成人灰色小克银汉霉侵袭性毛霉菌病1例并文献复习

目的 探讨灰色小克银汉霉感染导致成人毛霉菌病患者的临床特点及诊治方案。方法 总结某院血液内科收治的1例灰色小克银汉霉感染致成人侵袭性毛霉菌病患者的临床诊疗过程,并检索数据库相关文献进行复习。结果 患者男性,54岁,因“反复乏力1年余,加重伴发热1周”入院,肺组织病理检查可见宽大、不规则、无分隔的菌丝,形态学鉴定为毛霉菌,肺泡灌洗液及外周血宏基因组二代测序(mNGS)检测示灰色小克银汉霉,诊断为灰色小克银汉霉感染致侵袭性毛霉菌病,给予脂质体两性霉素B联合泊沙康唑、卡泊芬净治疗后感染获得控制。检索出符合条件的文献37篇,加上本病例,共纳入44例患者,其中男性26例,女性18例,中位年龄52.5(18~79)岁;基础疾病主要为血液系统疾病(65.9%,29例),进行造血干细胞或实体器官移植者14例;最常见的侵犯部位为肺、脑及皮肤,分别为36、9、9例;组织病理学、真菌培养、直接镜检及分子学检测阳性者分别为28、37、29、17例。41例患者接受了抗真菌治疗,其中8例联合手术治疗;30例死亡,病死率为68.2%,抗真菌治疗联合手术者生存率(62.5%,5/8)高于单独抗真菌治疗者(24.2%,7/33)。结论 灰色小克银汉霉感染所致成人毛霉菌病在血液系统疾病患者中最常见,造血干细胞或实体脏器移植为高危因素,常见感染部位为肺部,并可侵犯全身多脏器,病死率高,病原学诊断十分重要,抗真菌联合手术治疗可提高生存率。

短刺小克银汉霉AS 3.970对白鲜碱的微生物转化

目的采用短刺小克银汉霉AS 3.970(C.blakesleana AS 3.970)对白鲜碱展开微生物转化研究。方法利用30株丝状真菌对白鲜碱进行微生物转化,筛选出转化效果好的菌株;然后在该菌株微生物转化试验中考察接种量、转化温度、培养基pH值、转化时间等不同因素对白鲜碱微生物转化作用的影响,选择出最优的转化条件;在最优转化条件下,规模制备白鲜碱的微生物转化产物并进行结构鉴定。结果短刺小克银汉霉AS 3.970对白鲜碱的微生物转化效果好,在微生物转化研究中发现白鲜碱转化的最优条件是转化温度为28℃,培养基初始pH值为7.0,最适接种量5%(体积分数),转化时间为7 d;通过分离纯化和结构鉴定,最终得到两个主要转化产物,分别是4-甲氧基-2,3-二氢呋喃喹啉与3-(2-羟乙基)-4-甲氧基喹啉酮。结论通过微生物转化技术可以对白鲜碱进行微生物结构修饰。

经宏基因组二代测序诊断5例小克银汉霉菌感染及文献复习

报道5例恶性血液病患者治疗过程中并发真菌感染,由于疾病的特殊性无法进行侵袭性操作,经宏基因二代测序(metagenomic next-generation sequencing,mNGS)诊断小克银汉霉菌感染。5例患者均患恶性血液病,3例存在粒细胞缺乏,4例肺部感染主要表现为咳嗽、气促、呼吸费力等,1例颅内感染表现为发热、单侧肢体无力麻木。5例血培养均为阴性,通过mNGS检测确诊为小克银汉霉菌感染,调整为以两性霉素B为基础的联合治疗。1例感染得到控制,4例出现脏器衰竭、脑出血等并发症后放弃治疗。回顾分析2012年1月—2022年5月期间发表的34例血液病合并小克银汉霉感染案例。

短刺小克银汉霉菌对维拉帕米转化的能力

目的 研究微生物模型对药物维拉帕米的代谢转化能力 ,并与人体内药物代谢进行比较。方法通过菌株筛选 ,确定以短刺小克银汉霉菌AS 3.15 3为转化菌株 ,采用液相色谱 质谱联用技术对代谢产物进行检测 ,并考察了微生物转化体系中影响代谢物产率的主要因素。结果 该霉菌转化维拉帕米形成C -N键和C -O键断裂的 10种氧化代谢产物。发现以pH 6 .5 ,底物浓度 0 .0 75 % ,转化反应持续 96h等条件 ,代谢产物的总产率 >95 % ,其中 1种主要产物N 去短链烷基维拉帕米的产率 >6 5 %。结论短刺小克银汉霉菌AS 3.15 3对维拉帕米具有与人体类似而且广泛的代谢途径 。

短刺小克银汉霉菌对马兜铃酸A的代谢转化

选取短刺小克银汉霉菌(Cunninghamella blakesleana AS3.910)用微生物转化的方法对马兜铃酸A(Aristolochic acid)进行了代谢转化研究并比较了微生物转化产物和哺乳动物体内的代谢产物的异同。考察了影响微生物转化产物形成的各种因素,并对该转化体系进行了优化,采用高效液相色谱、质谱对代谢产物进行了检测和分析。多种因素条件会对微生物的转化产生影响,发酵液中主要的转化产物是马兜铃酸A的O去甲基化物,该产物和报道的哺乳动物在摄入马兜铃酸A后尿中发现的一种代谢产物结构相同。利用小克银汉霉菌的转化可以方便地制备马兜铃酸A在哺乳动物体内的某些代谢产物,它可以作为研究马兜铃酸A代谢物的一个体外模型进行探索。

短刺小克银汉霉菌丝球对孔雀绿的吸附研究

利用分离得到的短刺小克银汉霉对三苯甲烷类染料孔雀绿进行了吸附脱色研究。当染料质量浓度为100mg·L-1时,短刺小克银汉霉菌丝球能在3h内使孔雀绿脱色率达到92%以上。在通气脱色体系中研究了短刺小克银汉霉菌丝球在不同pH、脱色温度、摇床转速等条件下对孔雀绿脱色效果的影响。研究结果表明,短刺小克银汉霉菌丝球在温度为35℃,pH为10,转速为150r·min-1的条件下对孔雀绿具有最大脱色率,脱色时间在180min时达到吸附平衡。孔雀绿质量浓度为25～100mg·L-1,小克银汉霉菌丝球对孔雀绿吸附脱色动力学符合拟二级动力学方程(R2>0.99)。菌丝球对孔雀绿的吸附符合Langmuir等温吸附方程(R2>0.998),饱和吸附量达到1250mg·g-1。对吸附了染料的菌体进行解吸研究,发现用异戊醇作为解吸剂的解吸率最高,可以达到93%,解吸过程符合二级动力学方程(R2>0.99)。

短刺小克银汉霉AS3.153菌株对雷诺嗪的代谢转化

目的建立能够模拟雷诺嗪在哺乳动物体内代谢的微生物模型,并应用该模型制备代谢产物。方法采用液相色谱-质谱联用法测定雷诺嗪在4种小克银汉霉转化模型中的转化产物,选择其中转化能力最强的菌株,针对雷诺嗪3种主要代谢产物进行了培养基初始pH值、底物质量浓度、转化时间等转化条件的优化。结果短刺小克银汉霉AS 3.153对雷诺嗪的转化能力最强,将其转化为9种代谢产物,采用半制备液相色谱法制备分离得到3种主要代谢产物,确证其结构分别为羟基化雷诺嗪及雷诺嗪硫酸酯结合物。结论短刺小克银汉霉AS 3.153对雷诺嗪的转化与哺乳动物代谢结果类似,可作为模拟哺乳动物体内代谢的体外模型使用。

短刺小克银汉霉对偶氮染料刚果红的脱色

为探索真菌对染料的脱色特性，利用分离得到的短刺小克银汉霉对偶氮染料刚果红进行了脱色研究．短刺小克银汉霉菌丝球能在3h内使刚果红脱色率达到96％以上．在通气脱色体系中研究了短刺小克银汉霉菌丝球在不同pH值、脱色温度、摇床转速、盐度等条件下对刚果红脱色效果的影响．研究结果表明，短刺小克银汉霉菌丝球在温度为33℃，pH6．5，摇床转速120r／min的条件下对刚果红具有最大脱色率，染料溶液中盐浓度对脱色率有一定影响，但影响不大．在刚果红50～200mg／L质量浓度范围内，小克银汉霉菌丝球对刚果红吸附脱色动力学符合拟二级动力学方程（R^2〉0．999）．菌丝球对刚果红的吸附等温线可用Langmuir和Freundlich等温方程模型表达，其中Langmuir方程能更好地描述菌丝球对染料的吸附行为（R^2〉0．999）．

小克银汉霉核糖体DNA PCR扩增产物的限制性片段长度多型性(英文)

应用一对寡核苷酸引物ITS1与ITS4对核DNAG＋C百分数小于30％的小克银汉霉（Cunninghamella）属的核糖体DNA（rDNA）内转录间区（YTS）进行了扩增。测试的属于10个种和变种的22株菌都得到了扩增产物。在同属不同种之间扩增的ITS片段长度有巨大差别。据此可分为三组。这三组所含分类群数及其DNA长度分别为；第一组4种1变种，小于764碱基对（bp）；第二组2种，765～824bp；第三组2种1变种，大于825bp。所研究的许多种中，特别是第三组，单凭其PCR产物的长度就能区分开来。但在第一、二组就需借助限制性内切酶的分析才能予以区分。我们选用了RsaI，TaqI；Tru9I，和HinfI4种限制性内切酶，对所有扩增产物进行了限制性片段长度多型性（RFLPs）的分析。在雅致小克银汉霉（Celegans）、巴西玉蕊小克银汉霉（Cbertholletiae）、和布拉氏霉（Cblakesleeana）各种的限制性酶切图谱，种内非常一致而种与种之间有差别。反之，在某些种其限制性酶切图谱不仅种间互不相同，在种内不同株之间也出现1～3种酶切图型的差异。在这种情况下，只能综合各种资料才能将它们区分开来。本研究肯定了PCR－RFLP在区分小克银汉霉种和变种上的意义，并发现种内个体的差异。这在我们后来所进行的序列分析研究中得到了进一步的证实。

小克银汉霉菌对SFZ-47的代谢转化

利用微生物转化的方法 ,选取小克银汉霉 (Cunninghamella)为转化菌株 ,对新型抗炎镇痛剂 SFZ- 4 7代谢物的种类与产率进行了研究。高效液相色谱法测试结果表明 ,该菌株对 SFZ- 4 7能产生稳定的转化产物 ,且重现性好。单因素改变实验显示 ,菌株对发酵转化初始 p H值极为敏感。正交试验结果发现 ,在 3种较佳的转化条件下共获得 10种代谢物 ,在其中一种条件下 ,同时可得 7种代谢物 ;在另一条件下 ,一主要代谢物的产率高达 4 1.6% ,转化液中残留的母体药物仅为1.1%。

小克银汉霉原生质体的制备与再生

目的 为了利用微生物发酵生产γ 亚麻酸,研究了小克银汉霉原生质体制备与再生的条件。方法 利用液体振荡培养法,对酶解系统、渗透压稳定剂、菌丝培养时间、酶解温度等因素对小克银汉霉原生质体制备与再生的影响等进行了实验。结果 原生质体的产量可达到5.3×106个/mL,原生质体的再生率达到1.85%。结论 ①用2%的蜗牛酶酶解28℃培养24h的菌丝,以0.7mol/L甘露醇作为渗透压稳定剂,酶解前以0 3%β 巯基乙醇处理30min,便可制备大量的小克银汉原生质体;②用含0.8mol/LKCl的高渗双层培养基包埋制备的原生质体,可得到较高的原生质体再生率。

小克银汉霉属微生物模型在体外药物代谢研究中的应用

药物代谢在药效和安全性评价中是非常重要的,而利用微生物转化为药物体外代谢模型则具有很多优势。小克银汉霉属的许多菌株具有与人体类似的Ⅰ相和Ⅱ相药物代谢酶,其微生物模型能对多种底物进行高效转化。本文对其在药物代谢方面的应用进行综述,并对其未来的发展进行了展望。

定殖于大豆胞囊线虫胞囊上小克银汉霉属的两个种

小克银汉霉属(Cunninghamella)是广泛分布于亚热带地区的主要土壤真菌,而在温带分离频率却较低。该属可以定殖于毛发的髓部(Domsch & Gams,1970)。1991年以色列的 Galper等人报道,用 C.elegans 防治爪哇根结线虫(Meloidogyne javanica)效果比较明显。在对定殖于大豆胞囊线虫(Heterodera glycines)胞囊上的真菌研究中发现,刺孢小克银汉霉(C.echinulata)和雅致小克银汉霉(C.elegans)均可以定殖于 SCN 胞囊上,现作一简要介绍。1 材料与方法1.1 土壤采集和胞囊的分离土壤采集于沈阳近郊大豆地中,用淘洗—过筛法分离出胞囊。

短刺小克银汉霉AS 3.153菌株对安非他酮的代谢转化

目的寻找适用体外转化安非他酮的微生物菌株及采用此菌株制备吗啉环羟基化安非他酮纯品的可能性。方法首先采用液相色谱-质谱测定4种小克银汉霉对安非他酮的转化能力,确定菌株,再利用最佳菌株,采用高效液相色谱-多级质谱联用法检测转化液中安非他酮的代谢产物,并针对代谢产物2(M2)的转化进行了培养基初始pH值6水平(分别为6.0,6.5,7.0,7.5,8.0和8.5),底物浓度4水平(分别为0.025,0.05,0.1和0.2g·L-1),转化时间5水平(分别为72,96,120,144和168h)等转化条件的单因素考察,以及采用四因素三水平的正交试验设计对安非他酮进一步优化转化条件。结果根据液相色谱和质谱数据,经短刺小克银汉霉AS3.153转化,安非他酮主要形成单羟基化安非他酮和单羟基化安非他酮的硫酸结合物等3种转化产物,对M2进行分离纯化,根据质谱和核磁共振数据,确证代谢产物M2为吗啉环羟基化安非他酮。M2的最优转化条件为采用短刺小克银汉霉AS3.153培养基、初始pH8.0、底物浓度0.1g·L-1和转化时间168h时转化产率最高。结论短刺小克银汉霉AS3.153对安非他酮的转化与人体代谢结果相同,说明此菌株适宜作为研究人体药物代谢的体外模型,采用此模型及相应的优化转化条件可以制备M2纯品。

小克银汉霉属的微生物转化在体外药物代谢模型研究中的应用

微生物学积极地向其它学科渗透 ,利用微生物转化作为药物体外代谢模型较细胞和组织模型有很多优势。小克银汉霉属菌株中细胞色素 P45 0酶系能对多种底物进行高效转化 ,在药物代谢模型方面有广泛应用。文章对此进行了综述。

小克银汉霉菌发酵生产γ-亚麻酸条件的研究

对小克银汉菌发酵生产γ-亚麻酸的条件进行了初步的研究,确定了温度、pH、碳源等因素的适宜条件,实验结果表明:菌体重量达到52.78g/L,油脂为16.30g/L,GLA为1.46g/L。

小克银汉霉高产γ亚麻酸培养基条件优化

对小克银汉霉高产γ亚麻酸的培养基条件进行了优化,研究了碳、氮源及其添加量、磷酸盐、无机盐离子对γ亚麻酸产量的影响,通过正交实验确定最佳培养基为:葡萄糖100g/L,尿素3g/L,NaNO33g/L,Mg2+0.1g/L,Fe2+0.04g/L,Ca2+0.04g/L,K2HPO41.5g/L。优化后γ亚麻酸产量达到3.34g/L,是初始培养基γ亚麻酸产量的4.5倍。

短刺小克银汉霉菌11β羟化环氧黄体酮研究

采用短刺小克银汉霉菌(Cunninghamella blakesleeana ATCC 8688a)催化底物环氧黄体酮进行11位羟基化反应,将转化产物分离纯化得到晶体,经过质谱、红外光谱和核磁共振氢谱表征,结合产物的比旋光度测定,证实霉菌催化转化主产物是11β-羟基-16α,17α-环氧孕甾-4-烯-3,20-二酮。对霉菌发酵转化的培养基组成、操作条件和投料方式等进行了考察,确定了比较适宜的工艺条件,在2 g.L.1投料浓度下,环氧黄体酮的11β羟化产物得率稳定在35%左右;采取发酵液稀释补料投料方式,可有效地将产物得率从35%提高到43%。利用C.blakesleeana成功地实现了直接11β羟化环氧黄体酮,为甾体糖皮质激素类药物的生产提供了一条简化的合成路线。

氮饥饿补糖分批培养小克银汉霉产γ-亚麻酸的研究

对小克银汉霉C_2(Cunninghamella sp.C_2)发酵生产γ—亚麻酸工艺进行研究。发现氮饥饿补糖能有效地积累γ—亚麻酸,在第5、6、7 d每天补糖15 g/L,培养10 d后生物量、油脂和γ—亚麻酸的产量分别达到47.4 g/L、19.74 g/L和1.86 g/L,为分批培养的2.85、2.08和2.07倍。

儿童小克银汉毛霉病的临床特征分析:1例报告并文献复习

目的探讨儿童小克银汉毛霉病的临床特征及诊治方法,提高对该病的认识。方法报道某院1例宏基因组学二代测序技术(mNGS)临床诊断的小克银汉毛霉病患儿,经两性霉素B及卡泊芬净治疗有效;检索Pubmed、Embase、知网、万方数据库,纳入儿童小克银汉毛霉病病例,分析该病的临床特征及诊治。结果该例急性淋巴细胞白血病患儿在化疗后出现发热、呼吸道症状,临床诊断侵袭性真菌病,采用mNGS对外周血DNA序列进行分析,通过与PMDB病原学数据库对比,鉴定出小克银汉霉属,序列数514,接受两性霉素B联合泊沙康唑治疗有效。纳入文献分析小克银汉毛霉病临床特征:22例患者中男性12例,中位年龄13.5(3~18)岁,最常见的基础疾病为血液系统恶性肿瘤(19/22)。大部分患者急性起病,快速进展,最常见的首发症状为呼吸症状(14/20)及发热(16/20)。肺部CT表现以单侧病变多见,影像学表现多样,可出现肺结节/肿块、浸润改变、胸腔积液等。22例中确诊18例,临床诊断4例,最常见受累的器官为肺脏及皮肤;确诊手段仍依赖于组织病理学及真菌培养,分子诊断技术如PCR、mNGS等也渐显露头角。诊断后几乎所有病例都接受了抗真菌治疗(21/22),其中13例联合手术治疗,最终,22例患者中死亡9例,总体死亡率42%,症状/体征出现至死亡的平均时间为19(4~54)天。抗真菌治疗联合手术者生存率(9/13,69%)高于单独抗真菌治疗者(3/8,37%)。结论侵袭性真菌病是血液肿瘤患者常见并发症,但小克银汉毛霉感染少见,死亡率较高,当临床高度怀疑侵袭性真菌病时,应积极诊断,早期启动治疗,以提高其生存率。