小分子热休克蛋白AgsA过量表达提高大肠杆菌的抗热性

目的探讨来自鼠伤寒沙门氏菌的小分子热休克蛋白AgsA过量表达对大肠杆菌（E．coli）抗热性的影响。方法将重组质粒pET21a—agsA转化到E．coliBL21（DE3）感受态细胞中，表达AgsA蛋白，并对其进行纯化。分别以乙醇脱氢酶和过氧化氢酶作为底物，检测AgsA蛋白的分子伴侣活性。将过量表达AgsA的E．coli在不同温度下处理，检测AgsA对Ecoli的热保护作用。结果重组质粒pET21a—agsA转化到E．coliBL21（DE3）感受态细胞之后，诱导目的蛋白表达，经纯化，获得高纯度的AgsA蛋白。该蛋白可以在体外阻止乙醇脱氢酶和过氧化氢酶在高温条件下发生的聚集。体内过量表达AgsA蛋白可以显著提高大肠杆菌的抗热性。结论AgsA蛋白通过其分子伴侣活性阻止大肠杆菌体内蛋白在高温下发生的聚集，从而提高大肠杆菌在高温环境下的生存率。

鼠伤寒沙门菌小分子热休克蛋白AgsA的N与C末端在溶液中暴露比较

目的探讨鼠伤寒沙门菌小分子热休克蛋白AgsA的N末端在其寡聚体中所处的位置,为临床治疗提供参考依据。方法通过分别在小分子热休克蛋白AgsA的N、C末端添加多聚组氨酸标签(His-tag),检测二者与镍螯合琼脂糖凝胶(Ni-NTA Agarose)的结合能力,比较目标蛋白的N、C末端在溶液中的暴露情况。结果 Histag的添加既不影响AgsA蛋白的寡聚状态,也不影响其类分子伴侣活性;通过比较分别在N、C末端添加Histag的AgsA蛋白与Ni-NTA Agarose的结合能力,发现AgsA蛋白的C末端在溶液中的暴露情况远大于其N末端。结论 AgsA-N-His6与Ni-NTA Agarose的结合能力远远小于AgsA-C-His6,暗示了AgsA蛋白的N末端被包裹在其寡聚体内部。

小分子热休克蛋白与肿瘤凋亡关系的研究进展

小分子热休克蛋白(small heat shock proteins,sHSPs)是众多热休克蛋白(heat shock proteins,HSPs)中的一大类,包括HSPB1、HSPB5、HSPB6、HSPB8等。近来研究表明,它们在许多信号通路扮演关键角色,这些信号通路与肿瘤的发生、抗放疗和凋亡的抑制有着许多联系,尤其是在肿瘤凋亡方面。本文对sHSPs在肿瘤凋亡途径方面予以综述。

植物小分子热休克蛋白

在热刺激下 ,真核和原核细胞都能产生一类小分子热休克蛋白 (smallheatshockproteins,sHSPs) ,植物sHSPs数量、种类众多而且十分重要。目前已经发现植物中至少存在 6种细胞内sHSPs。植物在特定的发育阶段或受到逆境条件的刺激产生sHSPs。大量研究表明sHSPs通过分子伴侣机制保护逆境中的细胞 ,在植物逆境忍耐中起着重要作用。

海南黑山羊小分子热休克蛋白9cDNA克隆及其生物信息学分析

本研究以海南黑山羊睾丸组织为材料,利用RT-PCR和RACE技术获得海南黑山羊小分子热休克蛋白9(small heat shock protein 9,Hspb9)基因完整的CDS序列,并对其进行生物信息学分析。结果表明,克隆得到山羊Hspb9cDNA长549bp,CDS区471bp,共编码157个氨基酸,提交至GenBank数据库中,登录号为:JX088726。生物信息学分析结果表明,Hspb9编码的蛋白无跨膜区和信号肽,存在多个磷酸化位点;预测Hspb9蛋白二级结构α-螺旋占15.28%,β-折叠占30.57%,无规则卷曲占54.15%;存在1个UBQ结构域;Clustel W方法比对山羊Hspb9与绵羊、牛的同源性最高。

线虫中的小分子热休克蛋白HSP12.1具有类分子伴侣活性

很多种类的小分子热休克蛋白(small heat shock protein,sHSP)都能在胁迫条件下抑制蛋白质的聚集,显示出了类分子伴侣活性,这种活性是ATP非依赖型的.从已经进行的实验发现,线虫C.elegans中最小的小分子热休克蛋白家族成员HSP12.1具有类分子伴侣活性,以胰岛素、乙醇脱氢酶和溶菌酶做底物发现HSP12.1能够一定程度地抑制底物的热聚集,虽然这种活性较一些经典的分子伴侣蛋白(线虫中的HSP16.1)要低.与此不同,另外3种和其分子质量相近的sHSP12s(HSP12.2、HSP12.3和HSP12.6)却没有检测出这样的类分子伴侣活性,虽然它们在一级结构上有很高的相似性.另外,在大肠杆菌中表达HSP12.1蛋白能够提高细菌在高温环境下的生存率,45℃处理后的生存率比未表达HSP12.1的菌高4倍左右,不过在线虫中是否发挥同样的功能还不是很清楚.从研究结果来看,C端“尾巴”结构域对sHSP发挥类分子伴侣活性不是必要的,在HSP12.1中没有C端“尾巴”结构域也有类分子伴侣活性就证明了这一点.N端结构域可能在发挥类分子伴侣活性中发挥比较重要的作用,当然α-crystallin结构域也可能参与到发挥这样的功能当中.

小分子热休克蛋白在宰后牛肉成熟中的作用

宰后牛肉成熟过程是一系列内源酶和调节因子协同作用的结果。动物被宰杀放血后,肌肉内环境胁迫机体发生免疫应答,热休克蛋白首先被激活。蛋白组学数据发现,小分子热休克蛋白与嫩度之间具有显著相关性,可能是成熟过程中嫩度变化的一个关键调控因子。作者综述了小分子热休克蛋白的结构和主要功能,并分析了其在宰后肌肉内环境条件下的变化,重点讨论了小分子热休克蛋白在成熟过程中的潜在作用。

结核分枝杆菌感染小鼠肺泡巨噬细胞诱导结核分枝杆菌小分子热休克蛋白HSP16.3分泌表达模型的建立及鉴定

为了建立及鉴定结核分枝杆菌感染小鼠肺泡巨噬细胞诱导结核分枝杆菌小分子热休克蛋白HSP16.3分泌表达的模型。采用将0.3mL浓度约为1.0×107个/mL结核分枝杆菌菌悬液经昆明小鼠尾静脉注射,复制结核分枝杆菌感染小鼠模型,经鉴定小鼠感染模型复制成功后第15天,进行小鼠肺泡的灌洗,收集小鼠肺泡灌洗液,获取感染小鼠肺泡巨噬细胞,以提取的感染小鼠肺泡巨噬细胞内的结核分枝杆菌基因组DNA为模版PCR扩增结核分枝杆菌小分子热休克蛋白HSP16.3的基因,同时进一步利用激光共聚焦显微镜观察小鼠肺泡巨噬细胞的方法进行研究。PCR结果证实感染结核分支杆菌的巨噬细胞内有结核分枝杆菌小分子热休克蛋白Hsp16.3的基因表达;同时激光共聚焦显微镜下可见感染小鼠肺泡巨噬细胞内吞噬有大量结核分枝杆菌,并且证实有结核分枝杆菌小分子热休克蛋白Hsp16.3的分泌表达。成功建立了结核分枝杆菌感染小鼠肺泡巨噬细胞诱导结核分枝杆菌小分子热休克蛋白HSP16.3分泌表达的模型。

小分子热休克蛋白与缺血性心脏病

小分子热休克蛋白是生物体受各种刺激产生的一组小分子应激蛋白。小分子热休克蛋白在进化上高度保守,在功能上广泛参与细胞的重要生物学过程。缺血作为一个刺激性因素,可激发机体产生小分子热休克蛋白应对缺血损伤。本文将对小分子热休克蛋白抵抗缺血性心脏病的作用机制作一综述。

小分子热休克蛋白对晶状体的保护作用

小分子热休克蛋白 (sHSP)是晶状体中的成分蛋白 ,与眼晶状体的α 晶体蛋白在氨基酸和基因水平上高度同源 ,对晶状体发挥重要的保护作用。其可能机制为 :( 1 )降低胞内活性氧水平 ,提高谷胱甘肽含量 ;( 2 )影响与晶状体抗氧化有关的酶防御系统 ;( 3)可对抗凋亡。系统地研究sHSP在白内障发病中的作用 。

Pyrococcus furiosus小分子热休克蛋白Pfu-sHSP的克隆表达和纯化

用PCR扩增嗜高温菌Pyrococcus furiosus的小分子热休克蛋白基因后,克隆于质粒pT7473中.该小分子热休克蛋白Pfu-sHSP含有较多的稀有密码子,在大肠杆菌BL21(DE)3几乎无表达,而在带有大肠杆菌稀有密码子AGA(arg)AGG(arg),AUA(ile)和CUA(leu)的BL21—Codonplus(DE)3—RIL中能大量表达.大量表达Pfu-sHSP蛋白的细胞用超声波破碎后,离心沉淀用85℃水浴20 min,再离心,上清液再以Q Sepha-rose Fast Flow阴离子交换和S-200凝胶过滤层析进一步纯化,可以得到90%以上的蛋白.

缺血预处理模型大鼠心肌组织小分子热休克蛋白的表达

背景:小分子热休克蛋白,尤其是热休克蛋白27和α-B晶体蛋白高表达量对于心肌组织缺血再灌注的保护作用已比较明确。但是在老龄大鼠中小分子热休克蛋白是否仍具有这种保护作用迄今仍无报道。目的:观察热休克蛋白27和α-B晶体蛋白在青年及老年大鼠心肌缺血预处理时表达的变化。方法:24月龄老龄大鼠及两三月龄青年大鼠在体心脏经缺血5min、再灌注5min(反复3次)预处理后,于0,5,15,45,60min取左心室缺血的前壁与非缺血的后壁心肌组织分别匀浆,分离上清及沉淀蛋白,用Western Blot检测热休克蛋白27和α-B晶体蛋白在预处理不同时间可溶性蛋白及不溶性蛋白含量的改变;采用RT-PCR方法观察缺血预处理对青年及老龄大鼠热休克蛋白27和α-B晶体蛋白mRNA在不同时间点表达的改变情况,采用免疫荧光观察缺血预处理后不同时间点热休克蛋白27和α-B晶体蛋白的移位情况。结果与结论:老龄大鼠在缺血预处理后热休克蛋白27和α-B晶体蛋白表达量增加,表明老龄大鼠仍具有正常的基因转录及蛋白合成的能力;与青年大鼠比较,老龄大鼠缺血预处理后小分子热休克蛋白移位能力降低,从而减弱了与各相应蛋白结合的能力,限制其保护作用的发挥。提示老年大鼠心肌组织中小分子热休克蛋白丧失移位能力,可能是老年大鼠缺血预处理保护作用减弱的重要原因之一。

小分子热休克蛋白20与心血管病的研究新进展

小分子热休克蛋白20是热休克蛋白家族中的一个亚组,具有抑制血小板聚集、舒张血管平滑肌等多重心血管保护作用。新近研究表明对小分子热休克蛋白20在调节心肌细胞骨架动力学变化、细胞凋亡及其自身分子伴侣特性方面更有其独特特性,本文就此方面新进展作一综述。

小分子热休克蛋白抗细胞凋亡的研究进展

小分子热休克蛋白 (sHSP)属分子伴侣 ,它的表达增强了各种致死性损害因子 (如热休克、氧化应激、抗癌治疗及致凋亡因子 )作用下的哺乳动物细胞的存活。小分子热休克蛋白可对抗TNF α ,Fas介导的凋亡 ,并控制正常生理过程中凋亡的发生 。

镉急性染毒对中华稻蝗精卵巢小分子热休克蛋白基因表达的影响

小分子热休克蛋白(s HSPs)能够被环境胁迫诱导,采用不同浓度氯化镉(Cd Cl2)溶液对中华稻蝗5龄若虫进行急性染毒,利用Real-time PCR技术对5个小分子热休克蛋白基因Oc HSP19.1、Oc HSP19.8、Oc HSP20.4、Oc HSP20.7和Oc HSP21.1在精巢和卵巢的表达进行了分析。结果表明:在精巢内,Oc HSP19.1和Oc HSP19.8基因经0.16μg·μL-1Cd2+处理,其在不同处理时间的表达水平与对照组相比均显著升高;经0.32μg·μL-1Cd2+处理,其在2 h表达水平最高,之后显著降低;经0.48μg·μL-1Cd2+处理,Oc HSP19.1基因在2 h和6 h的表达量均高于对照组,在12 h的表达量低于对照组,Oc HSP19.8基因在2 h的表达量高于对照组,在6 h的表达量低于对照组,之后二者表达量都显著升高,在36 h表达量最高,分别为对照组的6.3倍和5.4倍。在卵巢内,Oc HSP19.1和Oc HSP21.1基因经0.16μg·μL-1和0.48μg·μL-1Cd2+处理,其在不同处理时间的表达水平与对照组相比无显著差异;经0.32μg·μL-1Cd2+处理,Oc HSP19.1基因在6 h和12 h的表达水平高于对照组,但在24 h低于对照组,Oc HSP21.1基因在2、6、12 h和24 h的表达水平与对照组相比均显著降低,但二者都在36 h表达量最高,分别为对照组的4.8倍和4.6倍;经0.16μg·μL-1和0.48μg·μL-1Cd2+处理,Oc HSP20.7基因在2 h表达水平高于对照组,经0.32μg·μL-1Cd2+处理,该基因的表达水平随着时间的延长出现先升高后降低的趋势。Oc HSP21.1基因在精巢内和Oc HSP20.4基因在卵巢内的表达水平与对照组相比无显著差异。研究结果显示,Cd急性诱导中华稻蝗5个Ocs HSPs基因在精巢和卵巢的表达模式不同,其表达量与Cd浓度和作用时间相关。

小分子热休克蛋白对缺血及衰老心肌作用的进展

小分子热休克蛋白是热休克蛋白的亚单位,它在组织中丰富的表达及广泛的保护作用逐步受到人们的关注。本文对小分子热休克蛋白的结构、其自身磷酸化对功能的影响以及在心肌细胞缺血和衰老时对心肌细胞的保护作用作一综述。

水产动物小分子热休克蛋白家族研究进展

小分子热休克蛋白(Small heat shock proteins,sHSPs)是真核和原核生物细胞中蛋白质质量控制系统的关键组份之一,通过维持生物体蛋白质整体的动态稳定性而参与调控多种生理生化过程。随着对水产动物sHSPs认知的不断提高,该家族成员在水产动物响应环境胁迫和病害防御等过程中的作用逐渐受到关注。本文综述了近年来国内外水产动物sHSPs的研究成果,系统介绍了水产动物sHSPs的序列信息、分子结构特征、系统进化地位和生物学功能,为进一步的研究提供参考资料。

小分子热休克蛋白Hsp16.3参与介导结核分枝杆菌致巨噬细胞凋亡的研究进展

结核病是世界范围内亟待解决的问题之一。Hsp16.3分布于结核分枝杆菌,其可介导MTB在巨噬细胞内稳定生长,并延迟、减少巨噬细胞凋亡。该研究进展总结出在巨噬细胞凋亡过程中,Hsp16.3可通过影响LC3,miR-181a、miR-146a,TLR2与LAG3等4条可能的通路,进而减少细胞凋亡过程。此外,该研究还针对Hsp16.3提出早期分子检测、靶向药物开发、Hsp16.3疫苗研发等临床应用意见,以期为临床治疗提供帮助指导。

关于小分子热休克蛋白Hsp16.3各功能区作用的初步研究

小分子热休克蛋白Hsp16.3是一种存在于结核杆菌中的重要抗原,具有小分子热休克蛋白家族成员典型的3个功能区:N端疏水区,α-crystallin域和C端较短的非保守区.为了进一步研究其各功能区的作用,我们定义了Hsp16.3的3个功能区并在大肠杆菌中分别克隆、表达和纯化了N端区或C端区缺失的两个Hsp16.3残体蛋白.远紫外和近紫外圆二色谱分析结果显示,残体蛋白表现出与野生型蛋白相似的二级和三级结构.在九聚体野生型蛋白进行亚基重组装时,C端缺失的Hsp16.3残体蛋白能与野生型蛋白发生相互作用,形成异源寡聚体.在对野生型蛋白进行胰酶消化时,Hsp16.3的α-crystallin域对胰酶的消化具有抵抗能力.所有这些结果显示:在Hsp16.3的3个功能区中,α-crystallin域是一个相对独立和稳定的结构单元,它对该蛋白各级结构的维持十分重要.