含小插入片段重组子筛选鉴定方法之探讨

基因工程中，重组ＤＮＡ时，当外源ＤＮＡ很小并与载体相差很大时，其目的重组子的筛选鉴定工作不仅量大，而且常规鉴定方法无法采用。本文针对此类重组子的鉴定方法作了探讨，提出了三级四步筛选鉴定法，即：质粒筛选、重组鉴定、目的重组鉴定和双酶切鉴定。该法不仅有效地解决了国内普通实验条件下含小插入片段重组子的鉴定问题，大大缩小鉴定范围，而且快速省耗的鉴定方法也为ｐＧＥＸ载体系统的更广泛应用提供了新的启示。

重组子小插入片段间接内切酶图谱研究

针对重组子中100bp左右的小插入片段与载体不能同时在普通琼脂糖胶上呈现而无法用内切酶图谱鉴定此类重组子的问题，提出了小插入片段间接内切酶图谱，并用普通琼脂糖凝胶电泳研究分析了此类图谱，获得了通过间接内切酶图谱的间接比较来鉴定此类重组子的实验依据，为在国内普通实验室条件下，经济有效地进行小插入片段基因重组研究提供了有益的启示和参考。