小檗胺对人多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞作用的体外研究

目的:探讨小檗胺(berbamine,BBM)体外诱导人多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞的凋亡及其机制。方法:采用MTT法测定不同浓度BBM作用后细胞增殖抑制率并求得IC50;DNA凝胶电泳、流式细胞术分析细胞凋亡;RT-PCR检测BBM作用前后细胞p53、p21和GADD45 mRNA的表达;Western blot检测BBM作用前后细胞p53、JNK、p-JNK及c-Jun蛋白表达。结果:BBM抑制RPMI 8226细胞增殖呈剂量依赖性(P<0.05),48 h的IC50值为3.83μg/ml;8μg/ml BBM作用RPMI 8226细胞24 h后DNA凝胶电泳可见典型梯形条带,流式细胞术检测细胞凋亡率由1.07%升高至24.84%;BBM作用后细胞p53、p21及GADD45γmRNA表达上调,同时伴有胞核内p53蛋白上调及p-JNK、c-Jun蛋白活化。结论:BBM能抑制RPMI 8226细胞的增殖,其作用可能通过活化GADD45/JNK信号通路诱导细胞凋亡。

小檗胺诱导白血病细胞株NB4细胞凋亡及其机制的研究

目的:探讨小檗胺对白血病细胞系NB4生长的影响及其机制。方法:体外培养人白血病细胞株NB4细胞,经不同浓度小檗胺处理不同时间后,MTT法检测药物对NB4细胞的抑制作用;细胞形态学观察和DNA琼脂糖电泳检测细胞凋亡;流式细胞仪检测DNA含量及细胞周期;巢式PCR及RT-PCR检测PM L/RARα融合基因及Surv iv in基因表达及流式细胞仪检测Caspase3阳性表达率。结果:经不同浓度小檗胺处理不同时间后,NB4细胞生长出现明显的抑制,并呈现明显的时间剂量依赖性,48 h IC50为3.860μg/m l;细胞形态学观察可见细胞凋亡现象,DNA琼脂糖电泳显示典型的凋亡梯形图;流式细胞仪检测发现细胞凋亡率明显增加,经48 h作用后,凋亡率从2.83%增至12μg/m l时的58.44%;虽未发现药物作用后PM L/RARα基因表达量的改变,但检测到NB4细胞经药物作用后Surv iv in基因表达量的减少和Caspase3表达的增加,Caspase3阳性率从对照组的2.06%增至12μg/m l时的70.89%。经相关性分析,随着细胞Surv iv in表达水平的下降和Caspase3表达水平的增高,NB4细胞凋亡率相应地增高。结论:小檗胺对NB4细胞有增殖抑制作用,诱导细胞凋亡可能是其抗肿瘤作用的重要机制之一,但不是通过作用于NB4细胞特异性融合基因PM L/RARα发挥作用的,其抗凋亡的可能分子机制之一是抑制Surv iv in基因的表达和增加Caspase3的表达。

小檗胺对慢性粒细胞白血病细胞抑制作用的机制研究

目的:探讨小檗胺诱导慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞凋亡的机制。方法:体外培养K562细胞株细胞,经8μg/ml小檗胺处理不同时间后用Western blot检测细胞内总NF-κB、核内NF-κB和IκBα、pIκBα、IKKα、A20蛋白表达。结果:随着小檗胺处理时间的延长,细胞内总NF-κB无变化,但核内的NF-κB表达下降,半定量比值从处理前的59.2%,随着作用时间的延长,逐步下降为31.4%,19.7%,4.1%,0%。同时出现pIκBα、IKKα表达下调,A20表达增高。结论:小檗胺通过NF-κB途径诱导慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞凋亡的机制,可能涉及抑制NF-κB的核转位和转激活,推测其作用与小檗胺降低K562细胞bcr-abl基因的表达有关。

小檗胺诱导体外培养的视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞凋亡的研究

目的 观察探讨小檗胺（BBM） 对体外培养的视网膜母细胞瘤（RB）HXORB44细胞增生和凋亡的影响及其机制。方法 体外培养RB细胞，取对数生长期细胞分为BBM处理组和空白对照组。BBM处理组分别加入2、4、8、16、32 mg/L BBM，作用24、48、72 h后, 四氮唑（MTT）比色法检测细胞增生活性；4、8、16 mg/L BBM作用24 h后，流式细胞仪检测细胞早期细胞凋亡率,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞内B细胞淋巴瘤/白血病-2（bcl-2）、Bax蛋白的表达，比色法检测半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）的活性。结果 BBM以时间剂量依赖方式显著抑制RB细胞的增生（24 h：F＝70.547,48 h： F＝603.438,72 h： F＝577.521；P＜0.01）。作用24、48、72 h，半数抑制浓度分别为25.26、10.94、6.25 mg/L。空白对照组和不同浓度BBM处理组细胞坏死率分别为（1.25±0.45）%、（4.10±2.95）%、（4.39±0.21）%、（10.54±4.38）%，与空白对照组比较,差异有统计学意义（F＝6.527，P＜0.05）；晚期凋亡和坏死率分别为（2.13±0.71）%、（5.45±2.31）%、（9.86±3.18）%、（11.10±1.70）%，与空白对照组比较,差异有统计学意义（F＝10.845，P＜0.05）；早期凋亡率分别为（0.51±0.26）%、（2.68±0.35）%、（5.97±0.50）%、（11.22±1.17）%，与空白对照组比较,差异有统计学意义（F＝144.976，P＜0.01）。BBM剂量依赖性地减少bcl-2 的表达，增加Bax的表达，降低bcl-2/Bax比值，增强Caspase-3活性，差异均有统计学意义（bcl-2：F＝835.726，Bax：F＝111.963，Caspase-3：F＝298.058；P＜0.01）。结论 BBM体外能抑制RB细胞增生并诱导细胞凋亡或坏死。其机制可能与下调bcl-2 的表达，上调Bax的表达，并增强 Cspase-3的活性有关。