新疆黑果小檗根皮、根木质部中阿魏酸提取工艺条件的优化比较研究

目的采用HPLC法测定并对比新疆黑果小檗根皮与根木质部中阿魏酸的含量,并优化其提取工艺条件。方法 (1)通过不同溶剂提取黑果小檗根皮、根木质部,根据其含量测定结果选定最优提取溶剂。(2)在单因素试验结果基础上,采用响应曲面法优化阿魏酸的提取工艺。结果 (1)确定乙醇提物中阿魏酸含量最高。(2)确定最佳提取条件。平行试验3次,新疆黑果小檗根皮、根木质部中的阿魏酸在提取溶剂为60%乙醇,提取温度为50℃,料液比为1∶15,提取次数为3次的提取条件下提取效率最高,其中,根皮中阿魏酸提取量0.71%(RSD=1.24%),根木质部中阿魏酸提取量0.32%(RSD=1.51%)。结论本提取工艺稳定可行,提取效率较高。

维药小檗根传统切制工艺与产地趁鲜切制工艺的比较研究

目的:探讨建立维药小檗根饮片的产地趁鲜切制工艺。方法:采用HPLC法测定两种不同工艺切制小檗根饮片的小檗碱含量,测定不同工艺切制小檗根饮片的浸出物、炮制时间。结果:小檗根趁鲜切制饮片的小檗碱含量、浸出物的含量明显高于传统切制工艺切制饮片(36.9%、22.4%),工艺周期由9 d缩短为3 d,小檗碱损失最大的工序是润药。结论:建议小檗根在产地加工时趁鲜洗净、切薄片、干燥。不仅解决了小檗根药材不易干燥,饮片加工炮制时软化时间长、有效成分容易流失的问题,而且降低了生产成本,保证了饮片质量的稳定。

响应面法优化新疆黑果小檗根皮中总生物碱提取工艺

目的:采用响应面法优化新疆黑果小檗根皮中总生物碱提取工艺。方法:以总生物碱提取率为考察指标,通过单因素试验,确定提取次数为3次,提取温度:80℃。采用响应面法优化乙醇浓度、提取时间、料液比3个因素。结果:得到最佳提取工艺为:乙醇体积分数50%,料液比1:51(g·m L^(-1)),提取时间2 h,提取次数3次,提取温度80℃。在该条件下,平行3次验证实验,总生物碱提取率为4.01%(RSD%=1.12%),可达到预测值的99.01%。结论:采用响应面法优化的黑果小檗根皮中总生物碱提取工艺稳定可行。

小檗根药材质量标准研究

目的:建立小檗根药材的质量控制方法。方法:采用显微鉴别法鉴别小檗根药材粉末的显微特征;采用薄层及高效液相色谱法鉴别及测定盐酸巴马汀及盐酸小檗碱。结果:制定了小檗根药材显微鉴别方法;制定了薄层鉴别方法及高效液相色谱法测定两种生物碱含量。结论:以上3种方法简便、准确,适用于小檗根药材的质量控制。

新疆黑果小檗根薄层定性鉴别及含量测定方法的建立

目的:建立黑果小檗根部化学成分的定性鉴别及含量测定方法。方法:采用薄层色谱法考察不同展开条件、展开剂比例、点样量、检视方式、薄层板、展开温度以确定最佳薄层色谱展开系统,并对黑果小檗根部化学成分进行定性鉴别及含量测定。结果:确定氯仿-乙酸乙酯-甲酸(4:4. 5:1. 5),薄层板为GF254硅胶薄层板,点样量为1μL,检测波长为254、366 nm,展开温度为25℃为最佳展开条件,黑果小檗根皮及根木质部中均含有盐酸巴马汀、盐酸小檗碱且盐酸巴马汀、盐酸盐酸小檗碱分别在0. 0211~3. 798、0. 675~4. 05范围内具有较好的线性关系(r=0. 9995、r=0. 9942),其中超声提取的根皮水提物中盐酸巴马汀含量最高,含量为2. 2920 mg/g;超声提取的根皮甲醇提取物中盐酸小檗碱含量最高,含量为3. 7640 mg/g。结论:本实验所建立的薄层展开方法稳定可行,含量测定方法操作简便、重现性好。

新疆黑果小檗根皮和根木质部提取物的体外抑菌活性比较研究

目的研究新疆黑果小檗根皮和根木质部提取物的体外抑菌活性。方法通过牛津杯法研究新疆黑果小檗根皮、根木质部醇提物不同萃取部位对肠道致病菌大肠杆菌、粪肠球菌、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌的抑菌活性,同时采用试管双倍稀释法测定新疆黑果小檗萃取物对4种致病菌的最小抑菌质量浓度。结果黑果小檗根萃取物对大肠杆菌、铜绿假单胞菌、粪肠球菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径分别为6.43~14.11,6.10~11.50,6.50~10.15和10.20~26.46mm;最小抑菌质量浓度分别为1.811~15.188,8.750~14.488,7.244~30.375和0.409~5.613mg·mL-1。根皮对绿脓杆菌和粪肠球菌的抑菌活性优于根木质部(P<0.05),根皮和根木质部对大肠杆菌及金黄色球菌的抑菌活性相当(P>0.05)。结论新疆小檗根皮和根木质部萃取液具有抑制肠道致病菌生长的作用。

黑果小檗根不同极性部位抑制肠痉挛和抗炎活性的体外研究及组分初探

目的通过体外实验探究黑果小檗根(Berberis heteropoda Schrenk roots)不同极性部位的肠道解痉作用和抗炎活性;通过成分对比分析,初步推测潜在活性组分。方法(1)用60%乙醇和水分别提取黑果小檗根的主要成分,再对乙醇提取物依次进行系统溶剂萃取(石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和饱和正丁醇),得到不同极性萃取物。(2)采用高效凝相色谱法(HPLC法)对不同极性提取物中代表性组分进行定量分析并比较其含量差异。(3)通过小鼠离体结肠平滑肌实验,研究不同提取物对正常和痉挛状态下肠道肌肉张力的影响,筛选具有抑制肠痉挛作用的活性部位。(4)采用脂多糖(LPS)诱导RAW 264.7细胞建立体外炎症细胞模型,通过不同提取物干预后测定细胞上清液中一氧化氮(NO)和白介素-6(IL-6)含量,筛选抗炎活性部位。(5)采用半制备液相色谱法对潜在活性部位进行成分分离,并用核磁共振法和质谱法进行成分定性。结果(1)HPLC成分对比分析表明,饱和正丁醇萃取物中木兰花碱、非洲防己碱、药根碱的含量高于其他萃取物,二氯甲烷萃取物中小檗胺、阿魏酸、巴马汀和小檗碱的含量高于其他萃取物。此外,发现乙酸乙酯萃取物中含有明显区别于其他萃取物的的未知峰(峰面积占比60%)。(2)小鼠结肠张力的体外实验结果表明,二氯甲烷萃取物对正常小鼠结肠张力有明显的抑制作用。此外,二氯甲烷萃取物可缓解乙酰胆碱和氯化钡引起的肠痉挛。(3)炎症细胞模型干预实验的结果表明,乙酸乙酯萃取物的抗炎作用明显优于其他萃取物。(4)从乙酸乙酯萃取物中分离得到了先前发现的未知峰化合物,结果鉴定为阿魏酸-4-O-葡萄糖苷。结论研究发现黑果小檗根二氯甲烷部位同比其他部位的肠道解痉作用最强,同时乙酸乙酯部位是发挥抗炎作用的主要活性部位,以此丰富了黑果小檗根已知的药理作用。此外,从黑果小檗根中首次分离得到了化合物:阿魏酸-4-O-葡萄糖苷,为黑果小檗根的物质基础研究提供了参考。

大叶小檗根抗炎镇痛作用的研究

目的研究大叶小檗根的水、乙醇提取物对小鼠的抗炎镇痛作用。方法采用二甲苯、巴豆油致小鼠耳廓炎症、扭体法和热板法制作疼痛模型来观察大叶小檗根水、乙醇提取物的抗炎镇痛作用。结果大叶小檗根的水、乙醇提取物能显著抑制二甲苯和巴豆油引起的小鼠耳廓炎性肿胀,明显降低冰醋酸致小鼠的扭体次数,提高小鼠的痛阈值。结论大叶小檗根的水、乙醇提取物均具有较好的抗炎镇痛作用。

新疆黑果小檗根部化学成分初步研究

目的对新疆黑果小檗根部化学成分进行系统的初步定性研究,在此基础上,对根皮和根心(根除去根皮的部分)不同溶剂提取物中总生物碱含量进行对比研究。方法利用不同极性溶剂对新疆黑果小檗根皮和根心进行50℃超声提取,通过天然药材未知化学成分系统预试验方法,初步推断新疆黑果小檗根皮和根心中所含化学成分;以盐酸小檗碱为对照品,采用紫外分光光度法初步检测根皮和根心不同溶剂提取物中总生物碱含量。结果黑果小檗根皮及根心可能含有氨基酸、蛋白质、生物碱、糖类、有机酸、酚类及鞣质类、内酯、皂苷类、黄酮类等成分。根据含量测定结果可知:根皮和根心0.4%硫酸水提物总生物碱含量最高,根皮0.4%硫酸水提物总生物碱含量为3.76%,根心0.4%硫酸水提物总生物碱含量为1.5%。不同溶剂提取物总生物碱含量顺序为醇提物>酸提物>丙酮提取物>水提物>乙酸乙酯提取物>石油醚提取物。结论初步确定新疆黑果小檗根皮和根心含有多种化学成分,其中总生物碱含量较高。随着溶剂极性增大,提取率呈增加趋势,总生物碱含量也随之增高。

民族药黑果小檗根的质量控制

目的:建立黑果小檗根的质量控制标准,为药用植物资源的开发利用提供科学依据。方法:薄层色谱法、水分测定法、灰分测定法及HPLC法。结果:以盐酸小檗碱和盐酸药根碱为对照品,确定了黑果小檗根药材的薄层色谱鉴别方法、检查项测定了黑果小檗根的水分、灰分、酸不溶性灰分;同时暂定其活性成分盐酸小檗碱含量不得少0.60%。结论:通过研究制定了黑果小檗根药材的质量控制标准。

大叶小檗根不同萃取物的抗炎活性研究

目的研究大叶小檗根石油醚、乙酸乙酯萃取物对小鼠耳廓炎症的抑制作用。方法采用二甲苯、巴豆油致小鼠耳廓炎症,观察并计算小鼠耳肿胀度,确定大叶小檗根的抗炎活性。结果大叶小檗根的乙酸乙酯萃取物能明显抑制二甲苯和巴豆油引起的小鼠耳廓炎性肿胀;石油醚萃取物对巴豆油引起的小鼠耳廓炎性肿胀有明显的抑制作用。结论大叶小檗根乙酸乙酯萃取物的抗炎活性强于石油醚萃取物,大叶小檗根具有一定的抗炎活性。

大叶小檗化学成分分析

[目的]分析大叶小檗根的化学成分.[方法]采用各种色谱方法分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定化合物的结构.[结果]从大叶小檗根的石油醚、二氯甲烷、醋酸乙酯萃取物中分离鉴定了11个单体化合物,分别为肉蔻豆酸(1)、菜油甾醇(2)、巴马汀(3)、β-谷甾醇(4)、豆甾醇(5)、小檗碱(6)、药根碱(7)、表小檗碱(8)、棕榈酸(9)、豆甾-4-烯-3-酮(10)及非洲防己碱(11).[结论]化合物1~5和8~11为首次从该植物中分离得到.

大叶小檗的研究进展

大叶小檗(Berberis amurensis Rupr)为小檗科小檗属植物,在我国北部地区分布较为广泛,在俄罗斯、朝鲜、日本亦有分布。大叶小檗主要含有生物碱类、苯丙素类、甾体、有机酸类等化合物,在抗炎、抑菌、抗肿瘤等方面具有良好的药理活性。大叶小檗以根入药,小檗根为我国常用的传统中药。本文通过查阅中外文献,对大叶小檗的本草考证、资源分布、化学成分及药理作用进行综述,旨在为进一步开发利用大叶小檗及制定小檗根药材质量标准提供参考依据。

UHPLC-ESI-QE-Orbitrap-MS结合TRIF/p-IκBα/NF-κB/NLRP3信号通路的蛤蚧定喘丸抗炎机制与活性成分探讨

目的探讨蛤蚧定喘丸的抗炎机制,推测蛤蚧定喘丸发挥抗炎功效的关键活性成分。方法依次采用石油醚、无水乙醇、超纯水对蛤蚧定喘丸不同极性的化学成分进行提取;利用2、4、8、16、32、64、128μg·mL^(-1)的醚提物、醇提物、水提物处理RAW264.7细胞,分别通过CellTiter-Lumi(CTL)发光法和钙黄绿素/碘化丙啶(Calcein/PI)染色法检测细胞活力,确定提取物的安全浓度;利用各提取物处理脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞炎症模型,通过格里斯试剂(Griess)测定一氧化氮(NO)释放量,通过酶联免疫吸附(ELISA)法检测白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分泌,筛选具有抗炎活性的提取物。利用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱技术(UHPLC-ESI-QE-OrbitrapMS)对有抗炎活性的提取物进行物质分析,推测抗炎活性物质及作用机制,并利用蛋白免疫印迹法(Western blotting)进一步验证其对硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)/p-核因子κB抑制蛋白α(p-IκBα)/核因子-κB(NF-κB)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)信号通路相关蛋白表达的影响。结果醚提物、醇提物、水提物在质量浓度低于64μg·mL-1时均未影响细胞活力。与模型组相比,醇提物在质量浓度大于8μg·mL-1时显著降低NO释放量(P<0.05),醚提物和醇提物在质量浓度高达64μg·mL-1时仍未产生抗炎效果;醇提物显著降低了TNF-α、IL-1β的释放量(P<0.05)。醇提物中共分析出36种主要化学成分。经Western blotting实验验证,与模型组比较,蛤蚧定喘丸醇提物对RAW264.7细胞炎症模型内NLRP3炎症小体、β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、p-IκBα的表达均有显著降低作用(P<0.05),而对TXNIP、Toll样受体4(TLR4)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路蛋白的影响并不显著。结论蛤蚧定喘丸通过抑制TRIF/p-IκBα/NF-κB/NLRP3信号通路以及iNOS、MCP-1的合成发挥抗炎功效,推测巴马汀、麻黄碱、伪麻黄碱、小檗碱、甘草素、药根碱、小檗红碱为其抗炎活性成分。