敲低核仁小RNA宿主基因6(SNHG6)抑制舌癌细胞的增殖及上皮间质转化

目的探究长链非编码RNA核仁小RNA宿主基因6 (SNHG6)在舌鳞状细胞癌组织、Tca1183舌癌细胞中的表达及对舌癌细胞生物学特性的影响。方法使用实时定量PCR检测舌鳞状细胞癌组织与正常组织、Tca1183舌癌细胞与正常舌上皮细胞中SNHG6的mRNA水平,分析舌癌临床病理指标与SNHG6表达的相关性。构建SNHG6干扰质粒并转染至Tca1183舌癌细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,集落形成实验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测舌癌细胞凋亡变化; Western blot法检测细胞上皮间质转化(EMT)相关蛋白β联蛋白(β-catenin)、上皮钙黏素(E-cadherin)、神经钙黏素(N-cadherin)和波形蛋白(vimentin)的蛋白水平。结果与正常组织和正常舌上皮细胞相比,舌癌组织以及舌癌细胞中SNHG6的mRNA水平显著升高。舌癌组织SNHG6 mRNA水平与患者年龄和性别等不相关,与组织分化差、临床分期高和淋巴结转移呈正相关。干扰SNHG6在Tca1183舌癌细胞中的表达能够抑制癌细胞增殖以及促进细胞凋亡,且可以通过促进β-catenin和E-cadherin蛋白表达以及抑制N-cadherin和vimentin蛋白表达抑制Tca1183细胞EMT。结论 SNHG6在舌癌组织中高表达,敲低舌癌细胞中SNHG6能够抑制其增殖和EMT。

核仁小分子RNA宿主基因6在乳腺癌组织中的表达情况及与患者临床特征和预后的关系

目的探讨核仁小分子RNA宿主基因6(SNHG6)在乳腺癌组织中的表达情况及与患者临床特征和预后的关系。方法收集112例接受改良根治性手术的乳腺癌患者的乳腺癌组织和正常乳腺组织,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测两种组织中SNHG6 mRNA的相对表达量,比较不同临床特征乳腺癌患者乳腺癌组织中SNHG6 mRNA的相对表达量。随访3~72个月,记录患者的总生存时间(OS),分析不同SNHG6 mRNA表达情况乳腺癌患者的生存情况。采用Cox比例风险回归模型分析乳腺癌患者预后的影响因素。结果乳腺癌组织中SNHG6 mRNA的相对表达量为(2.23±0.14),明显高于正常乳腺组织的(1.02±0.12),差异有统计学意义(P﹤0.01)。TNM分期为Ⅲ期、病理分级为Ⅲ级、雌激素受体阴性、Ki-67水平≥14%、有淋巴结转移的乳腺癌患者乳腺癌组织中SNHG6 mRNA的相对表达量分别高于TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期、病理分级为Ⅰ~Ⅱ级、雌激素受体阳性、Ki-67水平﹤14%、无淋巴结转移的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。SNHG6 mRNA低表达组患者的平均OS为(58.62±4.15)个月,长于SNHG6 mRNA高表达组患者的(41.12±2.86)个月。SNHG6 mRNA低表达组患者的累积生存率为72.4%,明显高于SNHG6 mRNA高表达组患者的38.6%,差异有统计学意义(P﹤0.05)。Cox比例风险回归分析结果显示,TNM分期、病理分级和SNHG6 mRNA相对表达量均是乳腺癌患者预后的独立危险因素(P﹤0.05)。结论SNHG6 mRNA在乳腺癌组织中表达上调,且与乳腺癌的发生、发展及不良预后有关,是影响患者预后的独立危险因素。

lncRNA SNHG6调控miR-335-3p/PDCD4途径对缺氧复氧诱导的心肌细胞损伤的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)小核RNA宿主基因6(SNHG6)对缺氧复氧诱导的心肌细胞损伤的影响。方法体外培养大鼠心肌细胞系H9C2建立缺氧复氧模型。实时定量PCR(RT-qPCR)检测SNHG6、微小RNA(miR)-335-3p表达水平。蛋白质印记法检测PDCD4蛋白表达。流式细胞术检测H9C2细胞凋亡率。分光光度法分析H9C2细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平。分别转染SNHG6小干扰RNA、miR-335-3p模拟物至H9C2细胞,观察干扰SNHG6或过表达miR-335-3p对缺氧复氧诱导的H9C2细胞损伤的影响。双荧光素酶报告实验确定SNHG6、miR-335-3p和PDCD4靶向关系。结果缺氧复氧处理显著增加SNHG6水平、PDCD4蛋白表达水平及H9C2细胞凋亡率、MDA水平(均P<0.01),降低miR-335-3p表达量及SOD活性(均P<0.01)。干扰SNHG6表达显著增加缺氧复氧处理H9C2细胞miR-335-3p表达水平及SOD活性,降低PDCD4蛋白表达水平、MDA水平及细胞凋亡率(均P<0.01)。过表达miR-335-3p显著增加缺氧复氧处理H9C2细胞SOD活性,降低PDCD4蛋白表达水平、MDA水平及细胞凋亡率(均P<0.01)。SNHG6与miR-335-3p直接结合,miR-335-3p与PDCD4直接结合。抑制miR-335-3p表达逆转了干扰SNHG6对缺氧复氧H9C2细胞凋亡和氧化应激损伤的保护作用(均P<0.01)。结论干扰lncRNA SNHG6通过靶向miR-335-3p/PDCD4途径能够减弱缺氧复氧诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激损伤。

长非编码RNA SNHG6在肿瘤中的研究进展

近年来肿瘤的分子机制得到了广泛研究,越来越多的证据表明长非编码RNA(lncRNA)通过复杂的分子信号网络广泛参与了肿瘤的发生和发展。lncRNA小核仁RNA宿主基因6(small nucleolar RNA host gene 6,SNHG6)在体内外通过多种方式调节肿瘤细胞的生物学行为,包括细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡等。本文就lncRNA SNHG6在肿瘤中的生物学功能、分子机制及潜在的肿瘤标志物进行综述。

LncRNA SNHG6在骨肉瘤患者血清中的表达及与临床病理特征的相关性

目的探讨长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因6在骨肉瘤患者血清中的表达及与临床病理特征的相关性。方法将128例疑似骨肉瘤患者以病理诊断结果分为骨肉瘤组62例与非骨肉瘤组66例,选取同期健康体检者135名设为健康组。比较3组血清长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因6相对表达量,比较骨肉瘤组癌组织细胞、癌旁组织细胞长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因6相对表达量,分析骨肉瘤患者血清长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因6表达与临床特征的相关性,分析血清长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因6对骨肉瘤的诊断价值。结果骨肉瘤组与非骨肉瘤组血清长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因6相对表达量显著高于健康组(P<0.01),骨肉瘤组血清长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因6相对表达量显著高于非骨肉瘤组(P<0.01)。骨肉瘤组癌组织细胞长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因6相对表达量显著高于癌旁组织(P<0.01)。发生肺部转移、病理低分化、临床Ⅲ期~Ⅳ期者长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因6相对表达量显著高于无肺部转移、病理中高分化、临床Ⅰ期~Ⅱ期者(P<0.05或0.01)。血清长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因6预测骨肉瘤的截断值、灵敏度、特异度、准确度、曲线下面积分别为1.95、85.48%、56.06%、70.31%、0.801。结论血清长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因6的表达在骨肉瘤组织内明显上调,与临床分期、病理分化、肺部转移有关,可作为临床骨肉瘤诊断及病情判断的潜在生物学标志物。

SNHG6通过上调ZEB1表达促进食管鳞状细胞癌TE1细胞的侵袭和转移

目的:探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)核仁小分子RNA宿主基因6(small nuclear RNA host gene 6, SNHG6)促进食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)细胞侵袭和转移的作用及其分子生物学机制。方法:使用实时定量聚合酶链式反应(real time quantitative polymerase chain reaction,qPCR)检测36例ESCC组织及其癌旁组织(标本收集自河北医科大学第四医院2019年2月至8月外科手术的ESCC患者)中SNHG6表达水平;使用反转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测ESCC细胞系(TE1、Yes-2、Eca9706和Kyse150)中SNHG6表达水平,选用SNHG6高表达的TE1细胞,通过转染SNHG6-siRNA敲低该细胞中SNHG6表达;通过集落形成实验、划痕愈合实验和Transwell侵袭实验分别检测SNHG6敲低前后TE1细胞克隆形成、迁移和侵袭能力的变化;采用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测SNHG6敲低前后TE1细胞中锌指蛋白E-盒结合同源异形盒-1(zinc finger E-box binding homeobox factor 1, ZEB1)、MMP-2和MMP-9蛋白表达的变化。结果:SNHG6在ESCC组织和细胞系中均呈高表达状态(均P<0.01),且在TE1细胞中高表达最为显著。转染SNHG6-siRNA后TE1细胞中SNHG6表达水平显著降低(P<0.01),si-SNHG6-1和si-SNHG6-2组TE1细胞的克隆形成、迁移和侵袭能力均显著低于对照组(均P<0.01),两组细胞中MMP-2、MMP-9和ZEB1表达水平均显著低于对照组(均P<0.05)。结论:ESCC组织中呈高表达的SNHG6可促进TE1细胞的恶性生物学行为,其机制可能涉及ZEB1表达的上调。

SNHG6:一种新的肿瘤标志物和治疗靶点

长链非编码RNA(lncRNA)是一类长度大于200个核苷酸的非编码RNA。某些lncRNA的异常表达在肿瘤的增殖、转移和凋亡中起着非常重要的作用。其中核仁小分子RNA宿主基因6(SNHG6)在多种肿瘤组织中都可检测到异常表达。本文就SNHG6对人类多种肿瘤的调控作用及分子机制做一综述。

LncRNA-SNHG17通过调控miR-23b-3p促进非小细胞肺癌进展

目的探讨长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因17(SNHG17)在非小细胞肺癌中的作用及其分子机制。方法采用实时荧光定量PCR(Quantitative Realtime PCR,qRT-PCR)技术检测SNHG17在肺癌细胞系和正常气管上皮细胞中的表达;通过转染pLCDH-SNHG17质粒或SNHG17-siRNA,过表达或沉默SNHG17,检测不同肺癌细胞株增殖、细胞周期和迁移能力;采用生物信息学方法预测并鉴定SNHG17相互作用的微小RNA (miRNA)。结果 SNHG17在NSCLC细胞系中表达上调,SNHG17的沉默能抑制非小细胞肺癌细胞增殖和迁移;SNHG17的上调促进非小细胞肺癌细胞增殖和迁移;沉默SNHG17导致非小细胞肺癌细胞系中miR-23b-3p水平升高,过表达miR-23b-3p在非小细胞肺癌细胞系中抑制SNHG17的表达。结论 LncRNA-SNHG17在非小细胞肺癌细胞系中高表达,可能通过竞争性结合miR-23b-3p参与非小细胞肺癌的发生。

长链非编码RNA SNHG17通过抑制p57表达促进肺癌进展

目的:分析肺癌中长链非编码RNA(lncRNA)小核仁RNA宿主基因17(SNHG17)与p57的表达相关性及功能联系。方法:通过starBase数据库分析SNHG17和p57在肺癌组织和正常组织中的表达差异;采用人正常肺上皮细胞BEAS-2B和人肺癌细胞系A549、H1975进一步分析SNHG17和p57在肺癌细胞和正常肺细胞中的表达差异;采用qRT-PCR和Western印迹检测si-SNHG17在mRNA和蛋白表达方面对SNHG17和p57的影响;采用CCK-8法检测siSNHG17对A549细胞增殖的影响;采用Transwell法检测si-SNHG17对A549细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:通过数据分析发现SNHG17在肺腺癌和肺鳞癌组织中显著高表达,而p57在肺腺癌和肺鳞癌组织中却显著低表达;与正常肺细胞相比,SNHG17和p57在肺癌细胞中的表达趋势与在肺癌组织中一致;SNHG17和p57的表达呈负相关;沉默SNHG17使p57的表达一定程度上调,A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力受到抑制。结论:SNHG17在肺癌中高表达,促进肺癌细胞增殖,并通过调节p57的表达来抑制肺癌细胞的增殖和迁移。SNHG17和p57在肺癌中的具体作用机制仍有待进一步研究。

lncRNA SNHG7对胶质瘤细胞侵袭、迁移的影响

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)小核仁RNA宿主基因7(SNHG7)与胶质瘤生存预后的关系,及其对胶质瘤细胞侵袭和迁移的影响。方法 选取2015年6月至2016年3月手术切除的胶质瘤组织80例(术后随访截止2020年4月)和50例颅脑损伤颅内减压术中切取的非肿瘤脑组织为对照,用RT-PCR法检测lncRNA SNHG7的表达水平。体外培养胶质瘤U87细胞,转染不同质粒敲低lncRNA SNHG7表达,用Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力;双荧光素酶报告基因实验检测lncRNA SNHG7对miR-4516的调控作用。结果 胶质瘤组织lncRNA SNHG7表达量明显高于对照组(P<0.05);多因素Cox回归分析显示,lncRNA SNHG7高表达是胶质瘤病人不良生存预后的独立影响因素(P<0.05);生存曲线分析显示,高表达组胶质瘤病人中位总生存期较低表达组明显缩短(P<0.05)。敲低lncRNA SNHG7表达,明显抑制U87细胞侵袭和迁移力(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实lncRNA SNHG7靶向上调miR-4516表达,上调miR-4516可逆转敲低lncRNA SNHG7表达对胶质瘤U87细胞侵袭和迁移能力的作用(P<0.05)。结论 胶质瘤组织lncRNA SNHG7呈高表达,与病人不良生存预后有关。lncRNA SNHG7通过靶向调控上调miR-4516表达促进胶质瘤细胞的侵袭和迁移。

c-Myc靶向LncRNA SNHG3对乳腺癌细胞生物学作用的影响

目的:探讨c-Myc靶向LncRNA SNHG3对乳腺癌细胞的生物学作用。方法:通过实时定量PCR(RT-qPCR)法分析c-Myc和LncRNA SNHG3在乳腺癌细胞中的表达情况;生物信息学分析c-Myc与LncRNA SNHG3的调控关系;采用染色质免疫沉淀实验(ChIP)和双荧光素酶报告基因实验验证它们的相互作用,并通过对c-Myc进行RNAi和过表达后,RT-qPCR和Western blot法检测SNHG3的表达变化;CCK8、划痕愈合和Transwell^(TM)实验分别检测细胞的增殖能力、横向迁移能力和纵向迁移及侵袭能力;采用流式细胞术检测细胞的周期分布;RT-qPCR和Western blot法检测上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、波形蛋白(Vimentin)、锌指转录因子(Snail)、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)的mRNA和蛋白表达水平。结果:c-Myc和LncRNA SNHG3在乳腺癌细胞中异常高表达(P<0.001);生物信息学发现LncRNA SNHG3是c-Myc转录调控的主要靶标,且c-Myc在LncRNA SNHG3启动子区存在多个结合位点;LncRNA SNHG3与Myc信号通路成正相关(P<0.001)。实验结果证实c-Myc结合LncRNA SNHG3启动子,促进LncRNA SNHG3转录和表达(P<0.001);此外,功能挽救实验结果显示c-Myc靶向LncRNA SNHG3增加MDA-MB-231细胞的增殖数目,迁移与侵袭的穿膜数量(P<0.001)。RT-qPCR和Western blot结果显示过表达LncRNA SNHG3部分可抵消敲低c-Myc表达对细胞的EMT进程;并下调E-cadherin的表达(P<0.01),上调MMP2(P<0.01)、Vimentin(P<0.05)和Snail(P<0.05)的表达。干扰LncRNA SNHG3表达能将细胞周期阻滞在G_(0)/G_(1)期(P<0.001),cyclinD1表达减少(P<0.001)。结论:由c-Myc激活转录的LncRNA SNHG3一方面通过激活上皮间充质转化(EMT)促进乳腺癌细胞迁移、侵袭;另一方面通过加速G_(1)/S细胞周期进程促进乳腺癌细胞增殖。

LncRNA SNHG15/miR-123/PAK5轴通过自噬对胃癌细胞活性及血管生成的影响

目的探讨lncRNA SNHG15/miR-123/PAK5轴通过调节自噬对胃癌细胞活性及血管生成的机制研究。方法将胃癌SCG-823细胞分为Control组、si-NC组、si-SNHG15组、miR-NC组、miR-123组、pcDNAPAK5组。RT-PCR检测细胞中SNHG15和miR-123表达;MTT法检测细胞增殖能力;Transwell小室法检测细胞侵袭能力;流式细胞仪检测细胞凋亡能力;Matrigel体外成管实验检测细胞血管生成能力;蛋白质印迹检测细胞中PAK5、VEGF、LC3、Beclin1、p62蛋白表达;双荧光素酶报告基因检验SNHG15和miR-123、miR-123和PAK5的靶向关系。结果与人胃黏膜细胞系GES-1相比,人胃癌细胞系中ASG、MKN-45、SCG-823细胞中SNHG15表达明显升高,miR-123表达明显降低(P<0.05);且SCG-823细胞中SNHG15表达明显高于ASG、MKN-45细胞,miR-123表达明显低于ASG、MKN-45细胞(P<0.05)。si-SNHG15组细胞增殖、侵袭及形成小管数量均明显低于Control组,细胞凋亡率高于Control组(P<0.05);si-SNHG15组细胞中VEGF、PAK5、p62蛋白表达明显低于Control组,LC3Ⅱ/LC3Ι比值及Beclin1蛋白表达明显高于Control组(P<0.05)。与miR-NC组相比,miR-123组细胞增殖、侵袭及形成小管数量均明显降低,细胞凋亡率明显增加(P<0.05);miR-123组细胞中VEGF、PAK5、p62蛋白表达明显低于miR-NC组组,LC3Ⅱ/LC3Ι比值及Beclin1蛋白表达明显高于miRNC组(P<0.05)。通过向细胞中分别转染野生型SNHG15(SNHG15-WT)、PAK5(SNHG15-WT)时,miR-123组荧光素酶活性均明显低于miR-NC组(P<0.05)。与si-SNHG15组相比,pcDNA-PAK5组细胞细胞增殖、侵袭及形成小管数量均明显升高,细胞凋亡率明显降低(P<0.05);pcDNA-PAK5组细胞中VEGF、PAK5、p62蛋白表达明显高于si-SNHG15组,LC3Ⅱ/LC3Ι比值及Beclin1蛋白表达明显低于si-SNHG15组(P<0.05)。结论lncRNA SNHG15可靶向miR-123/PAK5轴抑制胃癌细胞增殖、侵袭和血管生成,促进胃癌细胞凋亡和自噬,进而为调控自噬途径治疗胃癌提供新的思路。

LncRNA SNHG1在甲状腺乳头状癌中的表达及其对细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨长链非编码RNA核仁小分子RNA宿主基因(SNHG1)在甲状腺乳头状癌(PTC)组织和细胞中的表达及其对PTC细胞增殖与凋亡的影响。方法采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测40例行手术治疗的PTC患者的肿瘤组织和对应癌旁组织中SNHG1的表达水平,同时检测不同PTC细胞系(K1、BCPAP和TPC-1)中SNHG1的表达情况。采用si-SNHG1-2、si-SNHG1-3转染BCPAP和TPC-1细胞,另转染si-NC作为阴性对照组,MTT法检测细胞增殖变化,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡变化; Western blotting法检测p53通路相关蛋白的表达变化。结果与癌旁正常组织比较,PTC组织中SNHG1表达增加(2. 72±0. 97 vs. 4. 72±1. 14,P<0. 05); K1、BCPAP和TPC-1细胞中SNHG1表达水平分别为2. 82±0. 25、5. 31±0. 51和3. 92±0. 47,高于人正常甲状腺Nthy-ori3-1细胞(P<0. 05)。与si-NC组比较,si-SNHG1-2和si-SNHG1-3组的BCPAP、TPC-1细胞增殖率分别为(50. 22±4. 65)%和(58. 19±5. 46)%、(47. 18±4. 27)%和(51. 24±6. 49)%,差异均有统计学意义(P<0. 05)。si-NC组BCPAP、TPC-1细胞的G2/M期比例均低于si-SNHG1-2组和si-SNHG1-3组(P<0. 05)。si-NC组BCPAP细胞的凋亡率为(10. 71±0. 78)%,均低于si-SNHG1-2组(24. 90±1. 87)%和si-SNHG1-3组(26. 89±1. 44)%(P<0. 05)。si-NC组TPC-1细胞的凋亡率为(11. 12±1. 05)%,均低于si-SNHG1-2组(27. 21±2. 09)%和si-SNHG1-3组(29. 67±2. 14)%(P<0. 05)。沉默SNHG1表达可降低MDM2蛋白表达并增加p53和p21蛋白表达。结论 SNHG1在PTC组织和细胞中表达均上调;沉默SNHG1表达可能通过激活p53通路来抑制细胞增殖,影响细胞周期并促进凋亡。

长链非编码RNA SNHG6在结肠癌中的表达及其生物学意义

目的探索核仁小分子RNA宿主基因6(SNHG6)在结肠癌组织中的表达特点,以及其对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法采用荧光定量PCR检测25例患者结肠癌组织及对应癌旁组织中SNHG6mRNA的表达水平。将LoVo细胞分成Blank组、NC组、siRNA-1组和siRNA-2组,其中Blank组不作任何处理,另外3组依次使用Lipofectamine 2000转染NC-siRNA、SNHG6-siRNA-1及SNHG6-siRNA-2;通过CCK-8实验测定细胞增殖能力,通过Transwell实验测定细胞迁移及侵袭能力;通过荧光定量PCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测上皮-间质转化(EMT)标志物上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、Snail的mRNA及蛋白表达水平。结果患者结肠癌组织SNHG6mRNA表达水平高于对应癌旁组织(U=138.0,P=0.000 7)。siRNA-1组和siRNA-2组细胞增殖活性较Blank组明显下降(P<0.05);siRNA-1组和siRNA-2组细胞的迁移和侵袭数量较Blank组明显减少(P<0.05);siRNA-1组、siRNA-2组与Blank组比较,E-Cadherin mRAN及蛋白表达上调,N-Cadherin、Vimentin及Snail mRNA及蛋白表达下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 SNHG6在结肠癌组织中高表达,敲低SNHG6表达能够抑制结肠癌细胞EMT进程,进而抑制细胞的增殖、迁移及侵袭能力。

SNHG14调控miR-181b对H2O2诱导的人脑微血管内皮细胞氧化应激和凋亡的影响

目的小核仁RNA宿主基因(SNHG)14对H_(2)O_(2)诱导的人脑微血管内皮细胞氧化应激和凋亡的影响及作用机制。方法体外培养人脑微血管内皮细胞BB19,100μmol/L H_(2)O_(2)诱导分别作用于转染SNHG14小干扰RNA、miR-181b模拟物及共转染SNHG14小干扰RNA与miR-181b抑制剂的BB19细胞后,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中SNHG14和miR-181b mRNA表达,CCK-8和流式细胞仪分别检测细胞增殖、凋亡,Western印迹检测B细胞淋巴瘤(Bcl)-2和Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达,试剂盒检测细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)水平。双荧光素酶报告实验验证SNHG14与miR-181b调控关系。结果干扰SNHG14表达或过表达miR-181b后,H_(2)O_(2)诱导的BB19细胞增殖活性、Bcl-2表达及SOD和CAT活性明显升高,细胞凋亡率、Bax表达和MDA水平明显降低(P<0.05)。SNHG14靶向负调控miR-181b表达。而与仅干扰SNHG14表达的细胞比较,同时干扰miR-181b和SNHG14表达的BB19细胞经H_(2)O_(2)诱导后增殖活性、Bcl-2表达及SOD和CAT活性明显降低,细胞凋亡率、Bax表达和MDA水平明显升高(P<0.05)。结论干扰SNHG14表达可能靶向负调控miR-181b抑制H_(2)O_(2)诱导的人脑微血管内皮细胞凋亡和氧化应激。

lncRNA SNHG6对三阴性乳腺癌细胞增殖、迁移及凋亡的影响研究及其ceRNA网络初探

目的 分析长链非编码RNA(lncRNA)SNHG6靶向调控miR-519d-3p/CCND1对三阴性乳腺癌(TNBC细胞增殖、迁移及凋亡的影响。方法 采用siRNA技术沉默TNBC细胞系MDA-MB-231中lncRNA SNHG6的表达,实验分为三组:正常人乳腺上皮细胞系MCF-10A(对照组)、MDA-MB-231和si-SNHG6(si组),采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测lncRNA SNHG6和miR-519d-3p表达,MTT法检测细胞增殖率,Transwell实验检测迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot实验检测CCND1蛋白表达。采用双荧光素酶报告基因检测SNHG6与miR-519d-3p及miR-519d-3p与CCND1的靶向关系。三组间计量资料采用单因素ANOVA分析和LSD-t法检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果 连续培养48 h发现,与对照组比较,MDA-MB-231组lncRNA SNHG6与miR-519d-3p mRNA相对表达量、细胞增殖率、迁移率和CCND1蛋白水平均显著升高,细胞凋亡率显著下降(P<0.05);与MDA-MB-231组比较,si组lncRNASNHG6与miR-519d-3pmRNA相对表达量显著降低、细胞增殖率、迁移率和CCND1蛋白水平均显著下降(P<0.05),凋亡率上升;双荧光素酶报告基因检测显示,SNHG6能够靶向上调miR-519d-3p表达,miR-519d-3p能够靶向上调CCND1表达。结论 lncRNASNHG6能够通过靶向调控miR-519d-3p/CCND1功能进而影响TNBC细胞的增殖、迁移及凋亡能力,可能是TNBC发病的重要分子机制,也有望成为分子干预的靶点。

SNHG20对CIK细胞共培养的宫颈癌细胞Hela的杀伤作用

目的探讨SNHG20是否通过靶向微小RNA(miR)-217影响细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞对宫颈癌细胞Hela的杀伤作用。方法应用流式细胞仪分析诱导的CIK细胞表型。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测CIK细胞共培养前后Hela中lncRNA小核仁RNA宿主基因(SNHG)20表达。在Hela中转染si-SNHG20或转染pcDNA-SNHG20并与CIK细胞共培养。四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验检测Hela细胞活性,克隆形成实验测定Hela细胞克隆形成,流式细胞仪评估Hela细胞凋亡,Western印迹检测凋亡蛋白pro-caspase-3、Cleaved-caspase-3表达。双荧光素酶报告实验检测SNHG20和miR-217的靶向关系。结果CIK细胞诱导14 d时,CD3+CD56+比例达到最高。CIK细胞与Hela细胞共培养24、48、72 h降低SNHG20表达水平,差异有统计学意义(P<0.01)。CIK细胞与Hela细胞共培养或转染si-SNHG20降低Hela细胞24、48、72 h细胞活性、克隆形成数、pro-caspase-3蛋白表达水平,提高miR-217表达水平、细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白表达水平,差异有统计学意义(P<0.01)。转染pcDNA-SNHG20后,CIK细胞对Hela细胞的活性、克隆形成数、pro-caspase-3蛋白表达的抑制作用及对Hela细胞的凋亡、miR-217、Cleaved-caspase-3蛋白表达的促进作用被逆转。SNHG20靶向调控miR-217表达。结论CIK细胞通过下调宫颈癌细胞Hela中SNHG20靶向miR-217表达,从而抑制Hela细胞的增殖和诱导凋亡。

LncRNA SNHG6调节miR-101-3p/SEPT2轴对乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探究长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因6(LncRNA SNHG6)对乳腺癌(BC)细胞恶性生物学行为的影响及其分子机制。方法qRT-PCR和Western blot检测人正常乳腺上皮细胞以及不同人BC细胞中SNHG6、miR-101-3p、SEPT2的mRNA以及SEPT2蛋白表达。选择MDA-MB-231细胞进行转染实验,分为对照组、si-NC组、si-SNHG6组、si-SNHG6+miR inhibitor-NC组、si-SNHG6+miR-101-3p inhibitor组。转染培养48 h后,qRT-PCR和Western blot检测MDA-MB-231细胞中SNHG6、miR-101-3p、SEPT2的mRNA以及SEPT2蛋白表达;CCK-8试剂盒检测细胞存活率;克隆形成实验检测细胞克隆数量;流式细胞术检测细胞凋亡率;Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力;双荧光素酶活性实验分别验证miR-101-3p和SNHG6、SEPT2的靶向关系。结果BC细胞系中MDA-MB-231细胞中SNHG6、SEPT2mRNA及蛋白水平高于其他细胞,miR-101-3p表达水平低于其他细胞(P<0.05)。转染si-SNHG6降低MDA-MB-231细胞中SNHG6、SEPT2的表达,提高miR-101-3p的表达,同时降低细胞的存活率、克隆数量、细胞迁移和侵袭数量,升高细胞的凋亡率(P<0.05)。双荧光素酶活性实验验证了SNHG6、SEPT2均可与miR-101-3p结合。结论敲低SNHG6能够上调miR-101-3p表达,下调SEPT2的表达,抑制BC细胞活性、迁移和侵袭,促进BC细胞凋亡。

SNHG6、miR-101-3p和IGF2BP3在肺腺癌中的表达及相关性研究

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)核仁小分子RNA宿主基因6(SNHG6)、微小RNA(miR)-101-3p和胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白3(IGF2BP3),在肺腺癌患者血清中的表达及其相关性。方法选取2019年2月-2022年9月本院122例肺腺癌患者(肺腺癌组)以及122例健康志愿者(对照组),检测血清SNHG6、miR-101-3p和IGF2BP3表达水平,并分析其与临床病理参数的关系。Pearson法分析两指标间相关性,ROC曲线分析血清SNHG6、miR-101-3p和IGF2BP3诊断肺腺癌的效能。结果肺腺癌组血清SNHG6、IGF2BP3表达水平高于对照组,miR-101-3p表达水平低于对照组(P<0.05)。肺腺癌患者血清SNHG6与miR-101-3p、miR-101-3p与IGF2BP3表达水平成负相关(P<0.05),SNHG6与IGF2BP3表达水平成正相关(P<0.05)。SNHG6、miR-101-3p和IGF2BP3均与肺腺癌淋巴结转移、肿瘤大小、远处转移及TNM分期有关(P<0.05)。血清SNHG6、miR-101-3p、IGF2BP3联合诊断肺腺癌的曲线下面积为0.955,高于单一指标或两指标联合诊断效能。结论肺腺癌患者血清SNHG6、IGF2BP3表达水平升高,miR-101-3p表达水平降低,且与较差的临床病理参数相关,可用于临床肺腺癌的辅助诊断。

lncRNA SNHG4与miR-148a在肝癌患者中的表达及其对预后的影响

目的 探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)核仁小RNA宿主基因4(small nucleolar RNA host gene 4,SNHG4)与微小核糖核酸-148a(miR-148a)在肝癌患者中的表达量,并分析二者与预后的关系。方法 选取2016年9月—2019年4月河北省秦皇岛市第一医院收治的161例肝癌患者为研究对象,取肝癌组织、癌旁组织检测lncRNA SNG4、miR-148a表达水平,观察二者与肝癌病理特征的关系。随访24个月,记录患者的累积生存情况,并分成生存组与死亡组,比较两组lncRNA SNHG4、miR-148a表达水平,利用Pearson线性相关分析二者相关性,绘制受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析二者评估肝癌预后的曲线下面积(area under the curve,AUC)。结果 患者肝癌组织中lncRNA SNHG4相对表达量高于癌旁组织[(7.93±2.15)vs(2.01±0.76),t=32.940,P<0.01]。肝癌组织中miR-148a相对表达量低于癌旁组织[(0.64±0.27)vs(1.37±0.31),t=22.532,P<0.01]。同lncRNA SNHG4低表达(lncRNA SNHG4<7.93)组比较,lncRNA SNHG4高表达(lncRNA SNHG4≥7.93)组肿瘤≥5 cm(56.82%vs 34.25%,χ^(2)=8.170,P=0.004)、肝内转移(32.95%vs 10.96%,χ^(2)=10.906,P=0.001)、临床分期Ⅲ期(42.04%vs 13.70%,χ^(2)=19.412,P<0.01)、低分化(39.68%vs 6.85%,χ^(2)=14.231,P<0.01)、多发肿瘤(56.82%vs 26.03%,χ^(2)=15.447,P<0.01)、微血管侵犯(32.95%vs 12.33%,χ^(2)=9.414,P=0.002)所占比例均高于lncRNA SNHG4低表达组。同miR-148a高表达(miR-148a≥0.64)组比较,miR-148a低表达(miR-148a<0.64)组肿瘤最大径≥5 cm(58.44%vs 35.71%,χ^(2)=8.339,P=0.004)、肝内转移(35.06%vs 11.90%,χ^(2)=12.175,P<0.01)、临床分期Ⅲ期(40.26%vs 19.05%,χ^(2)=16.284,P<0.01)、低分化(27.27%vs 13.10%,χ^(2)=5.071,P=0.024)、多发肿瘤(58.44%vs 28.57%,χ^(2)=14.636,P<0.01)、微血管侵犯(33.77%vs 14.29%,χ^(2)=8.455,P=0.004)所占比例均高于miR-148a高表达组。随访24个月内,死亡30例,占18.63%,生存组lncRNA SNHG4相对表达量低于死亡组[(7.53±0.95)vs(9.68±0.40),t=12.128,P<0.01]。生存组miR-148a相对表达量高于死亡组[(0.68±0.23)vs(0.45±0.08),t=5.392,P<0.01]。Pearson相关分析提示肝癌患者lncRNA SNHG4与miR-148a表达成负相关(r=-0.746,P<0.01)。肝癌组织中lncRNA SNHG4、miR-148a表达量单独与联合评估肝癌预后的AUC分别为0.784、0.770、0.888。结论 肝癌组织中lncRNA SNHG4呈过表达,miR-148a表达则降低,二者表达成负相关,且均对预后评估有一定价值。