小反刍兽疫病毒竞争ELISA抗体检测方法的建立

为建立一种能准确、灵敏地检测小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)抗体的ELISA方法,通过诱导BL21(DE3)-pET-30a-PPRV N表达菌种获得PPRV N蛋白,将纯化的PPRV N蛋白免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤技术获得1株能够高效表达、稳定分泌和具有较好竞争效果的抗PPRV单克隆抗体的杂交瘤细胞株(命名为1G2)。以纯化的PPRV N蛋白为包被抗原,HRP标记的1G2单克隆抗体(1G2-HRP)作为竞争抗体,建立了小反刍兽疫病毒竞争ELISA(competitive ELISA,cELISA)抗体检测方法。经优化反应条件确定最佳抗原包被浓度为1.0μg/mL,待检血清最佳稀释条件为4倍稀释,1G2-HRP酶标抗体最佳工作浓度为250 ng/mL;当阻断率(PI值)小于42%,判定为抗体阴性;阻断率大于或等于42%,判定为抗体阳性。该方法最低可检测128倍稀释的PPRV抗体阳性血清,具有较高的敏感性;仅能检测PPRV抗体,与羊源常见病原和pET-30a-BL21(DE3)的抗体阳性血清无交叉反应,具有较好的特异性;批内、批间变异系数均小于15%,具有良好的重复性。该方法与血清中和试验的阳性符合率为87.80%(95%CI:73.80,95.92),阴性符合率为94.95%(95%CI:88.61,98.34),总符合率为92.86%(95%CI:84.11,97.64),Kappa值为0.83(95%CI:53.10,112.50),具有较高的符合率。表明建立的ELISA方法在我国PPRV的流行病学调查、疫苗免疫效果评估方面具有良好的应用前景。

2020-2022年湖南省小反刍兽疫春、秋季免疫效果评估

为掌握湖南省小反刍兽疫集中免疫效果,科学评估各市州免疫质量,2020~2022年在全省开展小反刍兽疫春、秋季免疫效果评估。结果显示:2020~2022年小反刍兽疫集中免疫的群体合格率为65.3%,个体合格率为71.0%。全省各地区小反刍兽疫免疫不平衡,个体免疫率最高的可达94.4%,最低的仅为47.5%。规模场免疫效果好于散养户。调查显示,一些散养户免疫意识较弱,存在免疫操作不规范情况。需要进一步加强对散养户的宣传和指导。

羊小反刍兽疫的流行病学、临床症状和防控措施

羊小反刍兽疫是一种传染性疾病,能够通过接触进行传播,感染后的羊会出现高热、腹泻、肺炎等疾病。一般发病较急,具有较强的传染性,并且一旦发生会迅速的蔓延,是我国的一类传染病,因此一旦暴发这一类疫病,需要第一时间上报,并根据传染的程度采取科学的应对措施,控制疫病的蔓延,从源头上消灭羊小反刍兽疫病毒。所以,为了保证养殖业能够健康可持续发展,科学防控羊小反刍兽疫显得尤为重要。

2021—2023年云南临沧市小反刍兽疫病原学和免疫抗体检测分析

[目的]为全面掌握临沧市小反刍兽疫免疫效果,科学评估其感染状况。[方法]随机采集2021—2023年来自规模场和散养户的羊血清4 524份、羊眼鼻棉拭子1 000份,采用阻断ELISA方法进行小反刍兽疫抗体检测,病毒核酸荧光RT-PCR进行病原学检测。[结果]小反刍兽疫免疫抗体合格率,2022年比2021年提高了7.44百分点,2023年比2022年提高了3.11百分点,病原学未检测出小反刍兽疫病毒核酸阳性样品。[结论]临沧市以“人病兽防、关口前移”各项防控措施为抓手,小反刍兽疫的免疫效果总体较好。

小反刍兽疫的病因分析与预防

小反刍兽疫,又称羊瘟,是一种急性接触性传染病,对山羊等小反刍动物威胁最大。该病致病力强且传播快,已被世界动物卫生组织列为A类疫病,我国也将其列为一类疫病进行重点防控。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂MGCD0103对小反刍兽疫病毒体外复制的影响

旨在探究组蛋白去乙酰化酶(HDACs)选择性抑制剂MGCD0103(Mocetinostat)对小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)在山羊子宫内膜上皮细胞(EEC细胞)复制的影响。本研究通过RT-qPCR法测定PPRV感染后宿主细胞HDACs和抑制剂处理细胞中PPRV N基因的转录水平,通过Time of Addition Assay确定MGCD0103在PPRV复制过程的作用阶段,用Western blot检测PPRV N蛋白的相对表达量,并采用TCID50方法测定了病毒滴度。结果表明,PPRV感染引起EEC细胞HDAC1(P<0.001)和HDAC2(P<0.002)转录水平明显上升;MGCD0103在病毒入侵和复制阶段均发挥了抑制作用,且在复制阶段抑制作用更明显;MGCD0103显著降低PPRV N基因转录水平和表达水平及病毒滴度(P<0.002),且其抑制PPRV在EEC中的半数有效浓度(EC50)和药物选择指数(SI)分别是0.43μmol·L^(-1)和4.35。本研究确定MGCD0103显著抑制PPRV的复制,这对研发有效抗PPRV药物具有重要意义,为高效率产毒细胞株的构建提供新思路。

近年来我国西部地区小反刍兽疫病毒N、F基因的遗传演化分析

为了解近年来我国西部地区小反刍兽疫病毒(PPRV)的遗传演化情况,收集2020—2024年新疆、西藏、青海部分地区报告的5起小反刍兽疫(PPR)疫情发病动物的组织和拭子样品,利用荧光RT-PCR对PPRV进行初步检测,并对PPRV的N和F基因进行同源性比对和系统进化树绘制。结果显示:本研究检出的PPRV阳性样品均属于谱系IV型;与2014年以来国内的PPRV流行毒株以及蒙古国野生动物PPRV毒株亲缘关系较近,与除蒙古国外的其他国家流行株同源性较低;从野生岩羊和家羊中检出的PPRV阳性样品在进化树上没有显著差别。结果说明:2020—2024年我国西部地区发生的5起PPR疫情可能均与国内的流行株相关,病毒从周边国家传入的可能性较小,病毒暂未发生明显变化,家羊与野羊感染毒株具有相似的遗传来源。

宁夏贺兰山岩羊小反刍兽疫疫情来源分析

2018—2023年,宁夏贺兰山国家级自然保护区连续发现多起野生岩羊(Pseudois nayaur)不明原因死亡,通过解剖采样、实时荧光RT‑PCR检测,证实为小反刍兽疫病毒(PPRV)核酸阳性。使用Vero细胞分离出了部分毒株,采用RT‑PCR技术对宁夏地区病死家养羊和野生动物病料组织扩增PPRV F基因的全长片段。使用DNASTAR Lasergene和MEGA X软件对岩羊PPRV F基因序列进行比对和分析,构建系统发育树分析其分子遗传特征。结果显示:宁夏地区不同年度家养羊和贺兰山岩羊感染的PPRV毒株F基因同源性均在99%以上,其中2023年毒株与2018年、2019年1月毒株同源性最高,为99.8%,与2014年、2016年宁夏家养羊PPR疫情毒株及China/XJYL/2013(KM091959.1)同源性为99.6%。遗传进化分析表明,宁夏野生岩羊及家养羊PPRV同源性较高,均属于基因Ⅳ系中亚分支。因此推测宁夏及周边省份流行的PPR疫情可能通过不同途径在贺兰山野生动物种群中扩散蔓延,需加强PPR等野生动物疫源疫病监测。

湖羊小反刍兽疫母源抗体消长规律及其对羔羊首免日龄的影响

为了评估湖羊小反刍兽疫母源抗体消长情况及其对羔羊首次疫苗免疫接种效果的影响,采用商品化小反刍兽疫病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒检测健康母羊产羔当天的母羊血清中、产后不同时间初乳和乳中以及所产羔羊不同时间血清中小反刍兽疫抗体水平;并选取2批羔羊,分别于羔羊21日龄和42日龄或50日龄时,免疫接种小反刍兽疫活疫苗(Clone 9株),监测免疫后不同时间的抗体水平。结果表明:羔羊吮吸初乳后抗体迅速转阳,到49日龄抗体阳性率几乎均为100%,但抗体滴度缓慢下降;母羊乳汁中抗体阳性率5 d时接近70%,7—10 d时抗体阳性率分别为42.9%和53%;母羊生产当天的血清抗体水平与其初乳和乳中抗体水平及其所产羔羊的母源抗体水平均呈正相关(r值分别为0.866±0.128和0.933±0.058)。羔羊免疫试验表明,免疫接种后21 d内,组间的抗体水平无差异,但21—28 d时,A组(50日龄免疫组)及C组(42日龄免疫组)的抗体水平较高,显著优于21日龄免疫组(B组、D组)。湖羊母羊一次免疫接种小反刍兽疫活疫苗后,其所产羔羊母源抗体保护水平至少可维持49 d以上,且母羊生产当天的血清抗体水平与其初乳和乳中抗体水平及其所产羔羊的母源抗体水平均呈正相关;在存在母源抗体的情况下,羔羊过早免疫接种疫苗会严重干扰疫苗接种后的免疫抗体水平及持续时间,故羔羊免疫应根据母源抗体监测情况调整羔羊首免日龄,以保证免疫效果。

小反刍兽疫病毒液滴式数字PCR检测方法的建立及应用

为实现小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)的快速、准确、定量检测,以国内PPRV Clone 9疫苗株N基因为靶位点设计特异性引物及探针,建立了液滴式数字PCR(Droplet digital PCR,ddPCR)方法,并对其特异性、敏感性及重复性进行评价。将所建立的ddPCR方法与实时荧光定量PCR(Fluorescence quantitative PCR,qPCR)方法的灵敏度进行比较分析并应用于PPRV(Clone 9株)核糖核酸标准物质的定量。结果显示,所建立的ddPCR方法特异性好,仅PPRV检测结果为阳性,其他羊源病毒类生物制品及毒种检测结果均为阴性;敏感性高,基因拷贝数检出限度为4.33拷贝/μL,比qPCR方法的灵敏度(57.3拷贝/μL)高10倍;重复性好,重复性试验的变异系数为1.8%;定量准确,具有一定资质的9家单位各组测量数据组间变异系数小于5%。试验建立的ddPCR方法能够有效地对PPRV核酸进行快速检测,为PPRV的诊断及绝对定量提供了有效方法。

小反刍兽疫病毒非结构蛋白C单克隆抗体的制备与鉴定

为制备小反刍兽疫病毒(PPRV)非结构蛋白C单克隆抗体,根据PPRV C基因编码多肽链氨基酸序列抗原性分析,设计合成一条含20个氨基酸的抗原肽(CRSGKPRGETPGPLLPEIMQ)和一条含21个氨基酸的筛选抗原多肽(PLRAGERGLAPQAVQHRTLIK),将它们分别与钥孔血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin, KLH)和生物素羧基蛋白(biotin carboxyl carrier protein, Biotin)交联,制备获得免疫原和筛选抗原。用免疫原肌肉注射5只8~12周龄、体重约20 g的无特定病原体(specific pathogen free, SPF)级BALB/c雌性小鼠,第1次免疫后分别间隔7 d进行第2次免疫和第3次免疫,三免后21 d进行冲击免疫,冲击免疫后第3天采集血液分离血清,采用间接酶联免疫吸附法(ELISA)测得1只免疫小鼠血清抗体效价为1∶312 500,2只为1∶62 500。取3只小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0经聚乙二醇(PEG)融合制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA筛选出26株阳性淋巴杂交瘤细胞,进一步经克隆化培养筛选出46株单克隆细胞株。通过Western blot(WB)筛选获得2株能稳定分泌特异性抗PPRV C蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,WB、间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay, IFA)鉴定显示,制备的单克隆抗体具有较好的灵敏性和病毒反应性。研究结果为进一步阐明C蛋白在PPRV生命周期中的作用奠定了基础,也为小反刍兽疫(PPR)诊断提供了有效的诊断试剂。

小反刍兽疫LAMP反应结果可视化检测方法比较研究

环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术是一种可应用于各种病原体检测、基因分型等领域的等温扩增技术。该技术所需设备简单且易于操作,因此具有较大的发展潜力。根据目前已经存在的判定LAMP结果的可视化方法,以可能对野生小反刍动物造成威胁的小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)cDNA为检测对象,选择合适的引物组,比较评估均可在日光或紫外光下区分阴阳性结果的SYBR Green I、SYBR Safe Stain和羟基萘酚蓝(hydroxy naphthol blue,HNB)3种指示剂方法的适用性与灵敏度。结果表明:3种方法的灵敏度都很高,均与琼脂糖凝胶电泳相当。其中,SYBR Green I结果区分度高、不受体系成分影响且无须额外设备,但成本较高;SYBR Safe Stain具有良好的结果区分度,成本相对较低,但需要额外的紫外照射设备;HNB成本最低,但颜色区分度较低,且易受多种因素影响。建议在选择LAMP指示剂时,综合考虑成本、使用便利性、结果准确性及实验条件,通过充分的体系优化和验证,确保LAMP检测的准确性和可靠性。研究结果突显了不同方法的特征和适用场景,为研究人员根据不同场所与条件选择高效、便捷的LAMP反应结果可视化方法提供参考。

口蹄疫和小反刍兽疫联合免疫技术研究与示范应用

为评估羊口蹄疫和小反刍兽疫联合免疫效果,对单独免疫和联合免疫对比研究,将102只羊分成单独免疫O型-A型口蹄疫组、单独免疫小反刍兽疫组、联合免疫O型-A型口蹄疫和小反刍兽疫组,免疫后观察羊的应激反应,免疫后28 d采血检测抗体水平。结果显示,单独免疫组口蹄疫O型、口蹄疫A型和小反刍兽疫抗体合格率分别为88.2%、85.3%、88.2%,联合免疫组口蹄疫O型、口蹄疫A型和小反刍兽疫抗体合格率分别为94.1%、91.1%、91.2%,联合免疫效果优于单独免疫效果,具有安全性。为进一步验证联合免疫效果,随机选择1468只羊联合免疫O型-A型口蹄疫和小反刍兽疫。检测结果显示,O型口蹄疫、A型口蹄疫以及小反刍兽疫免疫抗体合格率均≥70%,达到农业农村部要求。结果表明,联合免疫效果优于单独免疫效果,能够降低单独多次免疫造成的应激反应风险,而且可以降低劳动强度,减少防疫成本。

西藏那曲小反刍兽疫免疫效价不达标的原因及对策

为全面了解西藏地区小反刍兽疫疫苗免疫效果,分析其效价不高的原因并提出应对措施,提高疫苗抗体效价合格率,促进西藏地区牲畜产业高质量发展。笔者通过查阅文献、实地调研、勘察走访、开展座谈会等方式,对藏区小反刍兽疫疫苗免疫情况进行调查,从中总结出经验,提出应对措施。结果发现,西藏自治区那曲市小反刍兽疫的免疫效价较低,其主要原因包括防疫工作不到位、免疫流程不合理、疫苗保存不当、强制免疫落实不到位、消毒灭源工作不到位以及养殖户认识不足等。针对以上问题,笔者提出相应的应对措施:明确病原、强化政府政策、制定合理的免疫方案、加强养殖户培训力度、加强产地检疫力度、加强消毒灭源、加大产业投入等,为今后对小反刍兽疫的防疫提供参考。

长沙市某县退出小反刍兽疫强制免疫暴发的定性风险评估

小反刍兽疫(PPR)是一种由小反刍兽疫病毒引起的疾病,主要感染山羊和绵羊。2021年为加快推进小反刍兽疫无疫区建设,实现小反刍兽疫非免疫无疫区建设标准,长沙市某县拟在本地开展小反刍兽疫退出强制免疫风险评估。通过对小反刍兽疫监测流调、危害识别、风险路径的确定和风险因素层级评估等方法进行的定性风险评估初步显示,在该地取消小反刍兽疫强制免疫后可能会发生小反刍兽疫的风险等级为中。在风险管理措施上,提出该地退出强制免疫应推迟一年,重点完善政策支持、加强监测排查、加强检疫监管、强化培训宣传等建议。

山东招远羊小反刍兽疫防控关键技术

小反刍兽疫是一类由感染小反刍兽疫病毒引发的高发传染病,隶属于副黏病毒科麻疹毒属,此病在羊群养殖过程中属于高发性传染病。一旦在羊群中发现此类疾病,病羊死亡率高达70%~100%。该文介绍了小反刍兽疫的特点、流行现状及检测技术,并针对当前山东招远地区羊小反刍疾病提出了相应的防控措施,旨在推动当地羊养殖业健康发展。

2019-2022年东营市利津县羊小反刍兽疫血清学监测

山东省东营市利津县是养羊业密集地区,而小反刍兽疫又是重要的羊传染病之一。因此,为了解和掌握小反刍兽疫病毒的分布情况和羊群免疫状况,推进东营市小反刍兽疫消灭计划,本试验对2019-2022年东营市利津县小反刍兽疫抗体阳性情况进行了监测。本次采用小反刍兽疫竞争ELISA抗体检测试剂盒与病毒核酸检测试剂盒,共检测来自1423个养殖场点的22994份样品。结果显示,2019-2022年利津县羊小反刍兽疫免疫抗体个体和场点平均合格率均在92.38%以上,超过了农业部规定的最低标准;病原学检测均为阴性。结果表明,该县羊小反刍兽疫免疫效果良好,发生疫情的风险较低,但仍需要加强对羊群的免疫管理。

渭南市羊小反刍兽疫监测与分析

为评估渭南市羊小反刍兽疫的免疫抗体水平及病毒感染状况,对2019-2022年在渭南市采集的2 499份血清学样品和606份病原学样品,分别采用阻断ELISA方法和荧光RT-PCR方法进行免疫抗体检测和病毒核酸检测。结果显示,小反刍兽疫免疫抗体个体合格率为88.24%,区域场群合格率为91.99%,不同区域免疫抗体水平合格率均高于农业农村部的免疫要求(≥70%)。分类统计不同年份和不同场点类型的免疫抗体合格率均达到国家免疫效果评估要求。病原学样品病毒核酸均为阴性。结果表明渭南市小反刍兽疫防控效果较好,但仍需持续做好小反刍兽疫的强制免疫及监测,确保养殖安全。

山羊口蹄疫、小反刍兽疫疫苗不同免疫剂量同步分点注射免疫效果比较

为探究一种适合基层同时开展山羊口蹄疫(FMD)和小反刍兽疫(PPR)疫苗免疫的方法和剂量,选取64只山羊随机分为4组,即常规免疫组(对照组)以及1.0、1.2和1.5头份剂量组(试验组),开展FMD和PPR疫苗常规免疫和不同免疫剂量同步分点注射免疫的效果比较。结果显示:使用上述两种疫苗,采用常规免疫和一次性分点同步注射免疫的方法,以不同免疫剂量同步分点注射接种后,被免疫山羊未出现免疫应激反应;以不同免疫剂量接种后14、28、42、56、70、100和160 d,各组山羊FMD O型、A型以及PPR免疫抗体阳性率差异均无统计学意义(P>0.05)。在接种后14 d,1.2头份剂量组FMD O型免疫抗体阳性率高于1.0和1.5头份剂量组;在接种后100 d,1.5头份剂量组FMD O型免疫抗体阳性率高于其余两剂量组;接种后14 d,对照组山羊FMD A型免疫抗体阳性率为87.5%,其余各组均可达到100%,并维持至接种后100 d。各组山羊PPR抗体阳性率均在接种后14 d达到100%,并持续保持至接种后160 d。结果表明:在试验免疫剂量范围内可开展山羊FMD和PPR疫苗一次性分点同步免疫接种工作,FMD疫苗最佳免疫注射剂量为1.2头份,PPR疫苗为1.0头份,在接种14 d后开展免疫效果监测较好。本研究为基层动物防疫员高效、便利开展山羊FMD和PPR疫苗免疫工作提供了参考。

小反刍兽疫的诊断及防控

小反刍兽疫(PPR)是一种发热性、急性、高度接触性动物疫病,为一类动物疫病。PPR在国际上被规定为A类动物传染病。该病的由小反刍兽疫病毒(PPRV)感染引发。PPR由国外传入我国,并在我国众多省份流行,并频繁暴发。该病死亡率高,对羊养殖业危害极大,给我国养羊业造成了巨大的损失。因此,做好该病的诊断、预防和控制对于该病的防控意义重大。