小核核糖核蛋白多肽A对肝细胞癌细胞恶性生物学行为的影响及其机制

目的:探究小核核糖核蛋白多肽A(SNRPA)在肝细胞癌(HCC)组织和细胞中的表达及其调控HCC细胞HepG2和Hep3B恶性生物学行为的作用及其机制。方法:数据库分析SNRPA在泛癌组织中的表达及其与病理分期、HCC患者预后的相关性。常规培养HepG2和Hep3B细胞,将si-NC,si-SNRPA#1、si-SNRPA#2转染HepG2和Hep3B细胞,实验分为si-NC组、si-SNRPA#1组和si-SNRPA#2组;将SNRPA-vector和SNRPA-oe载体转染LO2细胞,分为SNRPA-vector组和SNRPA-oe组。qPCR法检测正常肝细胞和肝癌细胞以及转染各组HepG2和Hep3B细胞中SNRPA mRNA的表达,MTT法、Transwell法和WB法分别检测转染后各组HepG2和Hep3B细胞的增殖、迁移和侵袭能力以及EMT相关蛋白表达的变化。结果:数据库分析显示,SNRPA mRNA在多数肿瘤组织中均呈高表达(均P<0.001)且与病理分期有关联(P<0.05或P<0.01)。SNRPA在HCC组织和细胞中均呈高表达(P<0.05或P<0.01),且与HCC患者的预后有关联(P<0.01)。敲减SNRPA表达明显抑制HepG2和Hep3B细胞增殖(P<0.05或P<0.01)而过表达SNRPA则能促进LO2细胞增殖(P<0.01),敲减SNRPA表达明显抑制HepG2和Hep3B细胞的迁移和侵袭能力(均P<0.01),明显促进E-cadherin的表达上调(P<0.01),而抑制N-cadherin、vimentin的表达(P<0.01)。结论:SNRPA在HCC组织及细胞中呈明显高表达,其可能通过调控上皮间质转化(EMT)进程进而促进HepG2和Hep3B细胞的增殖、迁移和侵袭。

剪接因子异质核糖核蛋白A2B1在癌细胞和衰老细胞中的相反表达趋势及其对癌细胞衰老的调控

剪接因子异质核糖核蛋白A2/B1(HNRNPA2B1)与人类及小鼠的寿命相关,并在多个癌症的病程进展中发挥重要的作用。然而,HNRNPA2B1能否在细胞衰老这一与个体衰老和抑制癌症密切相关的生物学过程中发挥作用尚不清楚。本研究发现,HNRNPA2B1在多个癌症体系中呈显著上调表达趋势,而在多个细胞衰老体系中则呈显著下调表达趋势,暗示HNRNPA2B1对细胞衰老和癌症具有潜在调控作用。研究结果显示,在多种癌细胞中稳定敲低HNRNPA2B1均可诱导系列细胞衰老相关表型。分子水平的研究表明,HNRNPA2B1的低表达可导致超过1 000个基因发生显著的可变剪接变化,其中包含与细胞衰老有因果关系的基因。进一步研究发现,转录因子E2F1可调节HNRNPA2B1的表达变化。综上,E2F1-HNRNPA2B1是在癌症发展和细胞衰老中均发挥重要作用的一个通路,通过对该通路的调控,可望从诱导癌细胞衰老的角度为相关癌症的研究及治疗提供新的视角。

小核核糖核蛋白多肽E在肿瘤中的作用及机制

小核核糖核蛋白多肽E(small nuclear ribonucleoprotein polypeptide E,SNRPE)也称为剪接体蛋白E(spliceosomal protein E,SmE),属于剪接体蛋白家族成员,最初被确定为剪接体复合物的重要组成部分,参与前体mRNA(pre-mRNA)加工。近年来,除了作为剪接体的关键成分外,SNRPE在肿瘤发生发展中的作用也备受关注。本文就SNRPE在肿瘤发生发展中的作用进行综述,探讨SNRPE在非小细胞肺癌、肝细胞癌、前列腺癌及乳腺癌等癌症中的作用机制,并介绍了SNRPE与肿瘤的药物敏感性和临床预后之间的关系,旨在为相关肿瘤的发生、发展、治疗和预后提供更多理论依据。

小核糖核蛋白多肽E在前列腺癌中的表达及其临床意义

目的探讨小核糖核蛋白多肽E(SNRPE)在前列腺癌(PCa)中的表达及在前列腺癌细胞中调控功能。方法基于肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库对目的基因SNRPE进行差异分析、生存分析和临床相关性分析;通过干扰RNA(siRNA)敲低SNRPE的表达, 探究其对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。组间比较采用独立样本t检验。结果 SNRPE在前列腺癌样本中的表达水平明显高于正常前列腺样本(5.3±0.10比4.8±0.12, t=5.54, P<0.01)。T1+T2期SNRPE表达显著低于T3+T4期表达组(t=4.53, P<0.05)。前列腺癌淋巴结未转移病人SNRPE1表达显著低于淋巴结转移病人组(t=4.21, P<0.05)。多变量Cox回归分析表明, 年龄[风险比(HR):0.99(0.95~1.00), P>0.05]、T分期[HR:1.84(0.96~3.50), P>0.05]及N分期[HR:1.32(0.68~2.60), P>0.05]不能作为OS相关的独立预后因素, 而SNRPE表达[HR:2.00(1.20~3.50), P<0.05]、及Gleason评分[HR:3.14(1.57~6.30), P<0.01]可作为前列腺癌的预后因素。PC3中ctrl组伤口愈合面积显著高于si-SNRPE#1和si-SNRPE#2组, 组间比较差异有统计学意义[(82.30±1.21)%比(38.10±2.56)%, t=27.04, P<0.01;(82.30±1.21)%比(40.05±1.82)%, t=33.48, P<0.01]。同时前列腺癌细胞迁移侵袭实验发现, ctrl组及si-SNRPE#1和si-SNRPE#2组PC3迁移细胞分别为351.8±16. 5、189.4±10.50和176.6±23.5, 组间比较差异有统计学意义(t=14.38、10.57, P<0.01)。ctrl组及si-SNRPE#1和si-SNRPE#2组PC3侵袭细胞分别为495.6±77.9、251.2±70.8和203.4±41.2, 组间比较差异有统计学意义(t=4.02、5.74, P<0.01)。结论 SNRPE基因具有促进前列腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力的功能。

基于癌症基因图谱数据库分析SNRPEP2在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的利用癌症基因图谱(TCGA)数据库探讨小核糖核蛋白多肽E假基因2(SNRPEP2)在肝细胞癌(HCC)中的表达及其临床意义。方法从TCGA数据库下载374例HCC组织样本和50例癌旁组织样本的转录组测序数据和临床资料,采用生物信息学方法,分析SNRPEP2在HCC中的表达水平及其与临床病理特征和预后的关系,运用Cox回归分析影响患者预后的危险因素并构建Nomogram预测模型,通过绘制ROC曲线评估SNRPEP2在HCC诊断中的效能。结果HCC组织中SNRPEP2表达水平明显高于癌旁正常组织(P<0.01)。HCC中SNRPEP2高表达与肿瘤的组织学分级(OR=2.539,P<0.01)、血清甲胎蛋白水平(OR=2.966,P<0.01)、血管浸润(OR=1.658,P<0.05)和邻近肝组织炎症(OR=1.703,P<0.05)均有关,且SNRPEP2高表达患者的总生存期(OS)、疾病特异性生存期(DSS)和无进展间隔期(PFI)均低于低表达患者(均P<0.05)。多因素Cox回归分析显示SNRPEP2表达水平是影响HCC患者OS的独立危险因素(HR=1.970,P<0.01)。ROC曲线分析显示SNRPEP2表达水平对于诊断HCC、T_(1)期、M_(0)期、病理分期I期,评估OS、DSS及PFI均具有良好的效能(均AUC>0.50)。结论SNRPEP2高表达是HCC预后不良的独立危险因素且具有良好的诊断效能,有成为HCC诊断和预后判断标志物的潜在应用价值。

三叶肽因子2、前列腺素E_2在果胶铋对大鼠胃粘膜保护机制中的作用

目的 研究果胶铋对胃粘膜损伤的保护机制 ,探讨胃粘膜细胞中三叶肽因子 2信使核糖核酸 (TFF2 mRNA)表达及前列腺素E2 (PGE2 )在果胶铋胃粘膜保护机制中的作用。方法 建立阿斯匹林胃粘膜损伤模型 ,细胞原位杂交结合图像分析检测TFF2 mRNA表达水平并以阳性细胞平均光度值 (OD)表示 ,放射免疫法测胃粘膜PGE2 浓度 ,Guth法计算胃粘膜损伤指数。结果 果胶铋组与未用药组TFF2 mRNA的OD值分别为 0 .5 6± 0 .0 9、0 .2 8± 0 .0 4,PGE2 浓度分别为 (4.2 0± 0 .85 )Hg/ml、(1.18± 0 .14)Hg/ml,果胶铋组高于未用药组 ,二项结果相比均有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;果胶铋组损伤指数为(8.6 0± 2 .2 0 )极明显低于未用药组 (2 9.72± 6 .5 3) ,P <0 .0 1;经相关分析 ,果胶铋组胃粘膜细胞TFF2 mRNA的表达水平增加与胃粘膜PGE2 浓度增加无相关性 (r=0 .48,P >0 .0 5 )。结论 果胶铋对阿斯匹林引起的胃粘膜损伤有显著的保护作用 ,可能与其增加TFF2 mRNA的表达及促进胃粘膜PGE2

遗传性单纯性少毛症1例及SNRPE基因突变研究

目的:报告国内首例由SNRPE基因突变导致的常染色体显性遗传性单纯性少毛症(少毛症11型)1例,并对其家系进行基因突变研究。方法:抽取患儿及其父母外周血,提取血液基因组DNA,同时取100例健康汉族人基因组DNA样品作对照,采用PCR方法扩增APCDD1、RPL21、SNRPE、HR基因所有外显子及其侧翼序列,并对产物进行测序分析。结果:患儿SNRPE基因存在剪切位点杂合突变,c.144+4A>C。患儿父母及100例健康对照均未发现该杂合突变。结论:SNRPE基因的杂合突变c.144+4A>C可能为导致该遗传性单纯性少毛症家系的原因。

HnRNPE2 decoy RNA恢复C/EBPα活性诱导32D-P210的细胞粒系分化

目的:采用核不均一核糖核蛋白E2(hnRNP E2)decoy RNA靶向阻断CCAAT增强子结合蛋白alpha(C/EBPα)基因的异常翻译,诱导小鼠白血病样32D-P210细胞株向粒系分化,并进一步探讨其分子机制.方法:电穿孔法分别将野生型和突变型hnRNP E2 decoy RNA表达质粒转染入32D-P210细胞,经G418筛选出稳定株后,RT-PCR检测C/EBPa,粒细胞集落刺激因子受体(G-CSFR)与髓过氧化物酶(MPO)基因的mRNA水平;WesternBlot检测C/EBPa,G-CSFR的蛋白表达水平;瑞氏染色观察粒细胞集落刺激因子(G-CSF)刺激前后细胞形态;流式细胞仪检测分化抗原Gr-1,CD11b的表达.结果:筛选到分别稳定表达野生型或突变型hnRNP E2 decoy RNA的TG细胞株和TGA细胞株.与未转染组32D-P210细胞相比,TG细胞株C/EBPa mRNA水平无改变,但42ku-C/EBPa蛋白、G-CSFR mRNA和MPO mRNA水平分别升高了(43.8±4.9)%,(69.1±3.2)%和(37.8±4.2)%(P<0.05);G-CSF刺激后,TG细胞出现中、晚幼粒细胞甚至成熟粒细胞形态学特征;同时Gr-1分化抗原的表达率上升至40.3%,未转染组32D-P210细胞的Gr-1表达率5.5%(P<0.05);然而CD11b在3组细胞都是高表达,没有明显的变化(P>0.05);以上各参数在TGA细胞株与未转染组32D-P210细胞株间均无显著性差异(P>0.05).结论:hnRNP E2 decoy RNA能够诱导32D-P210细胞向粒系分化,其机制可能与decoy RNA特异性阻断hnRNAE2与C/EBPα mRNA非翻译区结合,调节C/EBPα mRNA翻译,恢复42ku-C/EBPα表达,上调其下游G-CSFR和MPO等分化基因的表达有关.G-CSF可加速这一作用从而促进32D-P210细胞的分化过程.

HPV感染与ERK信号通路关键因子在宫颈癌中的交互效应及临床意义

目的:探讨HPV感染与ERK信号通路关键因子在宫颈癌中的交互效应及意义。方法:选取2020年10月至2022年10月我院收治的宫颈癌患者90例,作为研究组,另纳入宫颈上皮内瘤变患者90例,作为对照组。统计两组HPV感染状况、ERK信号通路关键因子[核不均一核糖核蛋白E1(HnRNP E1)、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)、磷酸化非受体酪氨酸激酶(p-Src)]表达,比较研究组不同临床病理特征患者ERK信号通路关键因子表达,Spearman分析两者间相关性,Logi.0stic回归方程分析HPV感染与ERK信号通路关键因子在宫颈癌中的交互效应。结果:研究组HPV感染率及HnRNP E1、p-ERK1/2、p-Src蛋白阳性率均高于对照组CINⅠ~Ⅱ、Ⅲ级(P<0.05);宫颈癌患者FIGO分期、HPV感染、分化程度与HnRNP E1、p-ERK1/2、p-Src蛋白呈正相关(P<0.05);HnRNP E1、p-ERK1/2、p-Src蛋白及三者交互作用是宫颈癌患者HPV感染高危因素(P<0.05)。结论:HPV感染及ERK信号通路关键因子阳性表达均可增加宫颈癌发病风险,两者存在正向交互作用,可为宫颈癌鉴别诊治提供有利参考信息。

羰基化蛋白质组学研究规律运动调控大鼠脑纹状体细胞凋亡的作用与适应性机制

为研究探讨规律运动对老年大鼠纹状体蛋白质氧化应激与细胞凋亡的影响,通过差异羰基化蛋白质组学特征分析,筛选靶标蛋白质并阐明其作用机制。将24只健康雄性23月龄老年大鼠随机分为静息组(Con-SED)和规律运动组(Aero-EXE)。采用运动强度相当于最大摄氧量(VO_(2max))60%~65%逐渐递增到70%~75%的10周中等强度规律运动。HE染色结果显示,规律运动改善了老年大鼠纹状体基质间区和纹状质间区的结构。TUNEL检测出所有老年大鼠纹状体均出现细胞凋亡核。与Con-SED组相比较,Aero-EXE组纹状体基质间区细胞凋亡指数增加了68.24%(P<0.01),而纹状质间区凋亡指数下降了43.14%(P<0.05)。亲和素珠富集和电喷雾四级杆飞行时间质谱分离鉴定羰基化蛋白质。进一步使用MASCOT服务器的数据库进行生物信息学搜索,结果显示,羰基化蛋白质涵盖28种氧化修饰位点。其中鉴定出Con-SED组羰基化蛋白质有14-3-3蛋白(e)和核内不均一性核糖核蛋白(HNRNPA2B1)等69个;而Aero-EXE组羰基化蛋白质有电压依赖型阴离子选择性通道1(VDAC1)和VDAC2等71个。生物信息学分析羰基化蛋白质的氧化修饰位点及蛋白质相互作用关系,筛选出14-3-3蛋白(e)和HNRNPA2B1羰基化蛋白质与细胞凋亡有着重要关系。免疫组织化学检测结果显示,与Con-SED组相比较,Aero-EXE组的大鼠纹状体SOD和BDNF表达水平显著提高(P<0.01,P<0.05);qRT-PCR检测结果显示,14-3-3蛋白(e)和HNRNPA2B1表达水平显著上调(P<0.05,P<0.01);免疫印迹检测结果显示,PI3K/AKT1/mTOR和CAMKⅡα信号通路相关分子的表达水平显著上调(P<0.05或P<0.01)。综上所述,规律运动刺激了抗氧化系统的适应,改善了与细胞凋亡密切相关的14-3-3蛋白(e)和HNRNPA2B1等蛋白质羰基化,维护了纹状体基质间区和纹状质间区细胞凋亡的稳态,其机制是通过上调14-3-3蛋白(e)和HNRNPA2B1表达水平,促进BDNF的表达,进一步激活并上调下游PI3K/AKT/mTOR和CAMKs信号通路而调控纹状体细胞凋亡。

丹红注射液改善神经干细胞移植治疗脑缺血损伤效果的机制研究

目的探讨丹红注射液能否通过调控核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路增强神经干细胞(NSC移植修复脑缺血损伤的治疗效果。方法 40只雄性SD大鼠随机分为NSC移植治疗组(NSC组)、丹红注射液组(DH组)、NSC+丹红注射液组(N+D组)、NSC+丹红注射液组+ML385组(N+D+M组)和PBS对照组(PBS组),每组8只。所有大鼠均采用大脑中动脉栓塞法建立脑缺血模型,栓塞1.5 h后进行再灌注。再灌注后3 d对各组大鼠进行相应处理。在NSC移植术前和术后1、2、4周进行神经功能评分。术后4周后处死大鼠,检测氧化应激相关指标,并用免疫荧光染色检测神经元特异核蛋白(NeuN)和血管性血友病因子(vWF)的表达情况。结果在NSC移植术前,各组大鼠的神经功能评分比较,差异无统计学意义(P>0.05)。术后1、2、4周时,NSC组、DH组和N+D组大鼠的神经功能评分较PBS组和N+D+M组均降低(均为P<0.05)。与PBS组和N+D+M组比较,NSC组、DH组和N+D组的丙二醛(MDA)水平均降低,超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)水平均升高(均为P<0.05);N+D+M组的GPX水平较PBS组降低(P<0.05)。免疫荧光染色结果显示,移植到大鼠脑内的NSC能够迁移至脑梗死周边区域并存活,并表达神经元标志物NeuN和新生血管标志物vWF,而N+D+M组的NSC存活数量较其他组明显减少。结论丹红注射液可能通过调控Nrf2信号通路改善干细胞移植微环境,增加移植干细胞的存活率,提升NSC移植治疗脑缺血损伤效果。