小分子伴侣协助重组人γ-干扰素体外复性研究

考察了小分子伴侣在游离和固定化两种情况下 ,对重组人γ 干扰素 (rhIFN γ)体外重折叠复性的作用 .实验结果表明 ,小分子伴侣GroEL191～ 345的加入有效地促进了rhIFN γ的复性 ,在初始蛋白质浓度为 10 0mg/L时 ,rhIFN γ复性后蛋白质回收率提高了 2 2倍 ,总活性提高了近 3倍 ;将小分子伴侣固定化在NHS activatedSepharoseFastFlow凝胶后 ,不但能重复利用 ,而且进一步提高了rhIFN γ复性效率 ,在初始蛋白质浓度为4 0 0mg/L时 ,仍使蛋白质回收率达到 4 6 2 9%和比活达到 1 95× 10 7U/mg .

小分子伴侣GroEL(191-345)在E.coli中的表达及其培养条件的优化

小分子伴侣GroEL(191-345)是分子伴侣GroEL顶端区域氨基酸残基191-345的片断,它能显著提高基因工程蛋白蝎毒Cn5、亲环蛋白A和吲哚3-甘油磷酸合成酶等的复性效率,具有广阔的应用前景。为制得大量的小分子伴侣进行蛋白质复性研究,本文对其培养条件进行了优化。结果表明携带小分子伴侣基因的工程菌在含有无机盐和碳源的M9培养基中培养能够显著提高小分子伴侣的表达量,在确定M9为基本培养基之后,对其主要成分进行了优化;同时,考察了发酵温度、供氧量、诱导条件对表达量的影响,将发酵产量提高到556.3mg/L。

小分子伴侣对淀粉样蛋白β聚集抑制作用研究

淀粉样蛋白β(Aβ)的积累和聚集在阿尔茨海默症的致病机理研究中是非常关键的,因而开发能有效抑制Aβ聚集的新型抑制剂具有重要的意义。来源于大肠杆菌分子伴侣GroEL/GroES系统的小分子伴侣(GroEL顶端结构域191-345位残基)可以通过疏水相互作用与目标蛋白结合,具有生物相容性好等特点,是一种潜在的Aβ聚集抑制剂。通过硫代硫磺素T荧光光谱、透射电镜、凝胶过滤色谱分析和细胞毒性实验详细研究了小分子伴侣与Aβ42的相互作用,并与姜黄素、表没食子儿茶素没食子酸酯和槲皮素等多酚类抑制剂的作用进行比较。结果表明小分子伴侣不仅降低了Aβ42的聚集程度,同时也改变了Aβ42的聚集路径,使得其聚集体分子量和纤维形貌发生了显著变化。相较于对照组,添加小分子伴侣后使得Aβ42溶液原位ThT荧光响应值下降了72%,形成的纤维长度从数百纳米下降到小于50 nm,SH-SY5Y的细胞存活率提升了20%。因此,小分子伴侣能有效阻止Aβ纤维聚集体形成,降低其细胞毒性,具有良好的应用前景。