成人灰色小克银汉霉侵袭性毛霉菌病1例并文献复习

目的 探讨灰色小克银汉霉感染导致成人毛霉菌病患者的临床特点及诊治方案。方法 总结某院血液内科收治的1例灰色小克银汉霉感染致成人侵袭性毛霉菌病患者的临床诊疗过程,并检索数据库相关文献进行复习。结果 患者男性,54岁,因“反复乏力1年余,加重伴发热1周”入院,肺组织病理检查可见宽大、不规则、无分隔的菌丝,形态学鉴定为毛霉菌,肺泡灌洗液及外周血宏基因组二代测序(mNGS)检测示灰色小克银汉霉,诊断为灰色小克银汉霉感染致侵袭性毛霉菌病,给予脂质体两性霉素B联合泊沙康唑、卡泊芬净治疗后感染获得控制。检索出符合条件的文献37篇,加上本病例,共纳入44例患者,其中男性26例,女性18例,中位年龄52.5(18~79)岁;基础疾病主要为血液系统疾病(65.9%,29例),进行造血干细胞或实体器官移植者14例;最常见的侵犯部位为肺、脑及皮肤,分别为36、9、9例;组织病理学、真菌培养、直接镜检及分子学检测阳性者分别为28、37、29、17例。41例患者接受了抗真菌治疗,其中8例联合手术治疗;30例死亡,病死率为68.2%,抗真菌治疗联合手术者生存率(62.5%,5/8)高于单独抗真菌治疗者(24.2%,7/33)。结论 灰色小克银汉霉感染所致成人毛霉菌病在血液系统疾病患者中最常见,造血干细胞或实体脏器移植为高危因素,常见感染部位为肺部,并可侵犯全身多脏器,病死率高,病原学诊断十分重要,抗真菌联合手术治疗可提高生存率。

短刺小克银汉霉AS 3.970对白鲜碱的微生物转化

目的采用短刺小克银汉霉AS 3.970(C.blakesleana AS 3.970)对白鲜碱展开微生物转化研究。方法利用30株丝状真菌对白鲜碱进行微生物转化,筛选出转化效果好的菌株;然后在该菌株微生物转化试验中考察接种量、转化温度、培养基pH值、转化时间等不同因素对白鲜碱微生物转化作用的影响,选择出最优的转化条件;在最优转化条件下,规模制备白鲜碱的微生物转化产物并进行结构鉴定。结果短刺小克银汉霉AS 3.970对白鲜碱的微生物转化效果好,在微生物转化研究中发现白鲜碱转化的最优条件是转化温度为28℃,培养基初始pH值为7.0,最适接种量5%(体积分数),转化时间为7 d;通过分离纯化和结构鉴定,最终得到两个主要转化产物,分别是4-甲氧基-2,3-二氢呋喃喹啉与3-(2-羟乙基)-4-甲氧基喹啉酮。结论通过微生物转化技术可以对白鲜碱进行微生物结构修饰。

经宏基因组二代测序诊断5例小克银汉霉菌感染及文献复习

报道5例恶性血液病患者治疗过程中并发真菌感染,由于疾病的特殊性无法进行侵袭性操作,经宏基因二代测序(metagenomic next-generation sequencing,mNGS)诊断小克银汉霉菌感染。5例患者均患恶性血液病,3例存在粒细胞缺乏,4例肺部感染主要表现为咳嗽、气促、呼吸费力等,1例颅内感染表现为发热、单侧肢体无力麻木。5例血培养均为阴性,通过mNGS检测确诊为小克银汉霉菌感染,调整为以两性霉素B为基础的联合治疗。1例感染得到控制,4例出现脏器衰竭、脑出血等并发症后放弃治疗。回顾分析2012年1月—2022年5月期间发表的34例血液病合并小克银汉霉感染案例。

短刺小克银汉霉菌丝球对孔雀绿的吸附研究

利用分离得到的短刺小克银汉霉对三苯甲烷类染料孔雀绿进行了吸附脱色研究。当染料质量浓度为100mg·L-1时,短刺小克银汉霉菌丝球能在3h内使孔雀绿脱色率达到92%以上。在通气脱色体系中研究了短刺小克银汉霉菌丝球在不同pH、脱色温度、摇床转速等条件下对孔雀绿脱色效果的影响。研究结果表明,短刺小克银汉霉菌丝球在温度为35℃,pH为10,转速为150r·min-1的条件下对孔雀绿具有最大脱色率,脱色时间在180min时达到吸附平衡。孔雀绿质量浓度为25～100mg·L-1,小克银汉霉菌丝球对孔雀绿吸附脱色动力学符合拟二级动力学方程(R2>0.99)。菌丝球对孔雀绿的吸附符合Langmuir等温吸附方程(R2>0.998),饱和吸附量达到1250mg·g-1。对吸附了染料的菌体进行解吸研究,发现用异戊醇作为解吸剂的解吸率最高,可以达到93%,解吸过程符合二级动力学方程(R2>0.99)。

短刺小克银汉霉对偶氮染料刚果红的脱色

为探索真菌对染料的脱色特性，利用分离得到的短刺小克银汉霉对偶氮染料刚果红进行了脱色研究．短刺小克银汉霉菌丝球能在3h内使刚果红脱色率达到96％以上．在通气脱色体系中研究了短刺小克银汉霉菌丝球在不同pH值、脱色温度、摇床转速、盐度等条件下对刚果红脱色效果的影响．研究结果表明，短刺小克银汉霉菌丝球在温度为33℃，pH6．5，摇床转速120r／min的条件下对刚果红具有最大脱色率，染料溶液中盐浓度对脱色率有一定影响，但影响不大．在刚果红50～200mg／L质量浓度范围内，小克银汉霉菌丝球对刚果红吸附脱色动力学符合拟二级动力学方程（R^2〉0．999）．菌丝球对刚果红的吸附等温线可用Langmuir和Freundlich等温方程模型表达，其中Langmuir方程能更好地描述菌丝球对染料的吸附行为（R^2〉0．999）．

小克银汉霉核糖体DNA PCR扩增产物的限制性片段长度多型性(英文)

应用一对寡核苷酸引物ITS1与ITS4对核DNAG＋C百分数小于30％的小克银汉霉（Cunninghamella）属的核糖体DNA（rDNA）内转录间区（YTS）进行了扩增。测试的属于10个种和变种的22株菌都得到了扩增产物。在同属不同种之间扩增的ITS片段长度有巨大差别。据此可分为三组。这三组所含分类群数及其DNA长度分别为；第一组4种1变种，小于764碱基对（bp）；第二组2种，765～824bp；第三组2种1变种，大于825bp。所研究的许多种中，特别是第三组，单凭其PCR产物的长度就能区分开来。但在第一、二组就需借助限制性内切酶的分析才能予以区分。我们选用了RsaI，TaqI；Tru9I，和HinfI4种限制性内切酶，对所有扩增产物进行了限制性片段长度多型性（RFLPs）的分析。在雅致小克银汉霉（Celegans）、巴西玉蕊小克银汉霉（Cbertholletiae）、和布拉氏霉（Cblakesleeana）各种的限制性酶切图谱，种内非常一致而种与种之间有差别。反之，在某些种其限制性酶切图谱不仅种间互不相同，在种内不同株之间也出现1～3种酶切图型的差异。在这种情况下，只能综合各种资料才能将它们区分开来。本研究肯定了PCR－RFLP在区分小克银汉霉种和变种上的意义，并发现种内个体的差异。这在我们后来所进行的序列分析研究中得到了进一步的证实。

小克银汉霉原生质体的制备与再生

目的 为了利用微生物发酵生产γ 亚麻酸,研究了小克银汉霉原生质体制备与再生的条件。方法 利用液体振荡培养法,对酶解系统、渗透压稳定剂、菌丝培养时间、酶解温度等因素对小克银汉霉原生质体制备与再生的影响等进行了实验。结果 原生质体的产量可达到5.3×106个/mL,原生质体的再生率达到1.85%。结论 ①用2%的蜗牛酶酶解28℃培养24h的菌丝,以0.7mol/L甘露醇作为渗透压稳定剂,酶解前以0 3%β 巯基乙醇处理30min,便可制备大量的小克银汉原生质体;②用含0.8mol/LKCl的高渗双层培养基包埋制备的原生质体,可得到较高的原生质体再生率。

定殖于大豆胞囊线虫胞囊上小克银汉霉属的两个种

小克银汉霉属(Cunninghamella)是广泛分布于亚热带地区的主要土壤真菌,而在温带分离频率却较低。该属可以定殖于毛发的髓部(Domsch & Gams,1970)。1991年以色列的 Galper等人报道,用 C.elegans 防治爪哇根结线虫(Meloidogyne javanica)效果比较明显。在对定殖于大豆胞囊线虫(Heterodera glycines)胞囊上的真菌研究中发现,刺孢小克银汉霉(C.echinulata)和雅致小克银汉霉(C.elegans)均可以定殖于 SCN 胞囊上,现作一简要介绍。1 材料与方法1.1 土壤采集和胞囊的分离土壤采集于沈阳近郊大豆地中,用淘洗—过筛法分离出胞囊。

小克银汉霉属微生物模型在体外药物代谢研究中的应用

药物代谢在药效和安全性评价中是非常重要的,而利用微生物转化为药物体外代谢模型则具有很多优势。小克银汉霉属的许多菌株具有与人体类似的Ⅰ相和Ⅱ相药物代谢酶,其微生物模型能对多种底物进行高效转化。本文对其在药物代谢方面的应用进行综述,并对其未来的发展进行了展望。

短刺小克银汉霉AS 3.153菌株对安非他酮的代谢转化

目的寻找适用体外转化安非他酮的微生物菌株及采用此菌株制备吗啉环羟基化安非他酮纯品的可能性。方法首先采用液相色谱-质谱测定4种小克银汉霉对安非他酮的转化能力,确定菌株,再利用最佳菌株,采用高效液相色谱-多级质谱联用法检测转化液中安非他酮的代谢产物,并针对代谢产物2(M2)的转化进行了培养基初始pH值6水平(分别为6.0,6.5,7.0,7.5,8.0和8.5),底物浓度4水平(分别为0.025,0.05,0.1和0.2g·L-1),转化时间5水平(分别为72,96,120,144和168h)等转化条件的单因素考察,以及采用四因素三水平的正交试验设计对安非他酮进一步优化转化条件。结果根据液相色谱和质谱数据,经短刺小克银汉霉AS3.153转化,安非他酮主要形成单羟基化安非他酮和单羟基化安非他酮的硫酸结合物等3种转化产物,对M2进行分离纯化,根据质谱和核磁共振数据,确证代谢产物M2为吗啉环羟基化安非他酮。M2的最优转化条件为采用短刺小克银汉霉AS3.153培养基、初始pH8.0、底物浓度0.1g·L-1和转化时间168h时转化产率最高。结论短刺小克银汉霉AS3.153对安非他酮的转化与人体代谢结果相同,说明此菌株适宜作为研究人体药物代谢的体外模型,采用此模型及相应的优化转化条件可以制备M2纯品。

小克银汉霉高产γ亚麻酸培养基条件优化

对小克银汉霉高产γ亚麻酸的培养基条件进行了优化,研究了碳、氮源及其添加量、磷酸盐、无机盐离子对γ亚麻酸产量的影响,通过正交实验确定最佳培养基为:葡萄糖100g/L,尿素3g/L,NaNO33g/L,Mg2+0.1g/L,Fe2+0.04g/L,Ca2+0.04g/L,K2HPO41.5g/L。优化后γ亚麻酸产量达到3.34g/L,是初始培养基γ亚麻酸产量的4.5倍。

氮饥饿补糖分批培养小克银汉霉产γ-亚麻酸的研究

对小克银汉霉C_2(Cunninghamella sp.C_2)发酵生产γ—亚麻酸工艺进行研究。发现氮饥饿补糖能有效地积累γ—亚麻酸,在第5、6、7 d每天补糖15 g/L,培养10 d后生物量、油脂和γ—亚麻酸的产量分别达到47.4 g/L、19.74 g/L和1.86 g/L,为分批培养的2.85、2.08和2.07倍。

小克银汉霉属的微生物转化在体外药物代谢模型研究中的应用

微生物学积极地向其它学科渗透 ,利用微生物转化作为药物体外代谢模型较细胞和组织模型有很多优势。小克银汉霉属菌株中细胞色素 P45 0酶系能对多种底物进行高效转化 ,在药物代谢模型方面有广泛应用。文章对此进行了综述。

基于短刺小克银汉霉的芍药苷转化芍药内酯苷研究

芍药是我国传统的中药材,具有多种药理作用[1],广泛应用于保健食品、医药等领域[2]。芍药内酯苷和芍药苷是其中主要的活性成分[3],但两者在药理作用上有较明显差别[4]。芍药内酯苷具有抗抑郁作用[5],在促进睡眠、保护脑神经的药理活性甚至超过了芍药苷[6],此外其在镇痛、镇静、抗惊厥、调节免疫力、舒张平滑肌、抗炎、杀灭病原微生物和保护肝脏方面具有显著作用[7]。芍药苷和芍药内酯苷互为同分异构体[8],且在大多数芍药品种中,芍药苷的含量显著高于芍药内酯苷[9]。在芍药内酯苷抗抑郁药物的研发中,不仅需要采用高效的分离手段对两者进行分离,分离出来的芍药苷弃之不用造成资源的大量浪费[10]。所以,我们想到如果能利用微生物转化的方法将芍药苷转化为芍药内酯苷,一方面可以降低双苷分离的难度,另一方面可以极大地提高资源的综合利用度。目前,这方面的研究较少,刘鑫鑫等[11]曾对芍药苷和芍药内酯苷的微生物转化进行过初步研究。从18种真菌中筛选出分别对芍药苷和芍药内酯苷具有转化能力的菌株,其中短刺小克银汉霉(Cunninghamella blakesleeana AS 3.910)、雅致小克银汉霉、华根霉可以将芍药苷转化为芍药内酯苷,但并没有深入研究各个菌种的转化能力。本研究在此基础上,就真菌短刺小克银汉霉转化芍药苷为芍药内酯苷的影响因素进行了系统考察,以芍药苷的转化率和芍药内酯苷的产率为考察指标,对转化工艺进行了优化。构建了较高效的微生物转化体系,提高了短刺小克银汉霉对芍药苷的转化能力,为进一步研究奠定了良好基础。

短刺小克银汉霉AS 3.970对川丁特罗的微生物转化

目的对川丁特罗进行微生物转化研究。方法利用短刺小克银汉霉Cunninghamella.blakesleana AS 3.970对川丁特罗进行微生物转化,通过柱层析、液相色谱-质谱及核磁技术对川丁特罗微生物转化产物进行分离与鉴定。结果短刺小克银汉霉Cunninghamella.blakesleana AS 3.970转化川丁特罗累计获得三个转化产物,分别是川丁特罗芳香羟胺代谢物、川丁特罗叔丁基羟基取代代谢物和1-羧基川丁特罗。结论通过微生物转化技术可以对川丁特罗进行微生物结构修饰。

短刺小克银汉霉AS3.910的CYP2C9同工酶抑制作用

目的探索具有药物代谢酶CYP2C9活性的微生物模型对CYP2C9抑制剂的响应。方法选用短刺小克银汉霉AS 3.910为模型菌株,检测CYP2C9抑制剂对CYP2C9底物特定转化产物产率的影响,并通过底物间相互影响的程度探索该转化体系中的药物代谢相互作用。采用液相色谱-多级质谱联用技术检测转化产物。结果CYP2C9抑制剂苯溴马隆抑制4′-羟基甲苯磺丁脲的生成,使其产率由100%下降到14.5%;磺胺苯吡唑抑制O-去甲基吲哚美辛的生成,使其产率由75.2%降低到9.9%;丙戊酸抑制4′-羟基双氯芬酸的生成,使其产率由98.6%降低到2.7%。底物药物甲苯磺丁脲、双氯芬酸和吲哚美辛之间存在代谢相互作用,导致生成相应代谢物的产率降低。结论3种CYP2C9抑制剂不同程度地抑制了短刺小克银汉霉的CYP2C9同工酶,而且CYP2C9底物间存在药物代谢相互作用。

超声波法与酶解法联合制备短刺小克银汉霉原生质体及其活性评价

目的采用超声波细胞仪破碎法与酶解法联合制备短刺小克银汉霉原生质体,提高原生质体的制备量。方法采用蜗牛酶将短刺小克银汉霉细胞壁消化,采用超声波细胞破碎仪机械破碎加速其原生质体的释放,得到符合实验要求的原生质体。结果通过正交实验优化得到制备短刺小克银汉霉原生质体的条件是:以0.6mol/mL氯化钾作为渗透压稳定剂,以10mg/mL蜗牛酶为酶解剂,选用菌龄为12h的菌丝,在37℃下酶解2h,最后使用超声波细胞破碎仪破碎菌丝体15min。短刺小克银汉霉活性原生质体的释放量是7.5×107个/mL,且其7d内的存活率维持在90%以上。结论超声波细胞仪破碎法和酶解法联合使用可有效提高短刺小克银汉霉原生质体的释放率和活性。

短刺小克银汉霉对甘草次酸的微生物转化

利用丝状真菌短刺小克银汉霉Cunninghamella blakesleeana CGMCC 3.970对甘草次酸(GA)进行微生物转化研究。甘草次酸与短刺小克银汉霉培养物在25℃,135 r·min-1条件下共孵育7 d后,采用溶剂萃取法、大孔吸附树脂硅胶柱色谱、半制备液相色谱等手段提取并分离纯化转化产物,获得1个主产物和5个次要产物,经MS、1H-NMR和13C-NMR分别鉴定为3-酮基-15α-羟基-18β-甘草次酸(1)、3-酮基-15β-羟基-18β-甘草次酸(2)、7β,15α-二羟基-18β-甘草次酸(3)、3-酮基-7β,15α-二羟基-18β-甘草次酸(4)、7β-羟基-18β-甘草次酸(5)和15α-羟基-18β-甘草次酸(6),其中化合物2为一新化合物。这些结果提示短刺小克银汉霉CGMCC 3.970对GA具有选择性酮基化及羟基化作用。

短刺小克银汉霉对马钱子生物碱盐转化工艺的研究

目的为提高短刺小克银汉霉对马钱子中马钱子碱与士的宁的转化率,构建高效的短刺小克银汉霉微生物转化体系。方法根据菌种的生长代谢规律,采用单因素实验法,以马钱子碱硫酸盐和士的宁硝酸盐作为底物,以对底物的转化率作为指标,对可能的影响因素进行了考察。结果获得了优化的转化工艺,即接种量为4%、发酵时间为2.5 d、底物质量浓度为20 mg/L、转化时间为3 d、培养温度为28℃、培养基初始pH值为6.5、摇床转速为150 r/min。在此工艺条件下,2种底物的平均转化率分别达到了77.75%与77.10%。结论短刺小克银汉霉对2种底物的平均转化率分别提高了约17%与22%,此微生物转化体系能够满足马钱子减毒存效研究的需要。

短刺小克银汉霉AS 3.153菌株对丁咯地尔的代谢转化

建立能够模拟丁咯地尔在哺乳动物体内代谢的微生物模型,研究丁咯地尔在微生物体内的转化途径,并应用该模型制备代谢产物。菌株筛选实验中考察了4种小克银汉霉对丁咯地尔的转化能力,确定最佳菌株为短刺小克银汉霉AS 3.153;然后针对该菌株进行转化条件(培养基初始pH、底物浓度和转化时间)优化,建立微生物模型。应用LC-MSn法对转化样品进行分析,共检测到3种代谢产物,其中2种为首次发现的丁咯地尔代谢产物,进一步采用半制备液相色谱法制备获得对位-O-去甲基丁咯地尔和12-C-氧化丁咯地尔。哺乳动物对比实验表明,短刺小克银汉霉AS 3.153对丁咯地尔的代谢情况与人和比格犬类似,而与大鼠差异较大。