猪链球菌2型在小型猪模型体内的动态分布

实验采用SPF小型猪建立猪链球菌2型的动物模型,将14头SPF小型猪随机分为实验组和对照组,实验组肌肉注射2 mL的1×109 CFU.mL-1菌液,对照组注射2 mL无菌培养基。攻毒后利用细菌培养和PCR技术定期检测体内血液和组织中的细菌动态分布情况。实验发现SS2侵入血液的速度很快;扁桃体是该菌的定植器官,SS2对肝脏、肾脏等实质器官的黏附性无明显差异;只有出现神经症状及死亡仔猪,才能从脑组织中分离到SS2,说明细菌突破血脑屏障,进入大脑可能是引发脑膜炎的前提。试验为研究该病的致病机理提供了依据。

通过集成CRISPR/Cas9、受精卵注射和核移植技术快速高效制备胰腺缺陷小型猪模型

小型猪在体型大小,生理特点上与人类具有的很大的相似性,因此愈来愈多的应用于人类疾病模型及再生医学相关模型.多能性细胞的分化潜能赋予了其器官再生的能力,继大小鼠器官异种再造后人类器官在猪模型中的制备已经成为近几年的研究热点.为了得到胰腺缺陷小型猪,本研究应用CRISPR/Cas9技术,受精卵胞质注射技术联合核移植技术快速高效地获得了基因型相同的胰腺缺陷的小型猪模型,为小型猪疾病模型的制备,人类器官异体再造提供了借鉴意义.

改良肛门括约肌折叠术在小型猪肛门失禁模型中的应用及意义

目的探讨改良肛门括约肌折叠术在小型猪肛门失禁模型中的治疗效果及意义。方法选用20只4~5月龄健康巴马小型猪,采用随机数字表法分为括约肌离断组和骶神经损伤组,每组10只。分别构建括约肌离断所致的小型猪肛门失禁模型及骶神经损伤所致的小型猪肛门失禁模型,两组均采用改良肛门括约肌折叠术进行外科手术治疗,术后正常饲养4周。比较两组小型猪模型术后第1、2、3、7天及术后2周的排便频次和大便控制情况,监测记录手术前后肛管静息压。术后4周取肛门括约肌进行组织形态学观察,对两组小型猪模型的术前术后血液指标(白细胞计数、红细胞计数、血小板计数、C-反应蛋白)水平进行检测。结果括约肌离断组通过改良肛门括约肌折叠术治疗后,术后第1天无变化,术后第2、3、7天、2周排便次数及自控大便情况较术前明显好转(P<0.05),术后排便次数明显减少,能够自行控制排便;肛管静息压(26.25±4.01)mmHg较术前(15.35±2.38)mmHg明显升高(P<0.05);术后4周后括约肌组织形态学与正常括约肌的形态学基本接近;术后第1~3天仅白细胞计数、C-反应蛋白水平与术前比较,差异有统计学意义(P<0.05),术后第7天白细胞计数、红细胞计数、血小板计数、C-反应蛋白水平与术前比较,差异无统计学意义(P>0.05)。骶神经损伤组通过改良肛门括约肌折叠术治疗后,术后第1、2、3、7天、2周排便次数及自控大便情况均较术前无明显改变(P>0.05);肛管静息压(16.83±3.18)mmHg与术前(11.26±3.43)mmHg比较明显升高(P<0.05);术后4周括约肌形态学与正常括约肌的形态学差异较大;术后第1~3天白细胞计数、C-反应蛋白水平与术前比较,差异有统计学意义(P<0.05),术后第7天白细胞计数、红细胞计数、血小板计数与术前比较,差异无统计学意义(P>0.05);C-反应蛋白水平与术前比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论改良肛门括约肌折叠术对括约肌损伤造成的肛门失禁效果明显,对骶神经损伤造成的肛门失禁效果不佳,对治疗肛门失禁具有指导意义,为其提供了实验依据。

中国小型猪冠心病模型的蛋白质组学研究

目的：建立中国小型猪冠心病模型，研究该模型中心肌组织蛋白表达谱的改变情况。方法：采用冠状动脉球囊拉伤结合高脂饲料喂养建立中国小型猪冠心病模型，应用双向凝胶电泳、图谱分析软件、基质辅助激光解析-飞行时间质谱等蛋白质组学技术，对该模型动物的心肌组织总蛋白进行提取、双向电泳分离、差异比较、

小型猪腹壁拉链模型动物的麻醉效果观测

目的研究速眠新Ⅱ和戊巴比妥钠联合麻醉法对小型猪腹壁拉链模型动物的麻醉效果,探讨小型猪腹壁拉链模型动物安全、可靠的麻醉方法。方法采用速眠新Ⅱ(0.1 ml/kg)肌内注射和3%戊巴比妥钠生理盐水溶液(0.2 ml/kg)静脉注射联合麻醉法对12只小型猪腹壁拉链模型动物进行麻醉,观察动物的基础生理指标、生物反射指标、镇静、镇痛和肌松效果以及麻醉维持时间。结果静脉注射麻醉后15 min内,所有小型猪腹壁拉链模型动物的眼睑反射、角膜反射和肛门反射均消失,进入良好的镇静、镇痛和肌松状态,并持续至75 min;诱导期为(6.22±0.84)min,麻醉期为(79.9±3.6)min,苏醒期为(66.1±3.7)min,提供了长达80 min的良好麻醉时间。结论肌内注射速眠新Ⅱ和静脉注射戊巴比妥钠联合麻醉法应用于小型猪腹壁拉链模型动物的麻醉,具有操作简便、镇静、镇痛、肌松效果好、用药量小、安全可靠等优点,是一种较为理想的麻醉方法。

高脂高糖高胆固醇饮食对小型猪肾脏细胞外基质表达的影响

为研究高脂高糖高胆固醇(HFSCD)诱导的2型糖尿病小型猪肾脏细胞外基质(ECM)的表达情况,将10头广西巴马小型猪分别喂正常和HFSCD饲料,收集血、尿液,测定其生化指标,进行口服葡萄糖耐量试验。5个月后取部分肾组织,行H.E和Masson染色,免疫组织化学方法检测ECM相关蛋白的表达。结果表明,喂养HFSCD后,小型猪血糖、血脂和胰岛素明显升高,出现胰岛素抵抗和β细胞功能紊乱;尿糖和微量白蛋白升高;肾脏纤维连接蛋白(FN)和Ⅳ型胶原的表达明显增加,而Ⅰ型胶原无表达。这说明HFSCD喂养广西巴马小型猪5个月能成功建立早期糖尿病肾病模型,促进FN和Ⅳ型胶原的表达。

不同来源猪皮与重建人类表皮模型对面膜中咖啡因透过性比较研究

目的探索评估面膜中咖啡因经皮透过性最适合的皮肤模型。方法采用两种离体小型猪皮肤(巴马小型猪和小型家猪)和重建人类表皮为皮肤模型材料,应用Franz扩散池法测定4个处方面膜(面膜1不加渗透剂,面膜2、3和4促渗剂用量分别为0.5%、1.0%和2.0%)中咖啡因的累积透过量,以HPLC法测定接收液中不同时间点咖啡因的浓度。结果面膜1中咖啡因在两种小型猪皮肤模型中120 min累积透过百分率和咖啡因在人体的实际透过率是基本一致的。面膜2中咖啡因在重建人类表皮模型中的时间-累积透过量、稳态流量(J_(SS))和渗透系数(K_(p))均显著高于两种离体小型猪皮肤模型。巴马小型猪皮肤模型对面膜2、3和4中咖啡因的时间-累积透过量具有显著区分力,但小型家猪皮肤模型对面膜3和4中咖啡因的时间-累积透过量差异无统计学意义。结论巴马小型猪皮肤是最适合于评估面膜中咖啡因皮肤透过性研究的模型。

间充质干细胞诱导糖尿病小型猪同种异体胰岛移植的免疫耐受

背景:胰岛移植为有望根治糖尿病的一种方法,而移植排斥问题阻碍了移植的开展,诱导受体对供体移植物的免疫耐受是解决同种异体移植排斥反应的关键。目的:观察骨髓间充质干细胞输注对糖尿病小型猪同种异体胰岛移植物存活时间的影响。方法:无菌条件下抽取动物骨髓,离心弃上清。取单核细胞层,洗涤后加入L-DMEM培养基,调整细胞浓度为1×109L-1。培养48h后换液去除未贴壁的细胞,依据贴壁培养法分离和扩增间充质干细胞。取第5代细胞作为移植供源,调整细胞浓度为1×1010L-1。四氧嘧啶制备糖尿病小型猪模型,随机分为骨髓细胞组和干细胞+骨髓细胞组,经肝门静脉分别植入胰岛细胞、骨髓细胞,胰岛细胞、骨髓细胞和骨髓间充质干细胞。结果与结论:骨髓间充质干细胞联合骨髓细胞输注较单纯骨髓细胞输注能显著延长同种异体小型猪胰岛移植物存活时间(P<0.05),同时受体血清胰岛素能较长时间维持较高水平。提示骨髓间充质干细胞输注能显著延长猪胰岛移植物存活时间,并促进胰岛移植物正常功能的发挥。

OSBPL2基因缺陷型巴马小型猪肥胖相关特征的分析

目的:分析氧化固醇结合样蛋白2(oxysterol binding protein-like 2,OSBPL2)基因缺陷型巴马小型猪肥胖相关的表型特征和可能机制。方法:将3月龄野生型(wild type,WT)和OSBPL2缺陷型(mutant type,MT)巴马小型猪饲喂高脂饲料(high fat diet,HFD)。喂食9个月后检测体重、皮下脂肪厚度,HE染色观察肝脏脂肪变性,电镜观察肝脏组织亚细胞结构,检测血清甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶等生化指标,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测肝脏脂肪合成分化相关基因的变化,Western blot及免疫组织化学法检测脂肪酸结合蛋白4(adipocyte fatty acid binding protein 4,FABP4)及酰基辅酶A氧化酶1(acylcoenzyme A oxidase 1,ACOX1)蛋白表达水平。结果:MT-HFD组体重、皮下脂肪厚度明显高于WT-HFD组(P<0.05);HE染色结果显示,MT-HFD组脂肪细胞显著增大(P<0.001);MT-HFD组肝脏脂肪空泡变性明显多于WT-HFD组。qRT-PCR、Western blot及免疫组织化学染色结果发现,MT-HFD组肝组织中FABP4蛋白含量明显增加,ACOX1蛋白明显减少;电镜结果显示MT-HFD组肝脏线粒体相关内质网膜长度变短。结论:OSBPL2缺陷引起巴马小型猪肥胖相关表型特征,可能与抑制脂肪酸β-氧化、影响能量代谢平衡及促进脂肪分化有关。

滚压泵在乳猪肺灌注模型建立中的应用

目的通过滚压泵建立一种操作简单的猪隔离肺持续灌注和缺血再灌注模型,并比较两种灌注方法对肺的损伤。方法12只乳猪随机分为缺血再灌注组(对照组)和持续灌注组(实验组)。分别在左、右心耳以及肺动脉插管。滚压泵将贮血器中的灌注液泵入肺动脉,灌注双肺后再通过左心耳将灌注液引流回贮血器,建立猪肺灌注模型。对照组双肺停止灌注90min后灌注30min,实验组双肺持续灌注120min,灌注流量均为80mL/kg.min。测定实验前后的肺静态顺应性以及灌注液中TNF-α、IL-6变化。测定肺组织湿干比并进行电镜观察。结果实验组肺静态顺应性(实验组6.14±1.17mL/cmH2O,对照组7.89±0.94mL/cmH2O,p=0.017)、湿干比(对照组5.18±0.97,实验组3.84±1.08,P=0.048)、TNF-α指标均优于对照组(实验组0.80±0.26ng/mL,对照组0.52±0.15ng/mL,P=0.044)(P<0.05),电镜下的肺损伤程度轻于对照组。结论通过滚压泵建立猪肺持续灌注和缺血再灌注模型具有操作简便的特点。持续性非搏动灌注较之缺血再灌注对肺的损伤更轻。

中医实热证巴马小型猪视网膜血管血氧饱和度的特征

目的 探讨中医实热证动物模型对眼底视网膜血管血氧饱和度的影响。方法 将12只雌雄各半巴马小型猪随机分为实热组和正常组,实热组给予内毒素以mg·kg^(-1)(50%的浓度)的剂量行右后腿根部外侧肌注1次,正常组不做处理,待体温升高后,运用血氧监测仪(Oxymap)对两组行视网膜眼底血管图像采集,应用配套软件分析视网膜血管血氧饱和度。结果 实热模型组造模后动静脉血氧饱和度比值(SaO2/SvO2)升高(P<0.05);实热模型组造模前后动脉血氧饱和度(SaO2)变化、动静脉血氧饱和度差值(SaO2-SvO2)变化、动静脉血氧饱和度比值(SaO2/SvO2)变化均高于正常组(P<0.05)。结论 实热状态下,巴马小型猪视网膜微循环呈现高耗氧、高代谢的特征。

OCT对无载体纳米药物洗脱支架抑制再狭窄和促进内皮化的动物观察研究

目的评价新型无聚合物涂层雷帕霉素药物洗脱支架在抑制内膜增生、降低炎性反应等方面的安全性和有效性。方法随机选择猪冠状动脉前降支、右冠状动脉或回旋支置入金属裸支架、聚合物载体雷帕霉素洗脱支架(Partner支架)和无聚合物载体雷帕霉素洗脱支架。置入后1个月和3个月行冠脉造影,光学相干断层成像和定量冠脉狭窄分析,测量新生内膜面积、面积狭窄百分比、新生内膜覆盖率等,而后处死动物,进行组织形态学检查和病理积分分析。结果置入后1个月光学相干断层成像、定量冠脉狭窄分析以及组织形态学分析提示,相比金属裸支架、Partner药物洗脱支架和无聚合物载体雷帕霉素洗脱支架明显减少新生内膜面积及管腔丢失。术后3个月,相比金属裸支架和Partner药物洗脱支架,无聚合物载体雷帕霉素洗脱支架明显减少新生内膜面积、管腔丢失。随访期间,BMS组和PFSES组炎症反应及损伤积分之间差异无显著性,但术后3个月PSES组的炎症积分显著升高。结论无聚合物载体雷帕霉素洗脱支架在小型猪模型中,炎性反应程度更轻,无支架内血栓形成,可以有效抑制新生内膜增殖,表现出良好的组织相容性。