用蔗糖密度梯度离心法纯化小球隐孢子虫卵囊试验

用蔗糖密度梯度离心法从接种犊牛粪便中纯化小球隐孢子虫卵囊 ,该方法操作简便、快速、经济、获得的卵囊纯度高 ,回收率达 92 .0 % ,适合于国内普通实验室使用。

小球隐孢子虫子孢子表面蛋白CP15/60基因的克隆和序列分析

将小球隐孢子虫子孢子表面蛋白 (CP15 / 6 0 )编码区基因克隆及测序 ,并对其抗原决定簇进行分析。抽提牛源小球隐孢子虫孵囊基因组DNA ,用聚合酶链反应 (PCR)扩增编码CP15 / 6 0的基因 ,然后将其克隆到pMD18_T载体中 ,用双脱氧链末端终止法测DNA序列。结果 ,用PCR扩增获得了CP15 / 6 0的编码区基因 ,并测定了该基因编码区序列。与GenBank比较 ,核苷酸序列同源性为 :98.9% ;推导的氨基酸序列同源性为 :99.3%。

小球隐孢子虫gp15基因的克隆与核苷酸序列分析

为了给小球隐孢子虫 (Cryptosporidium parvum)核酸疫苗的研制提供基因材料 ,用聚合酶链式反应 (PCR)技术 ,从牛源小球隐孢子虫基因组中扩增了子孢子表面蛋白 CP15的 gp15基因 (4 13bp) ,然后将其克隆到 p MD18- T载体中 ,用 Sanger′s双脱氧法对重组质粒中的插入片段进行序列分析。将测得的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列与国外报道的序列进行同源性比较 ,结果表明核苷酸同源性为 99.2 % ,氨基酸同源性为 10 0 %。

小球隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)P15基因的克隆和表达

通过 PCR扩增出小球隐孢子虫 (Cryptosporidium parvum) P1 5基因片段。将该片段连接到克隆质粒载体 p U C1 9的 Bam H 酶切位点上 ,并对其序列进行了测定。结果表明 ,该基因长度为 4 79bp,编码的表面蛋白由 1 4 8个氨基酸残基组成。再将 P1 5蛋白基因片段分别在大肠杆菌和哺乳动物细胞中表达 ,经 SDS- PAGE分析和 Western blot检测 ,结果表明 ,小球隐孢子虫 P1 5蛋白基因在大肠杆菌内获得表达的融合蛋白相对分子质量为 5 0 0 0 0 ;在哺乳动物细胞中 ,重组痘病毒表达的蛋白相对分子质量为 1 80 0 0～ 2 2 0 0 0 ,与直接从自然感染牛小球隐孢子虫分离的 P1

小球隐孢子虫子孢子表面蛋白CP15/60原核表达载体的构建及表达

用XhoI和EcoRI酶分别从pET_2 8a(+)和pMD18_T_15 /6 0质粒中酶切得到线性片段和CP15 /6 0基因片段 ,然后用T4DNA连接酶连接 ,构建重组的CP15 /6 0的原核表达载体 ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)中表达 ,并用SDS_PAGE、ELISA和Westernlot进行鉴定。结果表明构建了CP15 /6 0的原核表达载体 ,得到了一分子量约为 16kDa的融合蛋白 ,占大肠杆菌总蛋白的 4 2 %

断奶仔猪小球隐孢子虫与Ⅱ型猪圆环病毒混合感染

对一群 3月龄腹泻仔猪以常规组织病理学方法诊断出了小球隐孢子虫 (Cryptosporidiumpar vum) ,同时又以免疫组织化学方法证实了具有圆环病毒Ⅱ型 (PCV2 )感染。在有大量小球隐孢子虫寄生的肠道区域 ,其粘膜和粘膜下层存在大量被PCV2感染的细胞。小球隐孢子虫很少为断奶仔猪和生长猪的原发性肠道病原 。

广西2月龄内犊奶牛隐孢子虫感染情况调查

自Tyzzer （1907）首次发现小鼠隐孢子虫（C.muris）以来,国内外学者对隐孢子虫病进行了大量研究,已在人、哺乳动物、禽类、爬行动物和鱼类等多种动物中发现15个种类的隐孢子虫感染^[1-3],其中可感染牛的隐孢子虫种为安氏隐孢子虫（C.an-dersoni小球隐孢子虫（C.parvum）、牛隐孢子虫（C.boris）、小鼠隐孢子虫（C.muris）、犬隐孢子虫（C.ca-nis）、猫隐孢子虫（C.fells）、猪隐孢子虫（C.suis）、鹿样基因型（C.deer-like genotype）和赖氏隐孢子虫（C.ryanae）^[4-5].隐孢子虫对牛的感染与牛的年龄呈正相关性[6].

高营养水平日粮有利于犊牛抵御隐孢子虫病

康奈尔大学兽医学院一项研究表明，高营养水平日粮能降低由小球隐孢子虫引起的新生奶牛犊疾病的影响。该研究发现，与常规日粮相比，饲喂犊牛高营养水平水溶性日粮可以使犊牛更快的止泻，长得更好、饲料效率更佳。事实上，饲喂常规日粮的犊牛体重会减轻，而饲喂高营养水平日粮的犊牛即使有疾病威胁，体重仍会增长。

隐孢子虫生物学特性及保护性单抗制备研究

①发现我国寄生于哺乳类动物隐孢子虫有两种即:鼠隐孢子虫和小球隐孢子虫,其中鼠隐孢子虫为国内首次发现。免疫组化染色发现鼠隐孢子虫与小球隐孢子虫间有共同抗原。②发现鸸鹋、虎和狮子为隐孢子虫宿主新记录、隐孢子虫有较强致病性以及实验动物隐孢子虫感染率较高。③建立了兔和鼠隐孢子虫病动物模型。同时发现腹腔接种隐孢子虫卵囊可使小鼠感染发病。④首次摸清了兔隐孢子虫卵囊排出规律,即每隔6—8d 出现一个高峰期在两个高峰期间时而检出少量卵囊,时而检不出卵囊,兔感染隐孢子虫后无自限性。病理组织学观察发现兔和鼠感染隐孢子虫后有明显慢性胃肠炎病变。