小分子核糖核酸与肿瘤转移

小分子核糖核酸(miRNA)是一类新发现的非编码小RNA分子,通过碱基配对与靶基因mRNA的3'非翻译区(3'UTR)结合从而在转录后水平引起靶基因mRNA的剪切或翻译的抑制。miRNA与个体发育、干细胞分化和疾病密切相关,尤其是在肿瘤的发生和发展过程中,miRNA扮演着不可替代的角色。最近的研究显示一些特异的miR-NA会影响肿瘤细胞的浸润和转移,这就为肿瘤的治疗提供了一种可能的新方法。在本综述中,作者总结了与肿瘤转移相关的miRNA及其可能的调节机制。

小分子核糖核酸在恶性胸膜间皮瘤的研究进展

恶性胸膜间皮瘤(MPM)是一种来源于浆膜间皮细胞的高度恶性肿瘤,具有早期不易诊断、病死率极高、生存预后极差等特点。近年随着现代医学生物技术的发展,一些生物标记物被发现对MPM高危人群的筛查、早期诊断、疗效评价、预后评估均有不同的价值,其中小分子核糖核酸(MiRNAs)是目前研究最为热门的标记物之一。因此本文就MiRNAs在MPM的应用进行综述。

小分子核糖核酸在前列腺癌中的表达及作为诊疗和预后标志物的研究

目前,前列腺癌(PCa)的诊断都是把血清前列腺特异性抗原(PSA)和数字直肠检查(DRE)两项指标做为诊断依据。然而这种方法存在较低的阳性率和较高的误诊率等缺陷,近年来,新的诊断标志物已经应用于临床诊断中,如前列腺癌抗原3(PCa-3)和融合基因TMPRSS2-ETS等还处在试验阶段,所以发现可用于诊断和预后新的标志物仍然是必要的。最近的研究表明,小分子核糖核酸(miRNA)的表达有反向调控基因表达的作用,与PCa在内的多个肿瘤的生物学行为相关联,而且miRNA在不同肿瘤中表达存在差异,因而miRNA可以作为肿瘤潜在的诊断、预后及治疗的工具。该文通过回顾各种与PCa相关的miRNA的表达和研究进展,以阐明其在PCa诊断及治疗中的作用。

槲皮素通过小分子核糖核酸196b调节磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白通路从而抑制骨肉瘤细胞增殖研究

目的:探讨槲皮素抗骨肉瘤细胞增殖的可能机制。方法:体外培养骨肉瘤细胞系MG-63、143B和U2OS,用25,50和100μmol/L的槲皮素干预后,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测小分子核糖核酸196b(miR-196b)的水平。随后利用miR-196b抑制剂,联用100μmol/L槲皮素后通过CCK8检测细胞的存活率;通过划痕和Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭;通过蛋白质印迹法(Western Blot)检测细胞中磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)信号通路的表达。结果:槲皮素上调了三种骨肉瘤细胞中miR-196b的水平,且呈现剂量依赖性。在应用miR-196b抑制剂后,miR-196b的表达水平被显著抑制。槲皮素能够显著抑制骨肉瘤细胞的生长,但在联用miR-196b抑制剂后,槲皮素抑制骨肉瘤细胞增殖的作用被减弱。划痕和Transwell实验结果显示,槲皮素能够显著抑制骨肉瘤细胞的迁移和侵袭,但在联用miR-196b抑制剂后,槲皮素抑制骨肉瘤细胞迁移和侵袭的作用被减弱。此外,槲皮素显著抑制了骨肉瘤细胞中p-mTOR、p-AKT和p-PI3K的表达,对mTOR、AKT和PI3K的表达则无明显影响。联用miR-196b抑制剂后,p-mTOR、p-AKT和p-PI3K的表达显著上升,与单用槲皮素组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:槲皮素通过上调miR-196b调节PI3K/AKT/mTOR信号通路,从而抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。

几种新型小分子核糖核酸与类风湿性关节炎关系的研究进展

目的:为临床治疗类风湿性关节炎(RA)提供思路和参考。方法:以"小分子核糖核酸""类风湿关节炎""microRNAs""miRNAs"等为关键词,组合查询2006-2013年万方数据库和PubMed数据库中有关小分子核糖核酸(microRNAs或miRNAs)和RA的研究文献,对miRNAs在RA中的研究进展进行综述。结果与结论:共查询到文献130篇,其中有效文献29篇。共有11种miRNAs和RA关系的研究,包括miRNA-221/222、miRNA-323-3p、miRNA-146a、miRNA-155、miRNA-223、miRNA-24、miRNA-26a、miRNA-125a-5p、miRNA-18a、miRNA-34a、miRNA-203等。其在人RA或动物RA模型的滑膜组织或滑膜细胞中均有不同程度的表达;加强对miRNAs与RA关系的研究,对明确RA的发病机制具有重要意义,同时也可为临床提供治疗或诊断的潜在靶点。

小分子核糖核酸-126在结直肠癌中表达的研究

目的探讨结直肠癌患者血浆中小分子核糖核酸-126(Micro RNA-126,mi R-126)的表达水平,及其与临床病理特征之间的相关性,为结直肠癌患者的早期诊断提供可能。方法收集2014年7月至2016年7月在杭州市红十字会医院就诊的45例结直肠癌住院患者和40例健康体检者的外周血,进行实时定量反转录-聚合酶链反应(q Real-Time PCR)检测血浆mi R-126表达水平,并分析血浆mi R-126表达水平与结直肠患者临床病理特征的相关性。用SPSS 16.0和Graph Pad软件进行统计学分析,非正态分布的计量资料的比较用Mann Whitney U检验,计数资料的比较用χ~2检验,通过受试者工作特征(ROC)曲线分析血浆mi R-126对结直肠患者早期诊断的特异性与敏感度。结果结直肠癌患者血浆mi R-126的中位数为0.77,四分位数为0.12和1.31,显著低于健康体检者3.80(0.19,4.11),差异有统计学意义(P<0.05);结直肠癌患者血浆mi R-126低表达与肿瘤转移、肿瘤分化及分期相关(P<0.01)。ROC曲线分析血浆mi R-126曲线下面积为0.89(95%CI:0.80~0.89),区分结直肠癌患者与健康体检者,其特异性为85%,敏感度为92%。结论结直肠癌患者血浆mi R-126表达水平下调与肿瘤发生及远端转移密切相关,是一个潜在的早期诊断标志物。

脑脊液小分子核糖核酸210对神经胶质瘤早期诊断的研究

目的研究神经胶质瘤患者脑脊液中小分子核糖核酸210(Micro RNA-210,mi R-210)表达水平,探讨其作为早期诊断标志物的价值。方法收集2015年10月至2017年1月于浙江省临安市人民医院神经外科住院治疗的50例神经胶质瘤患者的脑脊液,通过实时荧光反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测脑脊液中mi R-210的表达,选择45例健康者作为健康对照组。分析神经胶质瘤患者脑脊液mi R-210表达水平与临床病理特征的关系。采用SPSS 17.0进行Mann Whitney U检验,单因素logistic回归分析,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析mi R-210作为神经胶质瘤患者早期诊断标志物的特异性与敏感度。结果神经胶质瘤患者脑脊液中mi R-210表达水平(44.9±5.6)明显高于健康对照组(1.8±6.2),差异有统计学意义(P<0.01)。临床分期为Ⅲ、Ⅳ,发生肿瘤转移、复发的神经胶质瘤患者mi R-210高表达所占比例明显高于临床分期为Ⅰ、Ⅱ,未发生肿瘤转移及复发的患者,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。单因素logistic回归分析结果显示,临床分期晚(OR=1.31,95%CI:1.06~15.85)、转移(OR=1.23,95%CI:1.08~20.55)、mi R-210高表达(OR=1.29,95%CI:1.84~16.87)是胶质瘤术后复发的危险因素。ROC曲线下面积为0.83(95%CI:0.76~0.87),特异性为82%,敏感度为89%。结论神经胶质瘤患者脑脊液中mi R-210表达水平升高,可用于神经胶质瘤患者的早期诊断。

慢病毒载体介导survivin小分子干扰核糖核酸对裸鼠肺癌移植瘤的影响

目的观察慢病毒载体介导的survivin小分子干扰核糖核酸(small interfering RNA,siRNA)能否在裸鼠体内抑制肺癌移植瘤的生长。方法裸鼠随机分为3组,分别将A549细胞、无关序列及survivin siRNA慢病毒载体感染A549细胞接种于裸鼠右侧背部近腋窝皮下,观察survivin siRNA对移植瘤生长的影响。采用逆转录酶聚合酶链反应和Western blotting测定移植瘤组织survivin基因及其蛋白表达。结果成功建立人肺癌裸鼠皮下移植瘤模型。survivin siRNA组移植瘤体积及质量明显低于其他2组(P<0.01),抑瘤率为63.6%(基于体积)或58.8%(基于质量),survivin mRNA和蛋白表达分别减少53.7%、57.6%。结论慢病毒载体介导survivin siRNA可明显下调裸鼠体内survivin基因表达,抑制肺癌移植瘤的生长。

小分子干扰核糖核酸脂质体对乙型肝炎病毒的药效学研究

目的利用HepG2.2.2.15细胞模型研究小分子干扰核糖核酸脂质体对乙型肝炎病毒(HBV)的抑制作用。方法在药物对细胞的最大无毒浓度下,依次设定4个浓度梯度,分别测定不同时间收集的培养液中的乙型表面抗原(HBsAg)和乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)。结果第12天时质量浓度为5μg/mL的药物对HBV的HBsAg表达的抑制率达到了63%,抑制程度随药物质量浓度的升高,或时间的增加而提高;药物质量浓度为5μg/mL时对HBV-DNA的抑制率达到了85.46%,抑制程度随着药物质量浓度的上升而提高。结论药物对HBV的HBsAg表达的抑制作用具有明显的剂量效应和时间效应,对HBV-DNA的抑制作用也有很好的剂量效应;利用基因工程手段制备的双链小分子RNA脂质体制剂具有明显抑制HBV的HBsAg表达和抑制HBV-DNA复制的作用,为利用RNA干扰技术研究开发新型抗HBV药物创造了条件。

外泌体靶向递送核酸类分子研究进展

外泌体作为纳米级小细胞外囊泡,是生命体内细胞信息传递的重要方式。外泌体由于具有递送效率高、免疫原性低、可跨过多种生物屏障和具有靶向性等特点。促使外泌体成为药物递送载体的重要成员,用以克服某些药物稳定性差、生物利用度不足、溶解度低和毒性高等缺点。本文将主要介绍近年来广泛关注的利用外泌体以囊泡形式作为新型药物递送几种核酸类分子,主要包括小分子核糖核酸、小干扰核糖核酸和脱氧核糖核酸进行综述,本文旨在为发展高效安全的外泌体靶向核酸类分子递送提供理论依据和设计思路,促进其临床转化。

非编码核糖核酸在腹膜纤维化发病机制中的作用进展

腹膜纤维化是一种与慢性肾脏病和腹膜透析相关的疾病,本文综述了非编码核糖核酸(ncRNA)特别是小分子核糖核酸(miRNA)、长链非编码核糖核酸(lncRNA)及环状核糖核酸(circRNA)在腹膜纤维化发病机制和病理过程中的作用,以及miRNA、lncRNA、circRNA作为新型诊断生物标志物或治疗靶点的潜在应用,旨在总结目前关于ncRNA在腹膜纤维化中的作用的研究进展,加深对这一复杂分子网络及其在疾病中的理解。

多发性骨髓瘤的分子遗传学研究进展

多发性骨髓瘤（MM）是特征性的骨髓中恶性浆细胞异常增殖,通常它先于恶性的单克隆丙种球蛋白出现。MM代表了大约10%的血液系统恶性肿瘤,特征是出现相关临床症状和器官损害指征,可以危及生命或严重影响生活质量。MM发生发展可能是由于B细胞克隆,有别于在自由的骨髓微环境中的恶性浆细胞。研究者认为小分子核糖核酸（miRNAs）参与了MM的病理学过程,并且最新的临床研究就是以miRNAs作为药物或靶目标而成为治疗MM的潜在的新疗法。

鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤相关分子研究进展

鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤(ISP)是鼻腔鼻窦良性肿瘤的一种,首选的治疗方法是手术治疗,又因其局部侵袭样生长、复发倾向、恶变这3个特点而区别于良性肿瘤,故ISP初发的手术治疗及术后随访至关重要。目前ISP诊断、治疗、随访等主要依据为影像学、病理学及内镜技术,而因ISP发生机制尚不明确利用ISP分子生物学机制指导ISP的诊治极少,因此,研究ISP相关分子有助于探索影响ISP的关键基因,为ISP的诊治提供新的思路及有利证据。近年来国内外学者对一些因子在ISP中的表达方面做了大量的研究,本文系统地回顾了国内外相关文献,总结分析了已研究的ISP相关分子并予以综述。

miR-144-3p分子在胶质瘤中的表达

目的本文研究了小分子核糖核酸-144-3p(miR-144-3p)分子与胶质瘤发生发展的相关性。方法本实验所需胶质瘤组织均来自于西京医院神经外科胶质瘤患者,共50例;利用人源神经元细胞系HCN-2(human cortical neuron-2,HCN-2)、U251胶质瘤细胞系、U87MG胶质瘤细胞系等。通过细胞培养及miRNA转染,细胞及组织RNA提取,反转录多聚酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR),实时定量PCR对miR-144-3p分子在胶质瘤中的表达进行检测。结果 miR-144-3p分子在人和小鼠染色质定位高度保守;miR-144-3p分子在胶质瘤患者不同组织中的表达差异;miR-144-3p分子在不同病理学分级胶质瘤中的表达差异;miR-144-3p分子在不同人源胶质瘤细胞系中的表达差异,其表达量与患者预后相关性。结论 miR-144-3p分子在哺乳动物中高度保守,与患者的预后有关。

血瘀证的microRNA分子机制及中药干预作用

microRNA是一类长约22个核苷酸的小分子非编码RNA,对基因表达具有转录后调控作用,因可同时调控多个靶基因,microRNA显示出广泛的生理作用,是多种疾病病理生理过程中的关键分子,也是药物治疗的新靶点。血瘀证主要特征表现为血液黏滞度增加、血小板黏附/聚集增强和微循环障碍,通常导致血管内皮功能不同程度受损。单个microRNA可调控多个靶基因表达,因而显示出多效性,呈现网络式调控作用,可能是现代中医药创新发展的突破点之一。目前研究显示,microRNA既是血瘀证诊断的重要客观参考,又是活血化瘀中药临床取效的重要作用靶点。应用现代医学新技术,研究microRNA在血瘀证患者辨病辨证中的临床应用可行性,从转录后水平寻找中医辨证诊断客观依据,探索microRNA与中医证型相关内在机制,可以提高临床辨证准确性,为治疗和改善预后提供更多干预目标,并为中医药理论发展提供更多支持。

miRNA加工途径的功能性鉴定方法

目的构建新型慢病毒载体,以寻求最佳的miRNA加工途径功能性鉴定方法。方法通过一种双功能慢病毒载体同时表达报告分子绿色荧光蛋白(GFP)以及GFP特异性miRNA初级转录产物(pri-miRNA);后者利用内源性miRNA加工途径形成GFP特异性成熟miRNA,进而干扰报告分子GFP的表达,通过GFP的表达水平监控miRNA加工途径。结果在肿瘤细胞系和皮肤原代细胞中验证了此miRNA加工途径功能性鉴定方法。对照组pri-miRNA慢病毒感染后,无论是肿瘤细胞系还是皮肤原代细胞均在流式细胞仪上表现出明显的GFP蛋白表达;然而实验组GFP特异性pri-miRNA慢病毒感染后,细胞中GFP表达水平显著低于对照组(P<0.05)。其次在不同细胞状态下检测了此方法的有效性。无论在正常状态还是衰老状态下的人胚肺成纤维细胞,GFP特异性pri-miRNA慢病毒都显示出远低于对照组的GFP表达(P<0.05)。结论此双功能病毒载体能够准确检测内源性miRNA加工途径的运行状态。此方法具有普遍性,不受细胞类型和细胞状态的影响。

miRNA对2型糖尿病合并慢性心力衰竭心室重构的影响研究概况

小分子核糖核酸(microRNA,miRNA)是RNA里的一个小片段,长度约22个核苷酸。它可以精确调节编码蛋白质基因的激活,还能够压制它们的目标,从而协调复杂的遗传程序。miRNA参与众多疾病的发病过程。近年来,大量试验及研究表明,miRNA参与了心脏重塑的病理过程。在心肌肥厚、心肌纤维化以及心肌细胞凋亡的发生、发展过程中,miRNA均起到了重要的调控作用,且miRNA对于转化生长因子-β(Transforming Growth Factor-β,TGF-β)具有一定的调控作用。糖尿病可以引发神经、组织及器官的病变,其中心血管疾病是2型糖尿病最常见的并发症之一,也是导致糖尿病患者死亡的最主要原因,2型糖尿病是心力衰竭发生、发展过程中一个重要的危险因素。研究通过查阅近年来有关miRNA对2型糖尿病合并慢性心力衰竭心室重构的中外医学文献,分析各类型的miRNA与心肌肥厚、心肌纤维化以及心肌细胞凋亡之间的关系,为深入了解该病的病理机制、进一步临床研究提供依据。

莱茵衣藻硫胁迫相关microRNA检测及其靶基因分析

采用特异反转录引物,构建莱茵衣藻microRNA(miRNA)的cDNA文库.选用U4核仁小分子RNA(small nucleolar RNA,snoRNA)作为内参,用SYBR green RT-PCR对3种与莱茵衣藻缺硫胁迫反应相关的miRNA进行检测,利用在线平台软件Web MicroRNAs Designer(WMD3)对miRNA靶基因进行预测.结果表明,在缺硫胁迫下,3种miRNA(miRNA1145.2、miRNA1146和miRNA1158)的表达水平均明显上调,与正常培养的莱茵衣藻表达miRNA的相对丰度比值分别为3.11、2.38和3.67.靶基因预测分析表明,miRNA1145.2能影响脂肪酸氧化反应,miRNA1146与辅酶Q代谢相关,miRNA1158可能参与磷酸戊糖途径调控.

人工关节置换与深静脉血栓的生物标志物

背景:深静脉血栓是人工关节置换的常见及严重并发症,在临床上超声及静脉造影被广泛应用于深静脉血栓的诊断,但是他们各有缺点。目的:寻找一种更加合适无创的早期诊断深静脉血栓的生物标记物。方法:以"Thrombosis,DVT,Biomarke,rTotal Joint Arthroplasty,D-dimer,FactorⅧ,Thrombin Generation Fibrin Monomer,P-selectin,Inflammatory Cytokines,Microparticles,Leukocyte Count,Genetic factors,Micro RNAs"为检索词,应用计算机在PubM ed数据库检索1995年1月至2015年3月的相关文献,并进行筛选、归纳和总结。结果与结论:共纳入66篇符合标准文献。将诊断深静脉血栓的生物标志物分为凝血相关标志物、炎性标志物及基于分子生物学及遗传学三大层面,并阐述其在诊断治疗中的机制与作用,以求寻找经济、安全、临床可以广泛应用且准确度和敏感度更佳的生物标志物,为早期预测诊断深静脉血栓提供理论基础。

miR-21对瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原分泌及细胞增殖的影响

目的探讨miR-21(microRNA-21)在瘢痕疙瘩中的表达及其生物学作用,为瘢痕疙瘩的防治提供新的思路。方法收集临床患者正常皮肤及瘢痕疙瘩标本,部分进行组织学检测;部分进行体外细胞培养,Real-time PCR检测体外培养的正常皮肤来源和瘢痕疙瘩来源的成纤维细胞中,miR-21、Smad7(miR-21靶基因)、Col 1 A1、Col 3 A1(纤维化相关基因)的表达;应用miRNA-21的模拟物和抑制剂,以Western-Blot和Real-time PCR分别检测Col 1 A1、Col 3 A1及Smad7的蛋白和核酸水平表达变化,结晶紫实验检测细胞增殖能力的变化。结果瘢痕疙瘩标本组织学检测,其胶原的含量明显高于正常皮肤;瘢痕疙瘩成纤维细胞中miR-21、Col 1 A1、Col 3 A1表达高于正常皮肤组织,Smad7表达低于正常皮肤组织;正常皮肤来源成纤维细胞转染miR-21模拟物后,Smad7表达降低,纤维化相关基因的表达、细胞增殖能力增加;瘢痕疙瘩组织来源成纤维细胞转染miR-21抑制剂后,Smad7表达增加,纤维化相关基因的表达、细胞增殖能力降低。结论瘢痕疙瘩中miR-21表达升高,促进了细胞外基质中纤维化相关胶原基因的表达,促进成纤维细胞的体外增殖能力,可能是导致瘢痕疙瘩形成的重要原因。