冠心康冻干粉通过SENP1/STAT3增强小鼠骨髓源巨噬细胞胞葬作用

目的 探索冠心康对氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)诱导的骨髓源巨噬细胞的小分子类泛素修饰物特异性蛋白酶1(small ubiquitin-related modifiers/sentrispecific proteases 1,SENP1)/信号传导蛋白和转录激活物(signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)分子表达及胞葬作用的影响。方法 提取小鼠骨髓来源的单核细胞,加巨噬细胞集落刺激因子,诱导成巨噬细胞,显微镜下观察F4/80荧光标记;加入ox-LDL诱导,不同剂量的冠心康(1.25μg/m L、2.5μg/m L、5μg/m L)作用后,中性红试剂盒检测细胞吞噬率,实时荧光定量PCR(quantitative Real-time PCR,q RT-PCR)、免疫印迹法(Western blotting)检测胞葬相关分子TAM酪氨酸激酶受体(TYRO3/AXL/MER receptor tyrosine kinase)、血小板反应蛋白-1 (thrombospondin 1,THBS1)、乳脂球表皮生长因子8 (milk fat globule-epidermal growth factor,MFGE8)表达及SENP1/STAT3分子蛋白表达。结果 (1)骨髓源巨噬细胞的纯度约为99%;(2)与对照组比较,ox-LDL诱导的骨髓源巨噬细胞组细胞吞噬率显著降低(P <0.05);与模型组比较,冠心康显著上调细胞吞噬率(P <0.05);(3)与对照组比较,ox-LDL诱导的骨髓源巨噬细胞组胞葬相关分子、SENP1、p-STAT3表达降低(P <0.05);与模型组比较,冠心康显著上调这些分子的表达(P <0.05)。结论 冠心康通过上调SENP1/STAT3分子表达,增强骨髓源巨噬细胞的胞葬作用。

SENP1和P53在胃癌中的表达及其意义

目的:探讨胃癌组织中类泛素特异性蛋白酶1(sentrin-specific protease 1,SENP1)的表达与临床病理的关系,以及与P53表达间的相互关系。方法:采用免疫组化染色EnVision方法,以SENP1抗体和P53抗体检测胃癌及胃良性病变(胃炎、胃溃疡)中SENP1和P53蛋白的表达,对表达结果进行相关分析。结果:SENP1蛋白在胃癌组中的阳性率为75.0%(75/100),胃良性病变组中的阳性率为36.0%(18/50);两组具有统计学差异(P<0.001);SENP1的表达与胃癌的肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移和临床TNM分期有关。P53蛋白在胃癌组中的阳性率为69.0%(69/100);胃良性病变组中的阳性率为22.0%(11/50);两组具有统计学差异(P<0.001);P53表达与病人年龄、胃癌淋巴结转移和临床TNM分期有关。SENP1蛋白与P53蛋白的表达呈正相关(r=0.211,P<0.05)。结论:SENP1和P53在胃癌组织中过度表达,与胃癌的发生、发展有关。

SUMO在恶性肿瘤中的表达及其分子机制

小泛素样修饰物(SUMO)是新近发现的与泛素相似的一种修饰蛋白,其参与的SUMO化修饰是一种动态可逆的蛋白质翻译后修饰,SUMO可通过共价结合不同的底物蛋白,参与调节蛋白质稳定、亚细胞定位、基因转录调控、信号转导及促进蛋白酶体降解等。SUMO化修饰在结肠癌、乳腺癌、前列腺癌等恶性肿瘤的发生、发展以及转移中扮演重要角色,但SUMO在恶性肿瘤发生发展过程中的分子机制及作用尚未完全明确。因此,深入探究SUMO化在各类癌症进程中发挥的作用,将为恶性肿瘤的诊治及预防提供新方法。

SENP1参与慢性间歇低氧小胶质细胞极化及神经元损伤机制的研究进展

慢性间歇低氧(CIH)诱导的中枢神经系统(CNS)炎症反应是阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)神经认知功能障碍最重要的病理机制之一。小胶质细胞是维持CNS内环境稳定最重要的免疫反应细胞,不同的极化状态对神经元细胞产生损害或保护作用,准确调控小胶质细胞极化状态是控制炎症反应的关键,有助于维持神经认知功能正常。小类泛素相关修饰物(SUMO)修饰广泛参与机体蛋白翻译后修饰,SUMO特异性蛋白酶1是一种关键的去SUMO化蛋白酶,两者可能参与小胶质细胞极化状态、CNS炎症反应及神经元损伤或凋亡的调控。因此,深入了解CIH小胶质细胞极化及炎症反应机制,能为防治OSAHS神经认知功能障碍提供新思路。

SUMO化修饰与前列腺癌的关系

前列腺癌是男性常见的恶性肿瘤,发病年龄多在50岁以上,通常与雄激素和/或雄激素受体的过表达密切相关。小泛素样修饰物(small ubiquitin-like modifier,SUMO)是一种蛋白翻译后修饰,有显著的致癌作用。最近研究发现,SUMO化修饰可以通过影响雄激素受体的表达与活性参与前列腺癌的发生发展,并且SUMO特异性蛋白酶-1可作为潜在的治疗靶标。本文介绍SUMO化,以及回顾SUMO化在前列腺癌中的作用。

新型重组Ulp1的制备工艺研究

类泛素特异性蛋白酶1(Ulp1)是从融合蛋白中移除小分子泛素相关修饰物蛋白(SUMO)标签工艺中的重要工具蛋白酶,在重组多肽和蛋白生产制备中具有广泛应用。Ulp1蛋白易聚集的特性给下游分离纯化工艺带来了诸多挑战。为克服这些问题,本研究设计并重组表达制备了一种S13-Ulp1融合蛋白,以提高Ulp1酶的溶解度,减少聚集,同时降低蛋白等电点,便于采用阴离子交换色谱纯化。通过对发酵、澄清等步骤的工艺参数进行优化,建立了一条发酵表达产量高、纯化工艺简便的S13-Ulp1融合蛋白制备工艺。优化后发酵产量达到了2.34g/L,下游分离纯化总收率为64%,制得的S13-Ulp1蛋白的SDS-PAGE纯度为95%。经酶切试验验证,S13-Ulp1融合蛋白具有与Ulp1相同的特异性,可高效地移除SUMO标签,获得目的多肽。

Senp2调控c-Myc对胶质瘤侵袭性影响的机制

目的探讨Senp2基因与c-Myc基因在不同等级胶质瘤中的表达情况,并进一步探讨Senp2基因对于胶质瘤侵袭性的影响。方法运用real-time PCR、蛋白质免疫印迹法(Western Blotting)等检测不同等级胶质瘤患者病理组织及正常脑组织中Senp2、c-Myc的表达;运用细胞培养和转染技术沉默U87恶性胶质瘤细胞系中Senp2基因的表达,观察细胞中c-Myc的表达情况。通过Transwell侵袭实验、流式细胞术、CCK8法等观察Senp2基因沉默后胶质瘤细胞侵袭性变化情况。结果胶质瘤级别越高的患者c-Myc基因表达水平越高,Senp2基因表达水平越低(P<0.05)。沉默Senp2基因后可见c-Myc基因表达水平明显升高(P<0.05)。通过Transwell侵袭实验,发现沉默Senp2基因的胶质瘤细胞侵袭性强于对照组。同时当沉默Senp2基因后,细胞处于S期的比例明显增加,CCK8法检测发现沉默Senp2基因后胶质瘤细胞的增殖能力明显增强(P<0.05)。结论 Senp2基因与c-Myc基因在不同等级胶质瘤中表达存在差异,胶质瘤等级越高的患者Senp2基因表达水平越低,而c-Myc基因表达水平越高。Senp2基因可影响胶质瘤细胞中c-Myc基因的表达,从而影响胶质瘤细胞的侵袭性。