黑果小檗果实中锦葵素-3-O-葡萄糖苷的分离纯化及安全性研究

目的建立并验证黑果小檗果实中锦葵素-3-O-葡萄糖苷(malvidin 3-O-glucoside,Ma-3G)的分离纯化方法,并评估其安全性。方法利用超声辅助浸提法提取黑果小檗果实中的花色苷(Berberis atrocarpa Schneid anthocyanin,BHSA)粗提物,将BHSA粗提物用乙酸乙酯萃取,AB-8大孔吸附树脂、聚酰胺树脂纯化,采用Sephadex LH-20凝胶柱对纯化后BHSA进行分离,分别考察洗脱液浓度、上样量对花色苷不同组分分离效果的影响,并筛选出最佳分离条件,将最佳条件下分离得到的Ma-3G进行紫外可见光谱扫描及高效液相色谱法检测。采用固定剂量法对小鼠以2000 mg/kg Ma-3G的单次口服剂量进行安全性实验。结果经乙酸乙酯萃取、AB-8大孔吸附树脂、聚酰胺树脂纯化后得到BHSA粗品纯度为50.76%,Sephadex LH-20凝胶柱层析的最佳分离条件为上样量20 mg,洗脱液为含有0.5%HCl的20%甲醇溶液,在此条件下成功获得了Ma-3G单体。使用面积归一化法进行纯度测定,结果显示其纯度为99.48%。黑果小檗果实中Ma-3G的安全性实验表明小鼠给药后14 d精神状态良好,对小鼠的死亡率、体重、脏器系数、血常规和病理均无显著影响。结论通过组合柱层析法对BHSA进行分离纯化,成功获得了高纯度的Ma-3G单体。这种方法为工业应用中高效、低成本地分离黑果小檗果实中的花色苷提供了一种实用的解决方案。安全性实验表明黑果小檗果实中Ma-3G可引起急性毒性的毒性剂量范围>2000 mg/kg,为后期体内药理实验奠定研究基础。

黑果小檗果花色苷提取物对小鼠肝纤维化的改善作用及其机制

目的 探讨黑果小檗果花色苷提取物(BHSTA)对小鼠肝纤维化的改善作用及其机制。方法 将40只雄性昆明种小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、BHSTA低剂量组、BHSTA高剂量组、水飞蓟宾组,每组8只。除正常对照组外均采用腹腔注射CCl4油剂的方法建立肝纤维化模型,正常对照组腹腔注射等体积橄榄油;BHSTA低剂量组、BHSTA高剂量组、水飞蓟宾组建模时分别灌胃给予10、40 mg/kg的BHSTA溶液和1μg/10 g的水飞蓟宾,正常对照组、模型对照组均灌胃给予等体积蒸馏水,1次/天,连续4周。记录各组小鼠4周内的体质量,4周后处死,计算肝脏指数,肝脏组织HE及Masson染色后观察病理改变,全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST),改良盐酸羟胺法检测肝脏组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)、丙二醛(MDA)表达,Western blotting法检测肝脏组织Nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)及其下游靶基因凋亡相关微粒蛋白(ASC)、半胱天冬酶1(Caspase-1)、白细胞介素1β(IL-1β)蛋白相对表达量。结果 随着干预时间的延长,各组小鼠体质量均呈升高趋势;分组处理第4周,正常对照组、水飞蓟宾组、BHSTA高剂量组、BHSTA低剂量组、模型对照组小鼠体质量依次降低,组间两两比较P均<0.05。与正常对照组比较,其余各组肝脏指数均升高,以模型对照组升高最明显(P均<0.05)。正常对照组肝小叶结构比较完整,肝细胞正常,汇管区未发现炎症细胞浸润和胶原纤维增生情况;模型对照组大多数肝窦消失,肝细胞可见中度或者重度水肿改变,多发气球样及脂肪样变性,并伴有炎症细胞浸润及汇管区大量胶原纤维增生;BHSTA低剂量组、BHSTA高剂量组、水飞蓟宾组肝细胞气球样变、炎症细胞浸润及胶原纤维增生均较模型对照组减轻。与正常对照组比较,模型对照组血清AST、ALT及肝脏组织MDA表达均升高,肝脏组织SOD、GSH表达均降低(P均<0.05)。与模型对照组比较,BHSTA低剂量组、BHSTA高剂量组、水飞蓟宾组血清AST、ALT及肝脏组织MDA表达均降低,肝脏组织SOD、GSH表达均升高;其中,BHSTA高剂量组、水飞蓟宾组血清AST、ALT及肝脏组织MDA表达降低更明显,水飞蓟宾组肝脏组织SOD、GSH表达升高更明显(P均<0.05)。与正常对照组比较,其余四组小鼠肝脏组织NLRP3、ASC、Caspase-1及IL-1β蛋白相对表达量均升高,以模型对照组升高最明显(P均<0.05)。结论 BHSTA对小鼠肝纤维化具有一定的改善作用,其机制可能与减轻氧化应激反应及抑制NLRP3炎症小体相关通路有关。

一测多评法测定黑果小檗果实中5种花色苷含量

建立高效液相色谱一测多评法(HPLC-QAMS)测定黑果小檗果实中5种花色苷的含量。采用Welch Topsil TM C 18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-2.5%甲酸水溶液,梯度洗脱;检测波长为520 nm;流速为0.8 mL/min;柱温为35℃;进样量为10μL。以矢车菊素-3-O葡萄糖苷为内参物,建立飞燕草素-3-O-葡萄糖苷、矮牵牛素-3-O-葡萄糖苷、芍药素-3-O-葡萄糖苷以及锦葵素-3-O-葡萄糖苷的相对校正因子,并计算各成分含量,同时与外标法测定结果进行对比。5种花色苷分别在各自浓度范围内与峰面积的线性关系良好(0.9994≤R 2≤0.9996);平均加样回收率为99.44%~101.72%,RSD为1.32%~2.59%;6批不同产地的黑果小檗采用QAMS法与外标法所测含量无显著性差异(P>0.05)。该方法可用于黑果小檗果实中5种花色苷的含量测定。

细叶小檗果小檗碱抑菌性能及机理

本实验采用滤纸片法测定细叶小檗果实中的小檗碱对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌以及沙门氏菌的抑菌活性,以平板涂布法确定其对4种供试菌的最低抑菌浓度,评价其抑菌能力;同时通过测定生长曲线、电导率、核酸含量、细胞膜Na^+/K^+-ATP酶活力以及进行聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,进一步探究小檗碱抑菌机理。结果表明,小檗碱对4种供试菌均有一定的抑菌效果,对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌以及沙门氏菌的最低抑菌浓度分别为2.40、3.60、3.30 mg/mL和3.95 mg/mL,对大肠杆菌的抑菌效果较显著;扫描电子显微镜结果显示,小檗碱使菌体的形态受损、细胞破裂、细胞内物质外泄,导致菌悬液中核酸含量和电导率增大;聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明小檗碱能够抑制蛋白的合成;此外,小檗碱能使细胞膜Na+/K+-ATP酶活力降低。因此,小檗碱能通过破坏细胞膜结构抑制菌体蛋白表达,导致菌体死亡,具有良好的抑菌能力。综上,细叶果实小檗碱可作为天然防腐剂,抑制食品中腐败菌的生长,延长食品货架期。

维药材小檗果提取物的体外抑菌实验研究

观察小檗果不同极性提取物的体外抑菌活性。采用微孔板法和对倍稀释法研究小檗果不同极性提取物对变异链球菌和大肠杆菌生长及其生物膜形成的影响。结果显示,乙醇、水、乙酸乙酯和正丁醇提取物对变异链球菌生物膜的形成有一定抑制作用,其中乙醇和水提取物抑制作用很强;乙酸乙酯提取物对大肠杆菌的生长有一定抑制作用,正丁醇、乙酸乙酯、氯仿提取物对大肠杆菌生物膜的形成有一定抑制作用,其中氯仿提取物的抑制活性最强。小檗果含有有效抑制供试菌生长及其生物膜形成的活性成分,值得进一步研究开发。

紫叶小檗果小檗碱的提取及抑菌活性研究

研究紫叶小檗果小檗碱的提取条件及其抑菌活性。在单因素实验和正交实验基础上,得到小檗碱的最佳提取工艺。通过平板抑菌实验测定紫叶小檗果小檗碱对马铃薯干腐病菌(Fusarium solani,F.s.)、番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea,B.c.)、尖孢镰刀病菌(Fusarium oxysporum,F.o.)、苹果炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides,C.g.)、水稻稻瘟病菌(Magnaporthe grisea,M.g.)、苹果腐烂病菌(Cytospora sp,C.s.)六种植物病菌的抑制作用;采用滤纸片法评估紫叶小檗果及葛根、紫叶小檗果配伍制剂对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌活性。实验结果表明,小檗碱最佳提取条件为:纤维素酶用量120 mg、酶解时间120 min、料液比1∶12 g/mL、浸提时间150 min,得率达到0.198%。在小檗碱浓度为4 mg/mL时,对六种植物病菌抑菌效果由大到小排序如下:尖孢镰刀病菌(F.o.)>苹果腐烂病菌(C.s.)>番茄灰霉病菌(B.c.)>水稻稻瘟病菌(M.g.)>马铃薯干腐病菌(F.s.)>苹果炭疽病菌(C.g.),小檗碱对尖孢镰刀病菌具有较好的抑菌活性,抑菌率在小檗碱浓度为4 mg/mL时可达到89.28%;葛根与紫叶小檗果配伍对金黄色葡萄球菌的抑菌活性较强,对大肠杆菌的抑菌活性存在最佳配伍,为葛根∶紫叶小檗果质量比6∶44。综上所述,本实验所得提取工艺稳定、可行,可用于紫叶小檗果中小檗碱的提取,并且紫叶小檗果中小檗碱具有较强的抑菌活性,可用于食品防腐、农业生物防治等领域。

红果小檗果乙醇提取物对四氯化碳致急性肝损伤小鼠的保护作用

目的评价红果小檗果乙醇提取物对四氯化碳(CCl4)所致小鼠急性肝损伤模型的保肝作用。方法将60只小鼠随机分成模型组(生理盐水10 mL/kg体质量),阳性对照组(联苯双酯5 mg/kg体质量),红果小檗乙醇提取物低、中、高剂量组(0.375、 0.75、1.50 g/kg体质量),另取12只小鼠作为正常对照组(生理盐水10 mL/kg体质量),每天灌胃1次,连续7 d。末次给药2 h后,除正常对照组外其他各组小鼠腹腔注射0.1%四氯化碳花生油溶液(10 mL/kg体质量),收集各组小鼠血液和肝脏,采用全自动生化分析仪测定小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)含量,测定小鼠肝组织中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量和超氧化物歧化酶(SOD)的含量。显微观察各组小鼠肝组织病理学改变情况。结果与正常对照组比较,模型组小鼠血清ALT、AST含量均升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组小鼠比较,红果小檗果乙醇提取物低、中、高剂量组小鼠血清ALT、AST含量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与正常对照组比较,模型组小鼠肝组织SOD、GSH-PX含量降低,MDA含量升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,阳性对照组、红果小檗乙醇提取物低、中、高剂量组小鼠肝组织SOD、GSH-PX含量升高,MDA含量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。显微观察显示正常组小鼠肝小叶结构正常,肝细胞无坏死、变性和炎性浸润等现象;模型组肉眼可见小鼠肝脏肿大、充血、质地脆弱、肝小叶界限模糊、肝索排列紊乱,肝细胞变性,被大量炎性细胞浸润;红果小檗乙醇提取物低、中、高剂量组小鼠肝小叶结构恢复正常,肝细胞形态正常,炎性细胞浸润减少。结论红果小檗果乙醇提取物对CCl4致小鼠急性化学性肝损伤具有一定的保护作用。

黑果小檗果皮色素稳定性研究

以黑果小檗果皮为试验材料提取色素,并就光照、温度、还原剂、氧化剂、食品添加剂、pH值和不同金属对色素稳定性的影响进行了初步研究。结果表明:黑果小檗色素为花色素苷类物质。对光具有一定的耐性;有良好的热稳定性(T≤60℃);氧化剂和还原剂对色素稳定性的影响较大,应避免与氧化剂和还原剂接触;食品添加剂食盐、葡萄糖、柠檬酸对色素稳定性的影响不大,且食盐和柠檬酸对色素有增色作用;pH值对色素的影响较大,在酸性条件下黑果小檗色素较稳定,在碱性条件下色素结构可能被破坏,呈现墨绿色;色素对Mg^(2+)、Ca^(2+)相对稳定,Fe^(3+)、Fe^(2+)、Cu^(2+)使色素吸光度产生较大波动,对色素稳定性的影响较明显。

黑果小檗果总花色苷提取工艺优化及热降解动力学研究

以花色苷提取率为考查目标,在单因素试验的基础上,采用响应面法(Response Surface Method,RSM)优化黑果小檗果总花色苷(Berheris heteropoda Schrenk total anthocyanins,BHSTA)酶-超声波辅助提取工艺。提取工艺优化结果表明,对花色苷提取率影响最大的是温度,其次是酶用量和pH值。BHSTA提取的最佳工艺参数为:pH值3.95,提取温度52.68℃,酶添加量2.33%。在此试验条件下花色苷的提取率为1.37%。BHSTA的降解动力学研究表明,BHSTA的降解符合一级反应动力学模型。相同pH值下,随着温度的升高,BHSTA的降解速率常数呈现指数型增长趋势,半衰期呈现指数型下降趋势。pH值5.0时活化能最小,为33.36 kJ/mol,pH值1.0时活化能最大,为46.50 kJ/mol。相同温度时,反应速率常数随着pH值的升高呈现指数型增大的趋势,半衰期t1/2则呈现指数型减小的趋势。

黑果小檗果实的色素提取与纯化工艺

目的:研究黑果小檗果实中色素的提取工艺以及大孔树脂分离纯化的工艺条件及参数。方法:采用静态吸附实验和动态吸附实验等考察了大孔树脂AB-8对黑果小檗果实色素纯化效果及影响因素。结果:0.5%HCl-70%乙醇6倍量,超声提取3次,每次0.5 h;采用动态吸附,上样浓度为1.612 g生药/g树脂(湿重),去离子水除杂洗脱6BV后,洗脱剂pH为4的70%乙醇洗脱6BV,流速为1 mL/min,进行吸附和洗脱,测定黑果小檗果实中色素的色价可达725.78±9.90,洗脱率可达到95%以上。结论:该方法高效、稳定、可行,为黑果小檗果实中色素分离纯化工业化生产提供基础数据。

Plackett-Burman设计和响应面法优化黑果小檗果实总黄酮超声提取工艺

目的优化黑果小檗干燥果实总黄酮超声提取工艺。方法采用Plackett-Burman(PB)设计评价影响超声提取黑果小檗果实总黄酮得率的因素,筛选了3个主要影响因素,经响应面分析法进一步优化,最终得到最佳提取条件。结果黑果小檗干燥果实总黄酮超声提取最优工艺条件为:乙醇浓度64%、液料比29∶1、提取时间32min、超声功率350 W、提取次数3次,总黄酮提取率为6.213%。结论该方法简便、合理,适用于黑果小檗干燥果实中总黄酮的提取。

小檗果提取物对奶牛乳房炎常见致病菌体外抑菌和抗炎作用

为探索小檗果提取物的体外抑菌和抗炎功效，本试验以乙醇和水为溶媒提取了小檗果粗体物，进行体外抑菌试验，检测对奶牛乳房炎常见致病菌即大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌及链球菌的抑菌活性，并采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀法观察抗炎作用。结果显示，小檗果水提物和醇提物对3种致病菌均有抑菌作用，达到高敏或中敏，抑菌圈直径为（10．69±0．16）～（16．89±0．67）mm。与模型组相比，小檗果水提物和醇提物低剂量组明显抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀（P〈0.01），抑制率均高于58％。本试验为小檗果进一步开发利用提供试验依据。

黑果小檗总黄酮含量测定及体外抗氧化活性研究

目的测定黑果小檗各部位中总黄酮含量并评价其体外抗氧化活性,为有效利用黑果小檗资源提供参考。方法采用紫外分光光度法测定黑果小檗中总黄酮的含量,并通过DPPH、羟自由基和氧自由基清除法评价黑果小檗提取物的抗氧化活性。结果黑果小檗果实中总黄酮含量较高;其次为茎皮及根皮;果实提取液的抗氧化活性较强,茎皮次之。结论黑果小檗提取物具有一定的抗氧化能力,本研究可为天然抗氧化剂的开发提供依据。

黑果小檗色素提取工艺条件的研究

本实验研究了从黑果小檗(Berberis heteropoda)果皮中提取色素的工艺,结明表明,料液比为1:6,浸提温度60℃,浸提时间2h,pH1,浓度为50%的乙醇提取剂为最佳浸提条件。

黑果小檗红色素的提取及其稳定性研究

以黑果小檗果实为实验材料提取色素,并从光、温度、还原剂、氧化剂、防腐剂和不同金属对色素稳定性的影响进行了初步研究,结果表明:该色素属于花色苷类;适合在酸性条件下使用(pH＜7);耐光性好;对热有一定的耐受性:对低浓度氧化剂H_2O_2(＜0．1%)有一定耐受性;对还原剂Na_2SO_3耐性差;对防腐剂苯甲酸钠耐性差;蔗糖对色素无不良影响;大多数金属离子对色素无不良影响,而Fe^(3+)、Fe^(2+)、Sn^(2+)和高浓度Pb^(2+) (＞50．0×10^(-3)mol/L)对色素有较大影响。

气质联用法测定黑果小檗中脂肪酸

采用气质联用法(GC/MS法)分析黑果小檗果实中脂肪酸组成,样品用氢氧化钾-甲醇法甲酯化,并用归一化法计算含量。结果显示,黑果小檗果实的中主要含有十四烷酸(肉豆蔻酸)、2-甲基庚酸(异辛酸)、十六烷酸(棕榈酸)、十六碳烯酸(棕榈油酸)、16-甲基十七烷酸(异硬脂酸)、十七烷酸、十八烷酸(硬脂酸)、十八碳烯酸(油酸)、十八碳二烯酸(亚油酸)、十八碳三烯酸(亚麻酸)、二十烷酸(花生酸)、二十碳烯酸、二十一烷酸、二十碳三烯酸、二十二烷酸(山嵛酸)、二十四烷酸(木蜡酸甲酯)等多种脂肪酸。该方法测定黑果小檗中多不饱和脂肪酸,方便、快速、准确。

近红外漫反射光纤光谱法快速鉴别新疆黑果小檗皮

目的探讨近红外漫反射光纤光谱技术结合主成分分析和聚类分析对黑果小檗皮产地及真伪进行鉴别。方法建立主成分分析(PCA)及聚类分析模型来鉴别黑果小檗皮。结果主成分分析及聚类分析可将收集到的39份黑果小檗皮样本分为3大产区,所建立的定性鉴别模型对其余14份预测集样本进行鉴别,分析结果与实际所属基本一致。表明利用近红外光谱法对黑果小檗皮进行产地及真伪鉴别可行(P<0.05)。结论该模型鉴定黑果小檗皮快速、准确可靠、测量重现性好、样品测量一般无需预处理且分析过程不破坏样品。

新疆特色药材黑果小檗薄层鉴别方法研究

目的建立新疆特色药材黑果小檗的薄层鉴别系统。方法以盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱为对照品,对黑果小檗药材进行薄层鉴别,并考察不同展开系统、不同点样量、不同薄层板、不同检视方式、不同温度、不同湿度对黑果小檗药材薄层色谱的影响。结果以盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱为对照品,以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-氨水(6∶3∶2∶1.5∶0.5)为展开系统,黑果小檗药材薄层鉴别特征明显,专属性强。结论该方法可行,重复性好,可作为黑果小檗药材的薄层鉴别方法。

超声提取黑果小檗中花色苷工艺研究

目的优选黑果小檗花色苷的最佳超声提取工艺。方法以pH示差法测定花色苷含量作为评价指标,利用单因素轮转法和正交试验法确定花色苷的提取时间、提取次数、提取溶剂及花色苷稳定性等参数。结果乙醇浓度70%,盐酸浓度0.8%,料液比1∶25(g∶mL)提取时间20 min,提取次数4次,花色苷含量最高。常温避光提取及储存提取液中花色苷的含量较常温自然光提取及储存高。冷藏避光储存条件下的黑果小檗果皮粉末在提取花色苷时,提取液中花色苷的含量较常温避光储存条件下稳定。结论该方法提取黑果小檗中的花色苷稳定可行,提取、储存黑果小檗花色苷时应避光,储存黑果小檗果实粉末时应冷藏避光。

黑果小檗中总黄酮的超声提取及其含量测定

[目的]建立一种测定黑果小檗中总黄酮含量的方法。[方法]用超声波提取黑果小檗果实中的总黄酮,然后以芦丁为标准品,采用分光光度法测定总黄酮含量。[结果]芦丁浓度与吸光度的线性关系方程为A=0.010 74 C+0.009 214(r=0.999 2),表明芦丁在7.5～60.0μg/ml范围内与吸光度值线性关系良好,平均回收率为93.6%;测得黑果小檗果肉、籽粒中总黄酮的含量分别为0.78%和1.89%。[结论]该方法快速、简便、可靠,可用于黑果小檗中总黄酮含量的测定。