粘连形成的病理生理学过程进行细胞和分子机制的探讨，可以为预防粘连提出更有效的方法。近年来研究认为，间皮细胞在腹膜创伤修复及粘连形成过程中发挥重要的作用。现综述如下。

盆腔炎妇女CA125与细胞炎症因子及白细胞水平相关性分析

CA125是经卵巢浆液性囊腺癌细胞系免疫纯种小鼠获得的单克隆抗体,是一种在体腔上皮细胞表达的高相对分子质量糖蛋白。CA125在正常人体的血清中含量较小,当卵巢上皮、腹膜间皮细胞受到炎症或癌变影响时,将产生大量的CA125,并释放浆膜腔体并进入体内循环,引发血清及浆膜腔液CA125水平增高。

TEP与TAPP治疗小儿腹股沟疝的临床效果及血清炎性因子变化分析

目的分析完全腹膜外补片植入术(TEP)与腹腔镜经腹膜前疝修补术(TAPP)治疗小儿腹股沟疝的临床效果及血清炎性因子变化。方法回顾性选取2016年8月至2020年8月安徽省池州市人民医院收治的120例腹股沟疝患儿,以单盲随机抽样法分组,每组60例,对照组采用TAPP治疗,实验组采用TEP治疗。比较2组患儿手术指标、血清炎性因子指标[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)]、术后并发症发生率。结果实验组患儿手术时间[(35.26±3.62)min]、首次下床时间[(1.26±0.16)d]及住院时间[(5.16±0.64)d]均短于对照组[(42.62±4.19)min、(1.69±0.28)d、(6.82±1.64)d],实验组术中出血量[(16.26±3.62)mL]低于对照组[(19.52±4.17)mL],差异均有统计学意义(P<0.05)。实验组患儿术后24 h血清TNF-α、IL-6、hs-CRP水平[(115.26±7.62)ng/L、(12.26±3.62)ng/L、(5.26±1.07)mg/L]均低于对照组[(140.26±10.44)ng/L、(16.82±4.81)ng/L、(11.62±2.85)mg/L],差异均有统计学意义(P<0.05)。实验组术后并发症发生率(3.33%)低于对照组(15.00%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论与TAPP比较,TEP在治疗小儿腹股沟疝方面具有手术时间较短、术后恢复快、机体炎症反应轻、并发症发生率较低等优点,值得借鉴。

胰腺炎大鼠腹腔积液中硫氧还蛋白表达与腹膜功能衰竭的关联机制

目的探讨胰腺炎大鼠腹腔积液中硫氧还蛋白表达与腹膜功能衰竭的关联机制。方法60只SD大鼠按照随机数字表法分为2组:对照组(n=30,不做任何干预)和实验组(n=30,通过注射牛磺胆酸钠构建大鼠急性胰腺炎模型)。模型建立成功后次日,将每组大鼠分为2批,分别采用N-甲酰甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸(fMLP)和硫乙醇酸盐腹腔注射,并于2种炎性介质注射后0.5、2、8.0 h获取免疫球蛋白和腹腔积液。应用组织化学染色法检测β-gal的表达,分析腹膜表面的转基因MCS的面积百分比,测定腹腔积液中硫氧还蛋白表达和二硫化物氧化还原酶的活性,评估腹膜MCS炎症的严重情况。结果炎症介质注射后0.5~8.0 h,实验组胰腺炎模型大鼠MCSβ-gal阳性面积均显著低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。炎症介质注射8 h后,实验组胰腺炎模型大鼠腹腔积液中二硫化物氧化还原酶和人硫氧还蛋白活性均较对照组显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。炎症介质注射8 h后,实验组大鼠脂多糖、白细胞介素-1β和肿瘤坏死因子-α水平较对照组增加,人硫氧还蛋白表达显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论胰腺炎大鼠腹腔积液中硫氧还蛋白表达和二硫化物氧化还原酶活性均显著下降,同时诱发腹膜功能衰竭,因此通过上调腹腔积液中人硫氧还蛋白的水平和二硫化物氧化还原酶活性可能有助于缓解腹膜间皮细胞的炎症。

脂多糖通过NF—κB途径上调大鼠腹膜间皮细胞表达CD40和ICAM-1

目的观察脂多糖（LPS）作用下大鼠腹膜间皮细胞NF-κB活性及其对CD40和细胞间黏附分子1（ICAM-1）表达的影响。方法分离及培养大鼠腹膜间皮细胞。LPS不同浓度作用12h及LPS（5μg／m1）作用不同时间点收集细胞；LPS（5μg／m1）或BAY11-7085（一种IκBα的磷酸化抑制剂）不同浓度（1μmol／L和5μmol／L）预处理3h加LPS，作用3h后收集细胞；采用RT-PCR方法检测CD40和ICAM-1 mRNA表达。采用蛋白印迹检测NF—κB和磷酸化NF-κB（p-NF-κB）蛋白表达。结果与常规培养基对照组相比，5μg／ml LPS组CD40和ICAM-1 mRNA表达显著升高（P〈0．05），10μg／ml LPS组显著高于5μg／ml LPS作用组（P〈0．05）。5μg／ml LPS作用下，ICAM-1 mRNA表达从1h开始升高，3h达到高峰，之后逐渐降低。CD40 mRNA表达在1h无显著变化，3h时迅速达到高峰，之后逐渐降低。常规培养的大鼠腹膜间皮细胞结构性表达p-NF-κB蛋白；加入LPS后，p-NF-κB蛋白表达显著增加，其中30min～1h表达最强，之后逐渐降低，至2h仍显著高于常规培养组（P〈0．05）。加入5κmol／LBAY11-7085后，LPS诱导的CD40和ICAM-1 mRNA表达显著降低（P〈0．05），与正常对照组相比差异无统计学意义。结论LPS以时间依赖和浓度依赖模式上调CD40和ICAM-1的表达。NF-κB信号途径参与调节LPS诱导的大鼠腹膜间皮细胞CD40和ICAM-1的表达。

CD40在大鼠腹膜间皮细胞的表达及其功能研究

目的 研究腹膜间皮细胞CD40的表达、调节因素及其活化后与细胞间黏附分子1(ICAM-1)分泌的相关性。方法 分离、培养大鼠腹膜问皮细胞,用IFN-γ、TNF-α、IL-1刺激24 h,通过逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)及流式细胞仪(FACS)检测分析间皮细胞CD40表达。通过CD40单克隆抗体(CD40mAb)活化间皮细胞CD40,用FACS检测分析间皮细胞ICAM-1的表达。结果 间皮细胞结构性表达低水平的CD40。IFN-γ、IL-1可显著增加间皮细胞表面CD40mRNA及其蛋白的表达,而以IFN-γ增幅最大。TNF-α对间皮细胞CD40mRNA及其蛋白的表达无显著增加作用。用IFN-γ增加间皮细胞CD40表达的同时,加入CD40mAb活化CD40受体可显著增强间皮细胞ICAM-1的表达。结论 腹膜间皮细胞功能性表达CD40,其与腹腔中阳性CD40配体(CD40L+)细胞相互作用,可能在腹腔局部防御中发挥重要作用,其结果对于限制炎症的发生和发展具有积极意义。

血管紧张素Ⅱ诱导Toll样受体4在腹膜间皮细胞的表达及其对脂多糖诱导CD40表达的影响

目的观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对原代培养大鼠腹膜间皮细胞（RPMC）Toll样受体4（TLR4）表达的影响及其在脂多糖（LPS）诱导的核转录因子κB（NF－κB）活化及CD40表达中的作用。方法分离及培养RPMC。用不同浓度AngⅡ（10。、10、10、10。mt，l／l一）刺激细胞及用10’mol／L AngⅡ刺激细胞不川时问（mltNA为1、2、4、8、12、24、48h和蚩r1为6、12、24、36、4811），观察血管紧张素l刑受怵（ATIR）阻滞剂洛沙m（10。mol／L）和血竹紧张素2剐受休【AT2It）阻滞制PDl23177（10_ll（11／l。）对AngⅡ诱岢TLt／4表达的影响？将细胞随机分为下列4组：埘照组、AngⅡ（10mol／I。）组、LPSllmg／L）组、AngⅡ（10。mo]／L）＋LPS（1mg／L）组，观察AngⅡ对I。l，s诱导的NF-κB激活和CD40表达的影响。RT—PCR检测TLR4、CD40ml＇lNA表达；Weslern印迹愉测rFLtl4、IκBc~、磷酸化IκBα（p-IκBα）、NF-κBp65、磷酸化NF—κB（p—p65）蛋白表达；免疫荧光检测细胞NF－κB p65形单位的表达及分布。结果（1）10^-9、10^-8、10^-7、10^-6mol／L AngⅡ作用RPMC 12h，TLR4 mRNA表达分别增加70．5％、89．5％、102．9％和121．9％；作用24h TLR4蛋白表达分别增加12．1％、27．7％、51．2％和41．6％。AngⅡ（10^-7mol／L）作用RPMC不同时间，TLR4 mRNA表达高峰为8h和12l·（P〈0．01），蛋白表达高峰为12h和24h（P〈0．01）。（2）洛沙坦阻断后，AngⅡ诱导的TLR4表达与未阻断组比较，下调33．5％（P〈0．05）。PD123177对AngⅡ诱导的TLR4表达无显著影响（P〉0．05）。（3）与正常对照组比较，LPS作用60min p-IκBα／IκBα、p-p65／p65表达分别上调362．6％（P〈0．01）和67．4％（P〈0．05）；作用4h CD40 mRNA表达上调299．9％（P〈0．01）；与LPS组比较，AngⅡ预刺激24h加LPS作用60min，p-IκBα／IκBα、p-p65／p65表达分别上调49．1％（P〈0．01）和29．3％（P〈0．05）；作用4h CD40n mRNA表达卜凋56．8％（P〈0．01）。（4）免疫荧光结果显示正常对照组与AngⅡ组细胞中，p65信号定位于细胞胞质；LPS作用60min，p65信号从胞质进入胞核；AngⅡ＋LPS组NF—κB p65胞核信号显著增强。结论AngⅡ呈浓度、时间依赖性诱导RPMC TLR4表达，并显著增强LPS诱导NF—κB激活及CD40的表达：提示腹膜绀织局部产牛的AngⅡ可能对LPS诱导的腹膜组织炎性反应具有放大作用.

腹膜粘连的细胞机制研究进展

腹膜粘连(PA)是由手术、腹膜炎症、腹膜透析等引起的腹腔内受损组织和器官间的异常纤维性粘连带,其中手术是引发PA的主要原因。PA可引起不孕、肠梗阻、肠穿孔等临床并发症,二次松解手术为主要治疗方案,但易复发且存在多种并发症风险。近年来开发出一系列用于PA预防与治疗的药物和屏障材料,但防治效果尚不满意。抗PA药物会增加出血的风险,并抑制正常免疫功能,屏障材料虽然一定程度上缓解了PA进展,但因其不能持久覆盖腹膜损伤部位、降解不彻底等问题,不能达到抗PA的理想效果。因此在PA防治上需要新的突破。近期的研究表明PA是一系列事件综合作用的结果,包括血管损伤、血小板聚集、凝血级联反应、纤维蛋白沉积等过程,最终纤维蛋白和细胞外基质沉积形成粘连带,后期形成收缩性瘢痕并引发临床症状,上述事件中,参与PA的各种细胞发挥了关键作用。腹膜微环境中分布有腹膜间皮细胞(PMC)、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、T淋巴细胞、巨噬细胞、肥大细胞等。生理条件下,这些细胞成分对腹膜微环境的动态稳定具有重要意义。当细菌和异物侵入腹膜腔时,纤维蛋白和炎性细胞随腹腔液渗出以限制、清除并吸收异物,最终纤维蛋白被吸收,腹膜损伤正常愈合。病理条件下,上述细胞功能紊乱,从而促进PA进展。PMC功能的失调促进初始PA形成、炎症反应扩大、纤维蛋白过度沉积;中性粒细胞和腹膜常驻巨噬细胞最早被募集到腹膜损伤部位,前者介导炎症反应,后者覆盖损伤部位起短暂保护作用;PA中晚期中性粒细胞形成中性粒细胞外陷阱并协同其他细胞促进纤维化进展导致PA形成。笔者就腹膜微环境中多种细胞在PA发生和发展中的作用机制,以及各种细胞在PA进展中的相互作用作一概述,此外介绍近年来防治PA的主要措施,并总结以参与PA的细胞为中心防治PA的策略,以期为临床防治PA提供新思路。

含糖腹膜透析液诱导人腹膜间皮细胞自噬机理研究

目的:研究含糖腹膜透析液对人腹膜间皮细胞株(HMrSV5)生长影响,探讨引发的线粒体氧自由基的产生、细胞氧自由基增加,以及炎症和自噬发生的可能机理。方法:用1.5%、2.5%和4.25%浓度的含糖低钙腹膜透析液及阳性对照鱼藤酮(Rotenone)刺激人腹膜间皮细胞48h,用流式细胞术检测人腹膜间皮细胞线粒体氧自由基产生和细胞内氧自由基变化、蛋白印迹检测NLRP3和LC3表达变化及透射电镜观察细胞器变化。结果:含糖低钙腹膜透析液在不同的浓度和不同的作用时间情况下,对HMrSV5线粒体及细胞内活性有不同的影响。随糖浓度的增加线粒体氧自由基含量明显增加。随糖浓度升高和时间延长,胞内氧自由基也明显增加;含糖低钙腹膜透析液诱导NLRP3与LC3的表达,并呈糖浓度与时间依赖性;透射电镜观察到细胞线粒体出现空泡及自噬小体的出现。结论:高糖低钙腹膜透析液可刺激HMrSV5细胞的线粒体氧自由基产生并泄露到胞质中,引发细胞炎症自噬的产生。这为基础研究及临床防治腹膜纤维化提供了一条新途径。

穿心莲内酯对大鼠腹腔粘连的抑制作用及其可能机制

目的探讨穿心莲内酯(Ad)对大鼠腹腔粘连的抑制效果及其可能机制。方法(1)将60只SD雄性大鼠分为正常对照组、模型组、地塞米松组、Ad低剂量(20 mg/kg)组、Ad中剂量(40 mg/kg)组、Ad高剂量(80 mg/kg)组,各10只。除正常对照组外,其余各组大鼠均采用摩擦盲肠法制备腹腔粘连模型;建模后48 h,各药物组给予相应的药物干预10 d。给药结束后,评估各组大鼠腹腔粘连程度,并测定血清白细胞介素(IL)-1β、IL-18、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,以及腹腔液中转化生长因子β(TGF-β)、结缔组织生长因子(CTGF)水平。(2)另收集50只雄性SD大鼠腹腔液,制备腹膜间皮细胞后分为照组、模型组、模型+不同浓度Ad组,各10只。模型组细胞加入TGF-β1培养,模型+不同浓度Ad组细胞加入TGF-β1和相应浓度的Ad(终浓度分别为10、20、40μmol/L)培养。培养24 h后检测各组细胞内Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)蛋白、Smad7、Smad2/3及磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)蛋白水平。结果(1)其他组粘连程度均重于正常对照组,地塞米松组与Ad中、高剂量组的粘连程度均轻于模型组(均P<0.05)。模型组血清IL-1β、IL-18与TNF-α水平均高于正常对照组(均P<0.05);各剂量Ad组血清IL-1β和TNF-α水平均较模型组降低;Ad中、高剂量组血清TNF-α水平均低于Ad低剂量组,Ad低剂量组、Ad中剂量组、Ad高剂量组血清IL-1β依次降低(均P<0.05)。模型组腹腔液TGF-β1和CTGF水平均高于正常对照组,Ad各剂量组的TGF-β1水平、Ad中、高剂量组的CTGF水平均低于模型组,Ad低剂量组、Ad中剂量组、Ad高剂量组的CTGF水平依次降低(均P<0.05)。(2)模型+不同浓度Ad组的Col-Ⅰ蛋白表达水平均低于模型组,且模型+10μmol/L Ad组、模型+40μmol/L Ad组、模型+20μmol/L Ad组的Col-Ⅰ蛋白表达水平依次降低(均P<0.05)。与模型组比较,模型+20μmol/L Ad组的p-Smad2/3与Smad2/3比值降低,模型+20μmol/L Ad组、模型+40μmol/L Ad组的Smad7蛋白表达水平均升高(均P<0.05)。结论Ad对大鼠腹腔粘连具有良好的抑制作用,其可能通过调控Smad通路及抑制炎症反应来发挥作用。