小反刍兽疫病毒竞争ELISA抗体检测方法的建立

为建立一种能准确、灵敏地检测小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)抗体的ELISA方法,通过诱导BL21(DE3)-pET-30a-PPRV N表达菌种获得PPRV N蛋白,将纯化的PPRV N蛋白免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤技术获得1株能够高效表达、稳定分泌和具有较好竞争效果的抗PPRV单克隆抗体的杂交瘤细胞株(命名为1G2)。以纯化的PPRV N蛋白为包被抗原,HRP标记的1G2单克隆抗体(1G2-HRP)作为竞争抗体,建立了小反刍兽疫病毒竞争ELISA(competitive ELISA,cELISA)抗体检测方法。经优化反应条件确定最佳抗原包被浓度为1.0μg/mL,待检血清最佳稀释条件为4倍稀释,1G2-HRP酶标抗体最佳工作浓度为250 ng/mL;当阻断率(PI值)小于42%,判定为抗体阴性;阻断率大于或等于42%,判定为抗体阳性。该方法最低可检测128倍稀释的PPRV抗体阳性血清,具有较高的敏感性;仅能检测PPRV抗体,与羊源常见病原和pET-30a-BL21(DE3)的抗体阳性血清无交叉反应,具有较好的特异性;批内、批间变异系数均小于15%,具有良好的重复性。该方法与血清中和试验的阳性符合率为87.80%(95%CI:73.80,95.92),阴性符合率为94.95%(95%CI:88.61,98.34),总符合率为92.86%(95%CI:84.11,97.64),Kappa值为0.83(95%CI:53.10,112.50),具有较高的符合率。表明建立的ELISA方法在我国PPRV的流行病学调查、疫苗免疫效果评估方面具有良好的应用前景。

2021—2023年云南临沧市小反刍兽疫病原学和免疫抗体检测分析

[目的]为全面掌握临沧市小反刍兽疫免疫效果,科学评估其感染状况。[方法]随机采集2021—2023年来自规模场和散养户的羊血清4 524份、羊眼鼻棉拭子1 000份,采用阻断ELISA方法进行小反刍兽疫抗体检测,病毒核酸荧光RT-PCR进行病原学检测。[结果]小反刍兽疫免疫抗体合格率,2022年比2021年提高了7.44百分点,2023年比2022年提高了3.11百分点,病原学未检测出小反刍兽疫病毒核酸阳性样品。[结论]临沧市以“人病兽防、关口前移”各项防控措施为抓手,小反刍兽疫的免疫效果总体较好。

羊小反刍兽疫的流行病学、临床症状和防控措施

羊小反刍兽疫是一种传染性疾病,能够通过接触进行传播,感染后的羊会出现高热、腹泻、肺炎等疾病。一般发病较急,具有较强的传染性,并且一旦发生会迅速的蔓延,是我国的一类传染病,因此一旦暴发这一类疫病,需要第一时间上报,并根据传染的程度采取科学的应对措施,控制疫病的蔓延,从源头上消灭羊小反刍兽疫病毒。所以,为了保证养殖业能够健康可持续发展,科学防控羊小反刍兽疫显得尤为重要。

羊小反刍兽疫诊断及防治措施

羊小反刍兽疫是由于羊感染小反刍兽疫病毒引起的一种传染性强、传播速度快的传染疾病,又称为羊瘟,在2007年首次传入我国。羊小反刍兽疫若发病,短时间内即可导致整个羊群发生高热、腹泻和肺炎等症状,会严重危害羊的身体健康,造成经济损失,目前没有特别有效的治疗措施,所以应做好预防措施。

湖羊小反刍兽疫母源抗体消长规律及其对羔羊首免日龄的影响

为了评估湖羊小反刍兽疫母源抗体消长情况及其对羔羊首次疫苗免疫接种效果的影响,采用商品化小反刍兽疫病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒检测健康母羊产羔当天的母羊血清中、产后不同时间初乳和乳中以及所产羔羊不同时间血清中小反刍兽疫抗体水平;并选取2批羔羊,分别于羔羊21日龄和42日龄或50日龄时,免疫接种小反刍兽疫活疫苗(Clone 9株),监测免疫后不同时间的抗体水平。结果表明:羔羊吮吸初乳后抗体迅速转阳,到49日龄抗体阳性率几乎均为100%,但抗体滴度缓慢下降;母羊乳汁中抗体阳性率5 d时接近70%,7—10 d时抗体阳性率分别为42.9%和53%;母羊生产当天的血清抗体水平与其初乳和乳中抗体水平及其所产羔羊的母源抗体水平均呈正相关(r值分别为0.866±0.128和0.933±0.058)。羔羊免疫试验表明,免疫接种后21 d内,组间的抗体水平无差异,但21—28 d时,A组(50日龄免疫组)及C组(42日龄免疫组)的抗体水平较高,显著优于21日龄免疫组(B组、D组)。湖羊母羊一次免疫接种小反刍兽疫活疫苗后,其所产羔羊母源抗体保护水平至少可维持49 d以上,且母羊生产当天的血清抗体水平与其初乳和乳中抗体水平及其所产羔羊的母源抗体水平均呈正相关;在存在母源抗体的情况下,羔羊过早免疫接种疫苗会严重干扰疫苗接种后的免疫抗体水平及持续时间,故羔羊免疫应根据母源抗体监测情况调整羔羊首免日龄,以保证免疫效果。

长沙市某县退出小反刍兽疫强制免疫暴发的定性风险评估

小反刍兽疫(PPR)是一种由小反刍兽疫病毒引起的疾病,主要感染山羊和绵羊。2021年为加快推进小反刍兽疫无疫区建设,实现小反刍兽疫非免疫无疫区建设标准,长沙市某县拟在本地开展小反刍兽疫退出强制免疫风险评估。通过对小反刍兽疫监测流调、危害识别、风险路径的确定和风险因素层级评估等方法进行的定性风险评估初步显示,在该地取消小反刍兽疫强制免疫后可能会发生小反刍兽疫的风险等级为中。在风险管理措施上,提出该地退出强制免疫应推迟一年,重点完善政策支持、加强监测排查、加强检疫监管、强化培训宣传等建议。

山羊口蹄疫、小反刍兽疫疫苗不同免疫剂量同步分点注射免疫效果比较

为探究一种适合基层同时开展山羊口蹄疫(FMD)和小反刍兽疫(PPR)疫苗免疫的方法和剂量,选取64只山羊随机分为4组,即常规免疫组(对照组)以及1.0、1.2和1.5头份剂量组(试验组),开展FMD和PPR疫苗常规免疫和不同免疫剂量同步分点注射免疫的效果比较。结果显示:使用上述两种疫苗,采用常规免疫和一次性分点同步注射免疫的方法,以不同免疫剂量同步分点注射接种后,被免疫山羊未出现免疫应激反应;以不同免疫剂量接种后14、28、42、56、70、100和160 d,各组山羊FMD O型、A型以及PPR免疫抗体阳性率差异均无统计学意义(P>0.05)。在接种后14 d,1.2头份剂量组FMD O型免疫抗体阳性率高于1.0和1.5头份剂量组;在接种后100 d,1.5头份剂量组FMD O型免疫抗体阳性率高于其余两剂量组;接种后14 d,对照组山羊FMD A型免疫抗体阳性率为87.5%,其余各组均可达到100%,并维持至接种后100 d。各组山羊PPR抗体阳性率均在接种后14 d达到100%,并持续保持至接种后160 d。结果表明:在试验免疫剂量范围内可开展山羊FMD和PPR疫苗一次性分点同步免疫接种工作,FMD疫苗最佳免疫注射剂量为1.2头份,PPR疫苗为1.0头份,在接种14 d后开展免疫效果监测较好。本研究为基层动物防疫员高效、便利开展山羊FMD和PPR疫苗免疫工作提供了参考。

2018—2022年云南省新平县小反刍兽疫抗体监测分析

为了解新平县小反刍兽疫(PPR)的免疫效果,科学防控小反刍兽疫。采用多阶段抽样方法,2018—2022年,共采集免疫山羊血清样品2046份,利用抗体阻断ELISA检测方法,进行小反刍兽疫免疫抗体检测与分析。结果显示:小反刍兽疫平均抗体阳性率80.89%(1655/2046);其中:规模场个体免疫阳性率84.72%(981/1158),散养户个体免疫阳性率75.90%(674/888);公羊免疫抗体阳性率84.39%(1043/1236),母羊免疫抗体阳性率75.56%(612/810);“小反刍兽疫弱毒活疫苗(Clone9株)”免疫抗体阳性率80.95%(799/987);“小反刍兽疫—山羊痘二联活疫苗”免疫抗体阳性率80.83%(856/1059)。结果表明:规模场个体免疫阳性率高于散养户,差异显著(P<0.05);公羊抗体阳性率高于母羊,差异显著(P<0.05);小反刍兽疫弱毒(Clone9株)单苗和二联活苗抗体阳性率差异不显著(P>0.05)。

山东招远羊小反刍兽疫防控关键技术

小反刍兽疫是一类由感染小反刍兽疫病毒引发的高发传染病,隶属于副黏病毒科麻疹毒属,此病在羊群养殖过程中属于高发性传染病。一旦在羊群中发现此类疾病,病羊死亡率高达70%~100%。该文介绍了小反刍兽疫的特点、流行现状及检测技术,并针对当前山东招远地区羊小反刍疾病提出了相应的防控措施,旨在推动当地羊养殖业健康发展。

小反刍兽疫活疫苗的制备工艺及其质量控制

本文详细探讨了小反刍兽疫活疫苗的制备工艺及质量控制。包括病毒的选择、培养、减毒,以及疫苗提取、纯化和配方调整。特别强调了疫苗稳定性测试和保存条件的重要性。在质量控制方面,论述了生产环境、原材料质量监控,生产工艺的监控,及成品疫苗的安全性、有效性和纯度评估。通过这些严格的步骤和措施共同确保了疫苗的高效性和安全性,对于防控小反刍动物疫病具有重要意义。

小反刍兽疫流行病学及防控措施研究

小反刍兽疫病主要是产生于羊群以及一些小反刍类野生动物中的病毒性接触性传染病,尤其是山羊和绵羊是产生此类疾病的高危兽群。这种疫病能够导致羊群大范围染病,而且死亡率比较高,严重危害畜牧产业的安全,长远发展,为我国畜牧养殖业造成严重的经济损失。而且目前小反刍兽疫患病范围还在逐步扩大,有关人员需要加强对此类疾病的控制和预防。通过科学的诊断,及早发现小反刍兽疫病的源头,从而进行针对性的控制。本文主要介绍小反刍兽疫,并且提出一些预防控制措施,有效预防此病带来的危害。

青海岩羊源小反刍兽疫病毒N、F基因的遗传进化分析

2021年1月19日,青海省海西州都兰县巴隆乡伊克高里村发生岩羊不明原因的死亡,表现为离群独处、卧地不起、体质虚弱、觅食困难、肛门周围黑色附着物等现象。通过临床症状、病理学解剖及实时荧光RT-PCR诊断,为小反刍兽疫病毒(PPRV)感染。采用RT-PCR技术从病死岩羊病料组织中扩增出了PPRV N、F基因的部分片段。采用MegAlig、NT1和MEGA6.0软件对岩羊PPRV株N、F基因序列进行了比对和分析,绘制系统进化树,结果显示:此次岩羊感染的PPRV株N、F基因片段与新疆株(China/Xinjiang/2015/16)序列片段的同源性分别为99.43%和99.73%。遗传进化分析,该病原属于基因Ⅳ系。在N、F基因核酸序列水平上,与国内新疆地区分离毒株亲缘关系最近,同在一个小的分支;与国外毒株相比,N基因与塞内加尔和尼日利亚分离毒株亲缘关系较远,F基因与国外分离毒株亲缘关系较远。综上所述,青海岩羊源PPRV株属于基因Ⅳ系,与当前我国流行的野毒株属于同一个谱系。

双抗体阻断ELISA检测小反刍兽疫病毒抗体的方法建立

小反刍兽疫病毒(PPRV)的N蛋白是血液中此病毒抗体的主要靶蛋白,本研究克隆并表达N蛋白,将纯化后的N蛋白免疫新西兰大白兔来制备多克隆抗体,采用饱和硫酸铵沉淀法收集多克隆抗体,再用辣根过氧化物酶标记此抗体。用纯化的N蛋白包被96孔板,酶结合物多克隆抗体作为检测抗体,建立了检测小反刍兽疫病毒双抗体阻断ELISA方法,经过反复优化,N蛋白的最佳包被浓度为3.0μg/m L,酶结合物抗体的最佳稀释比例为1∶800,利用本研究确定的方法对200份血清样本进行检测,符合率为95%(169/200),本研究确定的方法可用于检测血清中PPRV的抗体水平,为今后小反刍兽疫的防控和疫苗效果的检测提供基础。

小反刍兽疫根除战略及现状分析

小反刍兽疫是由小反刍兽疫病毒引起的急性、烈性、高度传染性疾病,是WOAH法定报告动物疫病,对全球的畜牧业造成了严重的损失。为此,2015年FAO和WOAH联合制定了小反刍兽疫全球控制与根除战略。通过对小反刍兽疫全球控制与根除战略的内容和可行性进行解读,并对我国小反刍兽疫防控情况进行分析,为我国小反刍兽疫的控制与根除提供参考。

湖南省强制免疫退出后小反刍兽疫发生风险评估

为进一步推进湖南省小反刍兽疫(PPR)消灭工作,通过数据收集、抽样监测、问卷调查等方式,了解近年来全省PPR疫情情况,山羊养殖、调运、监测情况以及养殖户对PPR的知晓率等,并从传入评估、暴露评估、后果评估3个方面,对全省强制免疫退出后的PPR发生风险进行评估。调查结果显示:湖南省调入活羊90%以上用于屠宰,主要调入地区PPR免疫抗体水平较高;湖南省养殖场户对PPR的知晓率较高,发生疫情后及时报告率达92.5%,退出强制免疫后自主免疫意愿率为62.3%。专项监测结果显示:全省PPR个体免疫合格率为66.36%,群体合格率为61.35%;病原个体阳性率为0.01%,群体阳性率为0.07%。风险评估认为,湖南省在退出PPR强制免疫后,PPR传入风险和暴露风险等级分别为中和低,后果评估等级为很低。因此,湖南省退出强制免疫后,发生PPR的风险很低,后果不严重,已具备全省实施PPR强制免疫退出政策的基础和条件。建议退出后,继续通过强化产业升级、监测排查、流通监管、宣传培训、应急管理等措施,尽快实现全省消灭PPR的目标。

小反刍兽疫疫苗研究进展

小反刍兽疫是山羊、绵羊等小型反刍动物的一种急性、高度接触性病毒病,病原为副黏病毒科麻疹病毒属的小反刍兽疫病毒。小反刍兽疫病毒可通过粪口途径和气溶胶进行传播,可导致病羊出现高热、口腔糜烂、眼鼻分泌物增多等临床症状,羊群中该病的发病率和病死率极高,对羊养殖业以及食品安全可造成严重的危害。在小反刍兽疫的防控中,疫苗接种是重要的防控措施之一,对于该病的防控和净化工作具有重要意义。本文对小反刍兽疫的病原学、致病机制等进行综述,重点总结了当前小反刍兽疫疫苗的研究进展,希望为小反刍兽疫疫苗新型疫苗和防控措施的研制提供参考。

小反刍兽疫的防控

小反刍兽疫是一种严重影响畜牧业的传染病,给全球养羊业带来了重大威胁。本文介绍了小反刍兽疫的流行特征,包括病原学、流行病学特征以及诊断技术的发展。重点探讨了疫苗研发在防控中的关键作用,包括疫苗的类型、免疫效果和安全性评估。同时,强调了加强养殖场生物安全措施、疫情监测与预警系统的重要性,并介绍了应急响应和扑灭措施的实施。此外,还讨论了国际和地区间防控合作的重要性。通过综合防控措施的不断研究与改进,将为有效控制小反刍兽疫的传播和暴发提供更坚实的基础。

小反刍兽疫病毒H蛋白抗体化学发光免疫分析检测方法的建立

本研究旨在建立小反刍兽疫病毒H蛋白抗体的化学发光免疫分析检测方法。以H蛋白4个反应原性较好的B细胞表位串联后为检测抗原,在确定抗原包被量和血清稀释度,优化血清和酶标二抗反应时间的基础上,用ROC曲线分析确定检测临界值,建立了小反刍兽疫病毒H蛋白抗体化学发光免疫分析检测方法,然后对该方法进行敏感性、特异性和重复性评价。结果显示,建立的小反刍兽疫病毒H蛋白抗体化学发光免疫分析检测方法最佳抗原包被浓度为1.5×10^(-6)μg/孔,待检血清最佳稀释度为1∶100;血清及酶标二抗孵育时间均为10 min,检测方法的临界值为S/P=9.77%,批内及批间变异系数均小于10%;与口蹄疫、羊痘、蓝舌病及山羊传染性胸膜肺炎阳性血清不发生交叉反应;用建立的化学发光法和市售小反刍兽疫抗体cELISA试剂盒平行检测247份田间血清,两者相对符合率为94.33%,但化学发光法敏感性更高。研究结果表明,建立的小反刍兽疫病毒H蛋白抗体化学发光免疫分析方法灵敏、特异、稳定,可用于田间血清样品小反刍兽疫抗体检测。

异绿原酸A体外抗小反刍兽疫病毒活性及其作用机制研究

【目的】研究异绿原酸A(isochlorogenic acid A,IAA)体外抗小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminant virus,PPRV)的效果及其作用机制。【方法】采用MTT法测定IAA对非洲绿猴肾细胞(verda reno,Vero)的最大无毒质量浓度、半数细胞毒性质量浓度(50%cytotoxic mass concentration,CC_(50));空斑形成试验测定IAA的半数有效质量浓度(median effect mass concentration,EC_(50))并计算治疗指数(therapeutic index,TI);MTT法观察IAA对PPRV感染的Vero细胞活性的影响;采用空斑形成试验、实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)、免疫印迹试验和间接免疫荧光试验观察IAA对PPRV增殖和分布的影响;采用活性氧(reactive oxygen species,ROS)荧光探针、硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid,TBA)比色法和羟胺比色法分别检测IAA对PPRV感染细胞内ROS、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性的影响;采用免疫印迹试验检测IAA对PPRV感染细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)、磷酸化AKT(p-AKT)、B细胞淋巴瘤-2蛋白(B cell lymphoma-2 protein,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)表达水平的影响。【结果】IAA对Vero细胞的最大无毒质量浓度、CC_(50)、EC_(50)分别为7.81、125.60、21.02 mg·L^(-1),TI值为5.98;IAA处理能显著抑制PPRV诱导的细胞病变及病毒在Vero细胞中的增殖;细胞活力显著高于病毒感染细胞;病毒噬斑形成数量、病毒F和N基因表达水平显著降低;宿主细胞胞浆内病毒分布显著减少。IAA能显著提高PPRV感染细胞SOD活性,清除病毒感染细胞内的ROS和MDA。经IAA处理的PPRV感染细胞中PI3K、AKT表达水平极显著提高,p-AKT表达水平显著降低,Bax/Bcl-2比值显著降低。【结论】IAA通过调节宿主细胞PI3K/AKT通路及其下游细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达水平来缓解PPRV感染引起的氧化应激反应,从而发挥其抗PPRV活性。

羊小反刍兽疫防控关键技术研究进展

小反刍兽疫是一种由副黏病毒科麻疹病毒属的小反刍兽疫病毒感染引起的传染病,该病主要在羊群中传播,该病一旦在羊群暴发,病死率可高达50%~100%,因此又称为羊瘟。当前,在我国周边的阿富汗、印度、巴基斯坦等国家,小反刍兽疫常呈流行性发生,国内的新疆等地是易发生该病的地区,该病的发生和流行给各个发展中国家的养羊业带来了严重的经济损失。论文主要介绍了小反刍兽疫的检测方法和疫苗研究进展,重点介绍了疫苗在小反刍兽疫防控中的重要性以及疫苗免疫程序的制定,以期为羊场小反刍兽疫的净化提供参考。