蚂蟥Guamerin基因的克隆及吸食后时空表达分析

该研究对非吸血蛭蚂蟥体中弹性蛋白酶抑制剂基因(wp Guamerin)进行了克隆和生物信息学分析,同时对该基因在蚂蟥不同组织、不同吸食阶段的时空表达特点进行研究。结果表明,蚂蟥wp Guamerin基因全长295 bp,相对分子质量为9 145.95 Da,包含1个编码83个氨基酸的开放阅读框,与吸血蛭Guamerin氨基酸序列相似性均在29%~65%;wp Guamerin编码的蛋白无信号肽,属于亲水性蛋白,二级结构主要由α-螺旋、延伸链、折叠和无规则卷曲组成。wp Guamerin在肌肉中表达量显著高于唾液腺,在嗉囊和肠中无表达;吸食后wp Guamerin在肌肉和唾液腺的表达量分别在第1,3天达到最高。因此,wp Guamerin是有别于吸血蛭Guamerin的小分子多肽蛋白,在蚂蟥消化道中不表达,主要在肌肉中表达,吸食行为可刺激蚂蟥肌肉和唾液腺wp Guamerin基因的表达而不能诱导蚂蟥消化道wp Guamerin的表达。

冷冻复苏过程对人精子印记基因SNRPN和GRB10DNA甲基化及表达的影响

目的探讨精液冷冻复苏过程对人精子印记基因SNRPN、GRB10甲基化状态和mRNA表达的影响。方法将20份人精液标本平行分为2组:新鲜组(n=20)和冷冻组(n=20)。采用计算机辅助精子分析(CASA)进行两组精液的常规参数检测;Percoll密度梯度离心法纯化精子,SNRPN、GRB10基因的甲基化率采用Sequenom DNA测序分析;SNRPN、GRB10基因的mRNA表达采用qRT-PCR定量分析。结果冷冻组精子浓度、精子活力、前向运动精子百分比均低于新鲜组(P<0.05),冷冻组不活动精子百分比显著高于新鲜组(P<0.05);冷冻组精子SNRPN mRNA表达显著低于新鲜组(P<0.05);冷冻组精子GRB10启动子区亚片段检测的-902Cp G位点(即转录起始点上游989 bp处)的甲基化率显著下降(P<0.05);GRB10 mRNA表达较新鲜组显著升高(P<0.05)。结论冷冻复苏过程影响人精子GRB10、SNRPN基因的DNA甲基化和mRNA表达,提示精子库常规使用的精液冻储技术可能改变配子的表观遗传信息,进而调控基因的表达。