布鲁顿酪氨酸激酶对破骨细胞增殖及分化作用的实验研究

目的观察布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)对破骨细胞增殖及分化的影响,探讨BTK对根尖周炎骨破坏的作用。方法破骨前体细胞RAW264.7经100 ng·L^-1核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导5 d后,通过观察细胞形态、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色及实时荧光定量PCR(RT-qPCR)的方法,验证破骨细胞是否诱导成功。破骨细胞诱导成功后,转染BTK-小干扰RNA(siRNA)24 h,利用RT-qPCR检测TRAP mRNA的表达,采用CCK-8和TRAP酶活性检测法检测破骨细胞的增殖及分化情况。结果RAW264.7细胞经RANKL诱导5d后,可见大量体积较大,外观呈圆形、椭圆形,周围有不规则突起及TRAP染色阳性的多核破骨细胞。经BTK-siRNA转染24 h后,破骨细胞TRAP mRNA的表达水平显著降低(P<0.05),其增殖及分化能力也明显受到抑制(P<0.05)。结论抑制BTK表达,可以抑制破骨细胞的增殖及分化;BTK可作为抑制破骨细胞的新靶点。

沉默长链非编码RNA NR_027324对低糖缺氧损伤大鼠H9C2心肌细胞凋亡的影响

目的探讨在低糖缺氧大鼠H9C2细胞中,沉默长链非编码RNA(lncRNA)NR_027324的表达对H9C2细胞凋亡的影响。方法将H9C2心肌细胞在低糖缺氧环境中培养以构建心肌缺血缺氧模型。采用转染小干扰RNA(small interfering RNA,si-RNA)技术沉默NR_027324。利用逆转录定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法测定lncRNA NR_027324的表达变化。检测乳酸脱氢酶(LDH)活性评估细胞损伤,MTT法检测细胞成活率,蛋白质免疫印迹法检测凋亡相关蛋白的相应变化。结果与对照组相比,低糖缺氧大鼠H9C2细胞中,NR_027324表达量明显上调,LDH升高,细胞成活率下降(P<0.001)。沉默NR_027324的表达后,低糖缺氧大鼠H9C2细胞中NR_027324表达量明显下调,LDH进一步升高,MTT法检测提示细胞成活率进一步下降(P<0.001)。低糖缺氧大鼠H9C2细胞中,Bax,cleaved-caspase3和cleaved-caspase9表达增加,Bcl-2表达下降(P<0.001)。沉默NR_027324的表达后,低糖缺氧大鼠H9C2细胞中Bax,cleaved-caspase3和cleaved-caspase9表达进一步增加,Bcl-2表达进一步下降(P<0.001)。结论低糖缺氧大鼠H9C2细胞中,沉默NR_027324的表达能够促进低糖缺氧H9C2细胞的凋亡,可能作为研究调控缺血缺氧心肌细胞凋亡的新靶点。