小泛素化修饰基因-1多态性与非综合征型唇腭裂的相关性研究

目的探讨小泛素化修饰基因-1(SUMO-1)rs6709162、rs7599810和rs7580433位点单核苷酸多态性与非综合征型唇腭裂(NSOC)的相关性。方法收集宁夏地区NSOC患者208例、患者父亲189例、患者母亲176例、完整核心家系(患者及其父母)172个进行研究,并收集正常新生儿284例作为对照。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测SUMO-1基因多态位点rs6709162、rs7599810和rs7580433基因型,并进行病例对照分析、传递不平衡检验(TDT)和以家系为基础的相关性检验(FBAT)。结果病例对照研究发现:SUMO-1基因rs7599810位点的TT基因型频率在唇裂、腭裂组与对照组比较有统计学差异(P=0.01,P=0.01)。TDT分析结果:rs7599810位点的T等位基因在唇腭裂组中存在过传递(P=0.00);rs6709162位点的C等位基因在腭裂和唇腭裂组中存在过传递(P=0.00,P=0.01);rs7580433位点的G等位基因在唇裂组中存在过传递(P=0.05)。FBAT分析结果:rs7599810位点TT基因型和T等位基因的分布具有统计学意义(P=0.00,P=0.00)。结论 SUMO-1基因多态性与NSOC存在相关性。

深低温停循环脑损伤中GluK2受体小泛素化修饰蛋白2/3化的作用机制研究

目的探究Glu K2受体小泛素化修饰蛋白(SUMO) 2/3化在猪模型深低温停循环(DHCA脑损伤中的作用机制。方法将18只中华小型猪随机分为体外循环组(CPB组)、DHCA组和选择性脑灌注(SACP)组,每组6只。建立猪DHCA和SACP模型,术后2 h处死猪留取海马区脑组织标本。蛋白质印迹法检测海马区脑组织中SUMO2/3化水平、Glu K2、p-MLK3、MLK3、p-JNK3、JNK3表达;免疫共沉淀检测Glu K2 SUMO2/3化的程度以及Glu K2和MLK3蛋白之间的相互作用。TUNEL法检测海马区脑组织凋亡情况;免疫组织化学染色检测Bax、Bcl-2和Caspase-3表达。结果 DHCA组海马区脑组织中SUMO2/3和Glu K2表达[(1. 438±0. 011)、(1. 965±0. 107)]较SACP组[(1. 220±0. 039)、(1. 372±0. 196),均P <0. 05]和CPB组[(0. 443±0. 025)、(0. 986±0. 181),均P <0. 01]明显增加。DHCA组海马区脑组织中Glu K2-SUMO2/3和Glu K2-MLK3表达较其他2组明显增加(均P <0. 01)。DHCA组p-MLK3/MLK3和p-JNK3/JNK3表达较其他2组明显增加(均P <0. 05)。TUNEL检测发现DHCA组海马区神经元凋亡最明显,凋亡率为64. 8%,较CPB组(15. 8%)和SACP组(47. 0%)明显增加(均P <0. 001)。免疫组织化学结果显示DHCA组海马区脑组织中Bax和Caspase-3表达较CPB组和SACP组明显增加,而Bcl-2表达较其他2组明显减少。结论 DHCA脑损伤时可能通过激活Glu K2受体发生SUMO2/3化,增加Glu K2受体和下游MLK3蛋白的相互作用,激活MLK3发生磷酸化,进一步激活下游的JNK3启动凋亡信号。

DAXX在胃癌中的表达定位及其小泛素化修饰对胃癌恶性表型的影响

目的:研究死亡结构域相关蛋白(DAXX)在胃癌中的表达与定位,并探讨小泛素化修饰(SUMO)的DAXX对胃癌细胞恶性表型的影响。方法:生物信息学分析肿瘤基因图谱(TCGA)计划中DAXX在胃癌中的表达与预后;RT-qPCR检测各胃癌细胞系中DAXX的mRNA水平。收集2017年1月至6月温州医科大学附属第二医院育英儿童医院胃癌术后患者20对癌和癌旁组织,免疫组化检测DAXX的表达。CCK-8和划痕实验分别检测DAXX对细胞增殖和迁移的作用。Western blot检测DAXX的核-浆蛋白分布及其对SUMO-2/3的影响。结果:生物信息学分析显示,DAXX在胃癌中的表达水平高于癌旁组织,但其表达高低对患者生存预后无影响(P=0.52);免疫组化结果显示胃癌组织DAXX的阳性率高于癌旁,且在细胞核中高表达;RT-qPCR证实胃癌细胞系中DAXX的mRNA表达量升高。CCK-8和划痕实验提示DAXX明显抑制细胞增殖(P<0.05)并促进细胞迁移(P<0.01)。Western blot显示DAXX核-浆蛋白分布差异,且存在SUMO-2/3修饰。结论:DAXX在胃癌组织中高表达,且主要定位于细胞核。DAXX可能通过与SUMO-2/3结合,抑制胃癌增殖和促进转移。

小泛素化修饰调控糖尿病心肌病发生与发展

糖尿病心肌病(DCM)是糖尿病最常见的大血管并发症之一,主要特点是心肌舒张和收缩功能障碍,末期出现心力衰竭,严重影响患者的生活质量。DCM的病理生理机制复杂,心肌葡萄糖和脂质代谢紊乱增强氧化应激,激活各种炎症途径,导致心肌重塑,严重影响患者心功能。近年来,随着研究者对表观遗传的深入认识,翻译后修饰(PTM)成为研究热点。小泛素化修饰(SUMO)作为PTM修饰的一种,其在DCM发生发展中的地位和作用引起了研究者的重点关注。现就SUMO化修饰与DCM最新研究进展进行综述。

APP/PS1转基因鼠脑内小泛素化修饰物-1上调可能参与阿尔茨海默病老年斑形成和神经突起变性的调节

小泛素化修饰物(small ubiquitin-related modifier,SUMO)是一类重要的类泛素蛋白,研究显示一些神经退行性疾病相关蛋白可以被SUMO化修饰。本文旨在观察APP/PS1转基因阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)鼠中SUMO-1表达及修饰的变化,并探讨SUMO-1与AD病理的关系。采用免疫印迹的方法检测12月龄的APP/PS1转基因AD鼠脑内SUMO-1表达及修饰的变化,同时用免疫共沉淀及免疫荧光的方法研究AD鼠脑内SUMO-1与tau、APP和Aβ的关系。结果显示:(1)与正常野生型小鼠相比,AD鼠脑内SUMO-1表达及其修饰的蛋白增加,同时伴有泛素化蛋白的增加;(2)AD鼠大脑皮层的RIPA可溶蛋白组份中,SUMO-1修饰的tau增加,而AT8抗体识别的磷酸化tau的SUMO-1修饰减少,但422位点磷酸化tau的SUMO-1修饰没有明显改变;(3)SUMO-1与磷酸化tau、APP及Aβ免疫荧光双标显示,在AD鼠脑内SUMO-1可在老年斑的中部和周围分布,并且SUMO-1与AT8识别的磷酸化tau在老年斑周围的变性神经突起中有相对较多的共存,但与APP、PS422识别的磷酸化tau和Aβ的共定位很少。以上结果提示,SUMO-1在APP/PS1转基因AD小鼠脑内表达增加,并可能参与变性神经突起及老年斑形成的调节。

丙泊酚通过促进小泛素化相关修饰蛋白1表达增加抑制神经母细胞瘤细胞系钙内流水平变化

目的立足于小泛素化相关修饰蛋白（SUMO）化修饰这一蛋白质翻译后修饰的全新角度，通过研究丙泊酚对细胞蛋白SUMO化修饰和钙内流的变化探讨丙泊酚的全身麻醉机制。方法采用Western印迹法观察丙泊酚对神经母细胞瘤细胞系（SHSYSY）SUM01化水平变化的影响。并通过脂质体转染法将SUMO特异性蛋白酶（SENP）1导入3×Flag—SUMOlSHSY5Y细胞系降低SUM01化水平，以观察丙泊酚对细胞钙内流变化的影响。采用Fluo一3AM钙离子荧光测定法测定细胞内钙离子浓度。结果以50“mol／L丙泊酚分别孵育3×Flag—SUM01一SHSY5Y细胞系0、30、60、120rain，随着处理时间的延长，SUMO化水平升高，且与蛋白结合状态的SUMO增加，游离态SUMO减少。以5、10、25、50ffmol／L丙泊酚孵育细胞60rain，细胞蛋白SUMO化水平随丙泊酚浓度增加而升高。临床浓度丙泊酚（50Ⅱtool／L）引起细胞钙内流呈双向性变化，在加入丙泊酚的最初数分钟，细胞内钙离子迅速增加，约10～15min达到峰值，后逐渐降低，以45～60min为转折点，随后逐渐低于对照组，与细胞内SUMO化水平变化趋势相同。与0umol／L相比，50、37．5、25ffmol／I。丙泊酚作用60min后细胞内钙离子荧光值显著降低（P值均d0．05），细胞内钙离子浓度明显受到抑制。转入野生型SENPl的细胞中丙泊酚（50~mol／L）对其钙内流影响的双向性消失，细胞内钙离子荧光值与溶剂对照组的差异无统计学意义（P〉O．05）；而在表达突变体SENPl和空载体的细胞中，丙泊酚对钙内流的抑制性影响仍然存在，细胞内钙离子荧光值均显著低于溶剂对照组（P值均d0．05）。结论丙泊酚通过诱导3×Flag—SUM01一SHsY5Y细胞系SUMO化水平表达增加抑制细胞钙内流变化，这也许是丙泊酚发挥抑制效应的全身麻醉机制之一。

核因子κB及其SUMO化调控与糖尿病肺改变

核因子κB(NF-κB)是一种广泛存在于机体各种细胞中的核转录因子,受到外界刺激时可被激活进入细胞核参与炎性反应。小泛素相关修饰物(SUMO)广泛存在于真核细胞中,包括SUMO1、SUMO2、SUMO3和SUMO4 4个成员。SUMO可以与靶蛋白(如IκB)结合,对其进行SUMO化修饰,间接调控NF-κB转录。近年来研究发现,NF-κB在糖尿病及其并发症的发生、发展中起着重要作用。现就NF-κB的结构,信号通路及其调控以及与糖尿病肺脏改变的关系进行综述。

动力相关蛋白1的小泛素化相关修饰物化修饰在脑缺血／再灌注损伤中的作用

背景近年研究发现动力相关蛋白1（dynamin-related protein 1, Drp1）介导的线粒体分裂在脑缺血／再灌注损伤（cerebral ischemia/reperfusion injury, CI/RI）中发挥了重要作用，Drp1的小泛素化相关修饰物（small ubiquitin-related modifier,SUMO） 化修饰能影响自身生物学效应。目的阐述Drp1的SUMO化修饰在CI／RI中的作用。内容分别描述Drp1蛋白、SUMO蛋白、SUMO相关酶（SUMO化酶／去SUMO化酶）及SUMO化修饰对Drp1生物学效应的影响。趋向研究SUMO化修饰影响Drp1的生物学效应的机制，为减轻或治疗CI／RI找到新的靶点或提供新的思路。

SUMO化修饰在肺部疾病中的作用

小泛素（smallubiquitin-related modifier，SUMO）是一种结构上与泛索相似的分子，作为一种重要的翻译后修饰，SUMO化修饰对蛋白质功能有广泛调节作用，包括调节蛋白间相互作用、蛋白转录活性、DNA损伤修复、基因稳定性调节及生物节律等。近年来，SUMO化修饰在肺脏中的作用逐渐被发现，SUMO通过与靶蛋白结合作用于肺，并与肺生物学功能和肺脏疾病有所关联。

人SUMO病毒载体构建及稳转神经母细胞瘤SHSY5Y细胞系的建立

目的构建表达人小泛素化相关修饰蛋白(SUMO)基因的逆转录病毒载体,并观察其稳定感染神经母细胞瘤SHSY5Y细胞后SUMO蛋白的表达情况。方法用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切pcDNA 3.0-HA-SUMO1、pcDNA3.0-HA-SUMO2、pcDNA 3.0-HA-SUMO3质粒,得到3×Flag-SUMOs基因的编码序列,定向插入到pBabe-puro载体中,经扩增、筛选阳性克隆、酶切和测序验证后,转染293T细胞进行病毒包装、扩增、纯化获取逆转录病毒颗粒。将逆转录病毒颗粒感染SHSY5Y细胞,经嘌呤霉素筛选后抗性克隆集落长出。Western blot检测稳定转染的pBabe-3×Flag-SUMOs-SHSY5Y单克隆细胞SUMO1～3的表达。结果 pBabe-3×Flag-SUMOs-puro质粒构建正确。稳定转染的SHSY5Y细胞系3×Flag-SUMOs表达明显增强。结论成功构建了稳定表达SUMO的pBabe-3×Flag-SUMOs-SHSY5Y细胞系。

SUMO化修饰在DNA双链断裂修复中的研究进展

小泛素样修饰蛋白(SUMO)是一种与泛素结构类似的蛋白,其主要参与蛋白的翻译后修饰.SUMO化是指SUMO通过泛素样特异性蛋白酶1(Ulp1)、E1激活酶、E2结合酶和E3连接酶,使自身经历成熟、激活、结合和连接4个步骤最终共价结合至靶蛋白的特定赖氨酸位点上,使靶蛋白活性发生改变,进而参与调节多种细胞功能,如转录调控、胚胎发育调节、细胞应激、维持染色质结构及基因组稳定性等.近年来发现SUMO化修饰也广泛参与DNA的损伤修复,尤其是DNA损伤类型最为严重的DNA双链断裂(DSBs),SUMO几乎参与了其修复的全过程,因此SUMO化修饰在DNA损伤修复中的作用已成为研究热点.对近年来SUMO化修饰调控DSBs修复的研究进展作一综述.