化学合成小干扰核糖核酸抑制大鼠血管平滑肌细胞组织因子表达

目的:探讨血管壁组织因子小干扰核糖核酸(siRNA)对大鼠血管平滑肌细胞组织因子基因沉默作用的可行性和有效性。方法:设计并合成针对大鼠组织因子的25 bp双链siRNA分子。使用组织因子siRNA、对照siRNA转染大鼠血管平滑肌细胞,同时设立空白对照,实验共分6组(各组n=5)。荧光显微镜观察转染效率。血小板源性生长因子-BB刺激血管平滑肌细胞后逆转录多聚酶链反应检测组织因子信使核糖核酸表达,免疫印迹和免疫组化检测组织因子蛋白表达。结果:siRNA成功转染到血管平滑肌细胞,转染效率约(90.0±2.3)%。3对候选siRNA筛选出基因抑制效率最高一对,与阴性对照组相比,转染24 h组织因子信使核糖核酸表达减少(86.0±0.6)%,转染48 h蛋白质印迹分析组织因子蛋白表达减少(92.0±1.0)%,同时免疫组化检测组织因子表达明显减弱。结论:RNA干扰能明显下调大鼠血管平滑肌细胞组织因子表达。

干扰灵联合免疫核糖核酸治疗慢性乙肝疗效分析

采用干扰灵联合抗乙肝免疫核糖核酸治疗慢性乙肝２６例，并与１８例对照组比较。结果表明：治疗结束时，ＨＢｓＡｇ转阴率１５４％（４／２６），ＨＢｅＡｇ转阴率７７２％（１７／２２），ＨＢＶＤＮＡ转阴率５７７％（１５／２６），明显高于对照组（Ｐ＜０．０１）；随访一年１例患者ＨＢｅＡｇ、ＨＢＶＤＮＡ转阴，２例患者ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢＶＤＮＡ转阴后变阳，其有效率仍显著高于对照组（Ｐ＜０．０１）。上述结果表明：干扰灵联合抗乙肝免疫核糖核酸疗法能明显抑制ＨＢＶ复制，提高抗病毒疗效。本文并对影响抗病毒疗效的诸多因素进行了分析。

注射抗癌免疫核糖核酸病人血清中干扰素的观察

本文主要进行免疫核糖核酸(iRNA)体内诱生干拢素(IFN)动态观察。给癌症患者注射iRNA后,检测血清中IFN变化。结果可见,治疗前个体血清中IFN活性很低(10u/ml)或无。治疗后85％个体血清中可检出IFN活性,特殊个体血清中IFN活性明显增高(800U/ml)。而且IFN活性在患者血清中呈规律性增减。注射后8h血清中IFN活性开始出现,24h达高峰,40hIFN活性下降至消失。

干扰性小核糖核酸靶向抑制趋化因子受体4基因表达对鼻咽癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨干扰性小核糖核酸(siRNA)靶向抑制鼻咽癌细胞趋化因子受体4(CXCR4)基因表达对癌细胞增殖、侵袭的影响及机制。方法收集新乡医学院第一附属医院2014年1月至2016年12月保存的鼻咽癌及相应的癌旁组织标本各42例,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)和Western blot法分别检测鼻咽癌及相应的癌旁组织中CXCR4 mRNA及蛋白表达。将人鼻咽癌细胞系CNE-2Z分为空白对照组(细胞未做任何处理)、阴性对照组(细胞转染无义siRNA序列)和CXCR4转染组(细胞转染CXCR4的靶向siRNA序列),转染48 h后采用Western blot法检测各组细胞中CXCR4、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、β-连环蛋白(β-catenin)和细胞周期素D1(Cyclin D1)蛋白表达;应用细胞计数试剂盒和Transwell小室分别检测细胞的增殖和侵袭能力。结果鼻咽癌及相应的癌旁组织中CXCR4 mRNA表达分别为5.526±0.143、0.953±0.091,蛋白表达分别为0.522±0.047、0.053±0.011,鼻咽癌组织中CXCR4 mRNA及蛋白表达均显著高于癌旁组织(P<0.05)。CXCR4转染组细胞中CXCR4、MMP-2、MMP-9、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达及细胞存活率、细胞侵袭数均显著低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05),但空白对照组和阴性对照组细胞中CXCR4、MMP-2、MMP-9、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达及细胞存活率、细胞侵袭数比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞中CXCR4基因表达可显著降低肿瘤细胞的增殖与侵袭能力,其机制可能与下调Wnt/β-catenin信号通路有关。

经导管动脉栓塞术联合小干扰核糖核酸治疗肝癌疗效及对兔缺氧诱导因子-1、血管内皮生长因子的影响

目的:探讨经导管动脉内栓塞(TAE)联合小干扰RNA沉默基因治疗肝癌的疗效及对兔缺氧诱导因子-1(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法:以20只肝癌模型兔为研究对象,采用随机数字表法分为两组,每组10只,对照组采用动脉内注入PVA微粒与对比剂混悬液治疗,研究组使用动脉内灌注PVA微粒与对比剂混悬液及HIF-1α-shRNA溶液治疗,观察对肿瘤体积、肝癌组织核分裂像总数、HIF-1α蛋白和VEGF蛋白的表达以及门冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸基转移酶(ALT)水平的影响。结果:(1)治疗前两组肿瘤体积分别为(5510.2±1302.8)mm^(3)和(5475.3±1237.7)mm^(3),两组比较无统计学差异(P>0.05);治疗后两组肿瘤体积均有一定程度的增加,与治疗前比较,对照组为(8125.1±1114.3)mm^(3),差异有统计学意义(P<0.05),研究组为(6314.4±1337.6)mm^(3),差异无统计学意义(P>0.05),组间比较研究组术后肿瘤体积显著降低(P<0.05)。(2)对照组核分裂像总数为(11.12±3.28)个,研究组为(7.85±2.17)个,研究组核分裂像总数显著低于对照组(P<0.05)。(3)研究组肿瘤组织HIF-1α表达量为(1.73±0.15)pg/ml,显著低于对照组的(7.15±2.38)pg/ml(P<0.05),研究组肿瘤组织VEGF表达量为(1.51±0.64)pg/ml,显著低于对照组的(8.75±1.36)pg/ml(P<0.05)。(4)治疗前两组AST和ALT水平比较均无统计学差异(P>0.05),治疗后对照组和研究组ALT水平分别为(78.51±4.85)U/L和(43.58±4.14)U/L,均显著升高(均P<0.05),对照组和研究组AST水平分别为(71.35±4.15)U/L和(38.27±3.24)U/L,均显著升高(均P<0.05),与对照组相比,研究组术后ALT和AST水平均显著降低(均P<0.05)。结论:TAE联合siRNA干扰HIF-1α能通过降低HIF-1α和VEGF蛋白表达量抑制肝癌兔肿瘤的生长。

核糖核酸干扰(RNAi)在生物医学研究中的应用

核糖核酸干扰(RNAi)是指一个由双链RNA诱导具有相同碱基序列的靶标RNA降解的现象,它是沉默基因表达的一个十分有效的手段.RNAi导致基因沉默的机制可分为以下两步:首先由核酸酶Dicer切割长的双链RNA形成小片段碱基(19～25)的siRNA.然后,这些siRNA组成一个RNA诱导沉默复合体(RISC),并且siRNA被一个内源激酶磷酸化,双链siRNA打开,让反义RNA引导RISC至其目的信使RNA(mRNA),从而使其目的mRNA内切降解.RNAi技术可以应用到许多生命科学研究方面,如功能基因组以及医药研究.同时讨论了RNAi的一些最新进展如siRNA的设计和导入细胞的方法.

干扰灵联合核糖核酸与无环鸟苷联合胸腺肽抗乙肝病毒疗效比较

比较干扰灵联合抗乙肝免疫核糖核酸与无环鸟苷联合胸腺肽抗乙肝病毒疗效。采用ELISA和PCR法检测慢性乙肝患者治疗前、结束以及治疗后 6mon血清HBsAg、抗 -HBs、HBeAg、抗 -HBe、抗 -HBc以及HBVDNA。治疗结束时 ,干扰灵组HBsAg转阴率 2 0 % (6 /30 )、HBeAg转阴率 6 6 7% (18/2 4)、HBVDNA转阴率 6 0 % (18/30 ) ,随访 6mon 2例HBsAg、HBeAg、HBVDNA复阳、1例HBeAg、HBVDNA转阴 ;无环鸟苷组治疗结束时 ,HBsAg、HBeAg、HBVDNA转阴率分别为 6 1% (2 /33)、5 5 2 %(16 /2 9)、5 4 5 % (18/33) ,随访结束时其转阴率分别为 2 7 3% (9/33)、5 8 6 % (17/2 9)、6 0 6 % (2 0 /33)。两组治疗后及随访期末 ,HBeAg、HBVDNA转阴率均显著高于对照组 (P <0 0 1) ,但两组间比较其转阴率无明显差异 (P >0 0 5 )。两种联合疗法均能显著抑制乙肝病毒复制 ,两种联合疗法疗效基本一致 ,但无环鸟苷联合组疗程短、价廉、远期疗效好。

核糖核酸干扰技术研究进展

核糖核酸干扰技术(RNAi)是遗传工程领域近几年来取得的重大技术进展之一,其理论体系及技术规范已基本形成。RNAi是一种高效、特异性强的基因阻断技术,被誉为将在功能基因组学及遗传工程领域掀起一场真正的革命。介绍了RNAi的发现、发展历程,阐述了RNAi的作用机理及技术特点,探讨了小分子干扰RNA导入细胞的技术策略以及对RNAi进行深入研究的重大意义。

慢病毒载体介导survivin小分子干扰核糖核酸对裸鼠肺癌移植瘤的影响

目的观察慢病毒载体介导的survivin小分子干扰核糖核酸(small interfering RNA,siRNA)能否在裸鼠体内抑制肺癌移植瘤的生长。方法裸鼠随机分为3组,分别将A549细胞、无关序列及survivin siRNA慢病毒载体感染A549细胞接种于裸鼠右侧背部近腋窝皮下,观察survivin siRNA对移植瘤生长的影响。采用逆转录酶聚合酶链反应和Western blotting测定移植瘤组织survivin基因及其蛋白表达。结果成功建立人肺癌裸鼠皮下移植瘤模型。survivin siRNA组移植瘤体积及质量明显低于其他2组(P<0.01),抑瘤率为63.6%(基于体积)或58.8%(基于质量),survivin mRNA和蛋白表达分别减少53.7%、57.6%。结论慢病毒载体介导survivin siRNA可明显下调裸鼠体内survivin基因表达,抑制肺癌移植瘤的生长。

无环鸟苷联合干扰素、免疫核糖核酸治疗单纯疱疹病毒性角膜炎

单纯疱疹病毒性角膜炎(HSK).是由单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)引起的角膜感染,是当今世界上危害严重的感染性眼病之一,已占角膜病致盲的首位.HSK病情迁延,易反复发作,终使视功能受到严重损害.单独用一种抗病毒药易产生耐药性且复发率较高,大量研究已表明HSK与机体细胞免疫功能降低有关,细胞免疫在HSK的发病中发挥主要作用.我院采用无环鸟苷联合干扰素、免疫核糖核酸治疗43例HSK患者,并与对照组42例HSK患者进行了比较,现报道如下.

血清丙氨酸氨基转移酶、谷氨酰转肽酶、铁蛋白、丙型肝炎病毒核糖核酸定量对聚乙二醇干扰素抗病毒疗效的影响

目的探讨血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、谷氨酰转肽酶(GGT)、血清铁蛋白(SF)、丙型肝炎病毒核糖核酸(HCV-RNA)定量对聚乙二醇干扰素抗病毒疗效的影响。方法选取四川省自贡市第一人民医院2014年1—6月收治的慢性丙型病毒性肝炎患者51例,以ALT值达100 IU/L、GGT值达50 IU/L、SF值达400 ng/ml、HCV-RNA定量达106copies/ml为界将患者分为低ALT、GGT、SF、HCV-RNA组与高ALT、GGT、SF、HCV-RNA组,均给予聚乙二醇干扰素a-2a联合利巴韦林治疗48周,随访24周。在0周时检测血清ALT、GGT、SF、HCV-RNA,在4、12、48及72周检测HCV-RNA以判断疗效。结果聚乙二醇干扰素抗病毒治疗前低GGT、SF、HCV-RNA组较高GGT、SF、HCV-RNA组能获得更好的持续病毒应签(SVR)(P<0.05),而ALT水平与疗效无相关性(P>0.05)。结论慢性丙型病毒性肝炎患者治疗前GGT、SF、HCV-RNA水平与聚乙二醇干扰素的疗效密切相关,提示GGT、SF、HCV-RNA的水平可较准确地预测慢性丙型病毒性肝炎患者聚乙二醇干扰素抗病毒治疗的疗效。

干扰素、猪苓多糖及抗乙肝免疫核糖核酸治疗慢性乙型肝炎的近期疗效观察

在同时期对３００例慢性乙型肝炎分别以干扰素、猪苓多糖加乙肝疫苗、抗乙肝免疫核糖核酸进行治疗，疗程均为三月。三组药物均有较好的降ＡＬＴ和ＳＢ及改善白／球蛋白比例作用，干扰素、猪苓多糖及抗乙肝免疫核糖核酸的ＨＢＶ－ＤＮＡ阴转率分别为５７．５％、３８．９％、５８．４％。血清转换率分别为６５．４％、３２．７％、６２．１％。抗乙肝免疫核糖核酸治疗慢性乙型肝炎有较好的疗效，适合临床应用。

核糖核酸干扰技术沉默大鼠心肌细胞核因子-κB p65表达的研究

目的:构建核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)p65亚基特异的核糖核酸干扰腺病毒表达载体,验证其对p65亚基的沉默效应。方法:设计针对大鼠NF-κB p65亚基的不同干扰序列,通过质粒将其导入腺病毒,感染大鼠心肌细胞(H9C2)。将感染后的心肌细胞通过RT-PCR方法和Western Blot方法检测各组NF-κB p65的基因水平表达和蛋白质水平表达。结果:成功构建了NF-κB p65亚基特异的RNAi腺病毒表达载体,获得高滴度的腺病毒液;RNAi腺病毒感染H9C2细胞后可以高效抑制NF-κB p65蛋白的表达。结论:RNAi技术能有效的沉默大鼠心肌细胞NF-κB p65的表达。

干扰素联合替诺福韦治疗慢性发作乙型肝炎效果及对肝功能、乙肝病毒脱氧核糖核酸阴转率的影响

目的分析干扰素联合替诺福韦治疗急性发作乙型肝炎效果及对肝功能、乙肝病毒脱氧核糖核酸转阴率的影响。方法选取于2018年1月-2019年10月期间因慢性乙型肝炎急性发作在深圳市第三人民医院进行治疗的80例患者作为研究对象,采用随机数字表法分组,对照组单独应用替诺福韦治疗,观察组在对照组基础上加用干扰素联合治疗。对比两组临床疗效、肝功能指标、乙肝病毒脱氧核糖核酸阴转率以及用药安全性的差异。结果观察组治疗48周后,完全病毒学应答和HBeAg转阴/血清学转换率显著高于对照组(P<0.05),治疗后TBIL指标水平显著低于对照组(P<0.05);两组联合应答率对比差异无统计学意义(P>0.05),两组患者治疗3个月、6个月后HBV-DNA转阴率差异无统计学意义(P>0.05)。两组治疗后ALB、AST、ALT指标水平差异无统计学意义(P>0.05),观察组不良反应总发生率显著高于对照组(P<0.05);结论干扰素联合替诺福韦治疗慢性乙型肝炎的效果较好,在显著改善患者肝功能状况的同时提高了HBV-DNA转阴率,但联合用药可能会增加患者临床治疗风险,因此实际用药过程中需对患者临床变化密切监视。

干扰素联合抗乙肝免疫核糖核酸治疗慢性乙型肝炎疗效观察

近年我们以精制人白细胞干扰素(下称干扰素)、抗乙肝免疫核糖核酸(抗-HBiRNA)单用或联合应用治疗慢性乙型肝炎,现将结果报告如下。

小分子干扰核糖核酸脂质体对乙型肝炎病毒的药效学研究

目的利用HepG2.2.2.15细胞模型研究小分子干扰核糖核酸脂质体对乙型肝炎病毒(HBV)的抑制作用。方法在药物对细胞的最大无毒浓度下,依次设定4个浓度梯度,分别测定不同时间收集的培养液中的乙型表面抗原(HBsAg)和乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)。结果第12天时质量浓度为5μg/mL的药物对HBV的HBsAg表达的抑制率达到了63%,抑制程度随药物质量浓度的升高,或时间的增加而提高;药物质量浓度为5μg/mL时对HBV-DNA的抑制率达到了85.46%,抑制程度随着药物质量浓度的上升而提高。结论药物对HBV的HBsAg表达的抑制作用具有明显的剂量效应和时间效应,对HBV-DNA的抑制作用也有很好的剂量效应;利用基因工程手段制备的双链小分子RNA脂质体制剂具有明显抑制HBV的HBsAg表达和抑制HBV-DNA复制的作用,为利用RNA干扰技术研究开发新型抗HBV药物创造了条件。

注射用小干扰核糖核酸脂质体药效学研究

目的利用乙型肝炎病毒(HBV)转基因鼠模型,研究注射用小干扰核糖核酸(siRNA)脂质体药物的抗HBV作用。方法对M-TgHBV转基因小鼠静脉给予不同剂量的注射用siRNA脂质体药物,在给药的不同时间点采血测定乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg),在最后一天取部分鼠肝脏进行免疫组化分析。结果与给药前比较,试验药物2mg/kg组(A组)HBsAg表达水平在第9天和第12天时明显降低(P<0.05),在第15天时降低非常明显(P<0.01),试验药物1mg/kg及0.5mg/kg组(B,C组)、阳性药物(拉米夫定)组(F组)在第15天时均显著降低(P<0.05);免疫组化分析结果表明,相对于阴性对照组(G组),肝内HBsAg表达抑制率A组为48.44%,B组为36.73%。结论注射用siRNA脂质体在转基因鼠中的抗HBV作用明显。

干扰素、阿昔洛韦、免疫核糖核酸对慢性乙型肝炎病毒复制指标的阴转作用

应用干扰素治疗慢性乙型肝炎、HBeAg、抗 HBc IgM 和 HBV—DNA 阴转率均在57%以上;而应用阿昔洛韦,上述乙肝病毒复制指标阴转率分别为42%、40%和33%;应用免疫核糖核酸阴转率仅在30%左右,但都高于对照组。作者还比较了这三种药物的不良反应和其他优缺点。

人血白细胞制备α-干扰素转移因子和免疫核糖核酸的初步联产试验

报道一种利用同一批人外周血白细胞分别制备α-干扰素、转移因子和免疫核糖核酸的联产试验,可获得相同的α-干扰素产率及相应量的转移因子和免疫核糖核酸。

核糖核酸干扰在眼科的应用进展

核糖核酸干扰(RNA interference,RNAi)是由双链 RNA 介导的特异同源靶基因转录后沉默的过程,是生物进化过程中保留下来的基因表达调控机制。本文对 RNA 干扰的作用机制和在眼部新生血管性疾病、纤维增殖性疾病、氧化损伤性疾病以及细胞凋亡性疾病的应用进展作一综述。