核糖核酸干扰(RNAi)在生物医学研究中的应用

核糖核酸干扰(RNAi)是指一个由双链RNA诱导具有相同碱基序列的靶标RNA降解的现象,它是沉默基因表达的一个十分有效的手段.RNAi导致基因沉默的机制可分为以下两步:首先由核酸酶Dicer切割长的双链RNA形成小片段碱基(19～25)的siRNA.然后,这些siRNA组成一个RNA诱导沉默复合体(RISC),并且siRNA被一个内源激酶磷酸化,双链siRNA打开,让反义RNA引导RISC至其目的信使RNA(mRNA),从而使其目的mRNA内切降解.RNAi技术可以应用到许多生命科学研究方面,如功能基因组以及医药研究.同时讨论了RNAi的一些最新进展如siRNA的设计和导入细胞的方法.

RNA干扰技术及其在放射医学研究中的应用

核糖核酸(RNA)干扰技术是一个经典的基因调控途径,它可使与小片段干扰性RNA序列互补的RNA发生降解。从其应用前景上说,它会成为研究特定基因功能、细胞内防御机制及维护RNA正常功能的重要工具,RNA干扰技术也会被应用于放射医学研究领域,成为辐射敏感性、辐射效应及放射治疗等研究工作的有效工具。

FAK对增生性瘢痕成纤维细胞中信号转导因子表达的影响

目的了解FAKSiRNA对于体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞中与瘢痕增生相关因子整合素α1、TGF-βR、黏着斑激酶(Focal adhesive kinase,FAK)及α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达的影响,探索治疗增生性瘢痕的基因治疗方法。方法设计特异性探针合成FAKSiRNA片段,脂质体法转染体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞,并用荧光定量PCR法(FQ-PCR)检测、比较转染前后成纤维细胞内以上各因子的mRNA表达量的变化。结果转染48h后,FAKmRNA、整合素α1mRNA、TGF-βRmRNA、α-SMAmRNA的表达明显下降(P<0.05)。结论FAKSiRNA可能通过抑制增生性瘢痕成纤维细胞中整合素α1、TGF-βR、FAK和α-SMA的表达,从而抑制瘢痕的增生与挛缩。

靶向下调uPAR抑制大肠癌细胞恶性生物学行为

目的 :通过uPAR特异siRNA靶向下调大肠癌LOVO细胞uPAR的表达,研究大肠癌细胞恶性生物学行为的变化。方法:构建3对uPAR特异siRNA,将其转入大肠癌LOVO细胞,用Western Blot检测uPAR-siRNA干扰效果,选择干扰效率最高的一对siRNA进行后续实验。利用流式细胞术及CCK-8试验检测uPAR-siRNA转染后大肠癌细胞增殖变化,利用Transwell小室实验及划痕实验检测uPAR-siRNA转染后对大肠癌细胞迁移能力变化。结果:大肠癌细胞分别转染3对uPAR-siRNA后,uPAR的表达明显下降,其中uPAR-siRNA-3的干扰效率最高;大肠癌细胞转染uPAR-siRNA-3后,G1期细胞数量明显增加,细胞增殖能力明显下降,细胞迁移数量明显减少及细胞迁移距离明显下降(均P<0.05)。结论:uPAR特异siRNA转染大肠癌细胞LOVO后,明显下调uPAR的表达;uPAR-siRNA转染大肠癌细胞LOVO后,明显抑制大肠癌细胞的增殖和迁移能力。

siRNA干扰EGFR表达对食管鳞癌和腺癌细胞放射敏感性影响

目的探讨siRNA干扰EGFR表达对食管鳞癌和腺癌放射敏感性的影响。方法以食管鳞癌、腺癌细胞系ECa-109、OE-19作为研究对象。脂质体转染化学合成的不同EGFR．siRNA和阴性-siRNA．通过RT—PCR及蛋白印迹法检测转染前后EGFR表达情况。CCK8法分析转染对细胞增殖活性影响。设ECa-109、OE．19细胞空白对照组（01、02组）、单纯照射组（R1、R2组）及EGFR—siRNA照射组（E．R1、E—R2组），单次照射0、2、4、6、8Gy。克隆形成实验计算细胞存活分数及放射增敏比（SERD0值比），流式细胞仪检测EGFR—siRNA联合放射对细胞周期分布和细胞凋亡率影响，单次照射6Gy。结果EGFR-siRNA可明显下调两种细胞EGFR表达，且转染对细胞增殖抑制率〈5％（4．9％、4．5％）。克隆形成实验结果显示E—R1、E-R2组细胞sF值低于01、02组，SERD0值比分别为1．40、1．01。流式细胞术结果显示E—R1组比E-R2组照后G2＋M期比例增加、S期比例下降（P=0．016、0．028），细胞凋亡率也增高（P=0．007）。结论与食管腺癌细胞相比，干扰EGFR表达显著提高了食管鳞癌细胞的放射敏感性。