多子小瓜虫PCR和SYBR Green实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

为克服现有小瓜虫病的显微镜检和PCR诊断等方法在该寄生虫的感染早期阶段和环境样本检测中存在的缺陷,建立特异性强、灵敏度高的多子小瓜虫PCR检测方法,实验根据多子小瓜虫线粒体COⅠ序列设计和筛选了一对引物,经过PCR程序优化、特异性、灵敏性验证以及临床和环境样品检测分析,分别建立了普通PCR和荧光定量PCR检测方法。结果显示,本研究获得的检测引物对多子小瓜虫有较高的扩增特异性,对同属纤毛虫类的草履虫、四膜虫和肠袋虫以及常见养殖鱼类宿主异育银鲫、草鱼、尼罗罗非鱼和团头鲂等样本均无扩增;扩增特异性和灵敏度都优于文献报道的方法。其中,普通PCR最低检测的样本浓度为掠食体2.67个/μL,荧光定量PCR在掠食体0.02个/μL时依然能有效检出,荧光定量PCR检测灵敏度高于普通PCR。研究表明,在临床样本和养殖水环境样本检测应用中,基于该引物的两种PCR方法表现出很高的一致性,能有效检出潜伏感染鱼体和养殖水环境中的多子小瓜虫。本研究所建立的多子小瓜虫的检测方法特异性强、灵敏度高,适用于淡水养殖中小瓜虫病的早期诊断和病原体的检测。

刺角瓜嫁接对厚皮甜瓜抗南方根结线虫病及成熟期果实风味、品质的影响

为了明确刺角瓜砧木嫁接对厚皮甜瓜抗南方根结线虫病的效果以及对成熟期果实风味、品质的影响。本研究以厚皮甜瓜黄梦脆为接穗,刺角瓜ZM1、PI1029为砧木,在设施栽培条件下,测定成熟果实的相关品质、芳香物质;以自根甜瓜为对照在盆栽条件下测定根部根结指数。结果表明,两种刺角瓜砧木嫁接甜瓜根部根结指数均低于自根甜瓜,2023年1月1日和2023年1月20日的茎粗高于自根甜瓜;果实维生素C含量、可滴定酸含量均高于自根甜瓜;PI1029为砧木嫁接甜瓜果实单瓜重低于自根甜瓜,而ZM1为砧木嫁接甜瓜果实单瓜重高于自根甜瓜;甜瓜果实中共检出116种芳香物质。两个砧木嫁接甜瓜果实较对照果实芳香物质种类减少;以ZM1为砧木嫁接甜瓜果实酯类、烷类、酸类芳香物质相对含量高于对照果实。由此可见,不同砧木嫁接甜瓜芳香物质成分、含量发生变化,导致共有芳香物质种类、含量的差异以及特有特征成分的存在;以ZM1为砧木嫁接甜瓜的综合性状优于自根甜瓜,ZM1适宜作为黄梦脆的嫁接砧木。

黄颡鱼小瓜虫病诊治

黄颡鱼,俗称黄骨鱼、黄蜂鱼、黄腊丁,其肉质细嫩、味道鲜美、营养丰富,具有一定的药用价值,深受消费者喜爱。随着市场需求量的增加,黄颡鱼人工养殖规模不断扩大。由于黄颡鱼属无鳞鱼类,易受外部环境影响,其养殖过程中的管理疏漏、养殖密度过大、饵料投喂不科学等行为,均会导致病害发生。现于2023年4月6日,在扶绥县龙头乡肖汉村成功诊断及治疗了1例黄颡鱼小瓜虫病。

淡水鱼小瓜虫、黏孢子虫病流行规律及防控措施(下)

四、黏孢子虫的基础生物学特征黏孢子虫大多数寄生在海淡水鱼的组织器官内,其在进化上与后生动物中的刺丝胞动物水螅、水母等有较近的亲缘关系。国内外报道的黏孢子虫种类约2000多种,其中我国报道鱼的寄生黏孢子虫约600多种。黏孢子虫可以广泛寄生在鱼的体表、鳍、鳃、肌肉、脑及内脏器官或神经系统等组织器官。

淡水鱼小瓜虫、黏孢子虫病流行规律及防控措施(上)

一、多子小瓜虫的基础生物学特征多子小瓜虫(Ichthyophthirius multifiliis)隶属于原生动物纤毛门、寡膜纲、膜口目、凹口科和小瓜虫属(Ichthyophthirius),可感染世界范围内几乎所有淡水硬骨鱼。严重感染时鱼体皮肤、鳃覆盖一层小白点,故称“白点病”。病鱼呼吸、渗透压调节等功能受到严重影响;同时,由成虫钻出鱼体所产生的伤口会进一步诱发细菌性继发感染。

瓜绢螟的发生为害及绿色防控

瓜绢螟为鳞翅目螟蛾科绢野螟属,别名瓜螟、瓜野螟,是丝瓜、苦瓜、黄瓜、冬瓜、南瓜等瓜类作物的重要害虫。其成虫于夜间活动,有趋光性,雌蛾在叶背产卵。幼龄幼虫在叶背取食叶肉,使叶片呈现灰白斑,3龄后幼虫常将叶片左右卷起,吐丝将叶或嫩梢缀合,匿居其中取食,使叶片穿孔或缺刻,严重时仅剩叶脉。虫量大时,可将整片瓜地叶片吃光。瓜类坐果后,瓜绢螟幼虫啃食瓜果表皮,逐渐蛀入瓜内,取食皮下瓜肉,严重影响瓜果产量和质量。其老熟幼虫体长约26毫米,胸腹部草绿色,亚背线较粗、白色;成虫体长约11毫米,前、后翅白色透明,前翅前缘和外缘、后翅外缘呈黑色宽带。

安徽省首次发现肾形肾状线虫危害瓜蒌

肾形肾状线虫Rotylenchulus reniformis Linford&Oliveira是作物根部半内寄生植物线虫,被列为危害最严重的十大植物线虫之一。本文对安徽省新发生瓜蒌肾形线虫病的病原进行鉴定并对其生活史进行初步研究。利用形态学和分子生物学将病原线虫鉴定为肾形肾状线虫R.reniformis,系统发育分析表明其属于A型。肾形肾状线虫在瓜蒌根部完成生活史需要24 d,每条雌虫平均产卵64粒,繁殖系数R=(11.12±0.62)。本文系首次报道肾形肾状线虫在安徽省发生危害,瓜蒌为肾形肾状线虫的新寄主。本研究为进一步掌握肾形肾状线虫的分布区域及潜在寄主及综合防控提供了理论依据。

锦鲤幼鱼小瓜虫病防治方法

锦鲤(Cyprinus carpio L.)是一种名贵的观赏性鱼类,隶属于辐鳍鱼纲、鲤形目、鲤科、鲤属,被称为“水中活宝石”和“会游泳的艺术品”,其祖先为红色鲤,起源于我国广西、江西、浙江的龙州锦鲤、兴国红鲤、金鲤,在日本经改良培育和人工选育后,现已形成丰富的品种体系[1]。因锦鲤具有色彩鲜艳、适应性强、饲养简便、食性较杂、易于繁殖、对养殖环境要求低等特点,加之其独具的阳刚之美,深得国人的喜爱,在渔业转型发展、休闲渔业提档升级中发挥了重要作用,在我国观赏鱼贸易和消费中占据了重要地位。随着我国人民精神方面的追求不断提高,锦鲤等观赏鱼的经济价值和附加值也在持续升高。

几种理化因子对多子小瓜虫包囊孵化的影响

多子小瓜虫(Ichthyophthirius multifiliis)的生活史分为滋养体、包囊体及掠食体3个阶段(倪达書等,1960)。小瓜虫病有着分布广泛、暴发性强、致死性高等特点(Matthews R A,2005;Buchmann K等,2001)。目前对多子小瓜虫的研究主要集中在致病机理和免疫预防方面。顾泽茂等(2019)发明了一种多子小瓜虫的传代培养方法,但因小瓜虫与鱼共存于水环境中.

13种植物甲醇提取物对瓜蚜生物活性的影响

【目的】为了明确植物提取物对瓜蚜(Aphis gossypii Glover)的生物活性,为植物源农药开发利用提供新途径。【方法】本研究采用喷雾法施药,测定13种植物甲醇提取物对瓜蚜的室内杀虫活性与趋避活性;将具有良好活性的黄连木(P.chinensis)和川牛膝(C.officinalis)植物提取物制备成乳油,通过田间试验测定制剂防效。【结果】在杀虫活性测定中,处理72 h后,黄连木甲醇提取物对瓜蚜的活性最高,校正死亡率达到了81.11%;在对瓜蚜趋避活性测定中,毛泡桐(P.tomentosa)甲醇提取物对瓜蚜24 h的驱避率达到75.14%,薄荷(M.pulegium)、糙苏(P.umbrosa)和川牛膝甲醇提取物对瓜蚜的趋避率均高于50%;在不同植物甲醇提取物混配活性测定试验中,黄连木甲醇提取物与川牛膝、糙苏、毛泡桐、短序荚蒾(Viburnum brevipes)甲醇提取物的混配效果优于其他组合;试验研制了20%黄连木和川牛膝甲醇提取物乳油,配方为黄连木甲醇提取物10%、川牛膝甲醇提取物10%、二甲基亚砜47%、农乳500#25%、NP-2乳化剂8%。田间试验方法测定20%黄连木川牛膝甲醇提取物乳油对瓜蚜的田间防效,以10%吡虫啉可湿性粉剂为阳性对照,试验结果表明20%黄连木川牛膝甲醇提取物制剂药后14 d防治效果达到了75.26%,与阳性对照无显著差异。【结论】黄连木、糙苏、毛泡桐和川牛膝的甲醇提取物对蚜虫具有一定的生物活性,值得进一步研究。

一例岩原鲤小瓜虫病的诊治

岩原鲤俗称岩鲤、墨鲤或水子,广泛栖息于水流缓慢、岩石较多的底层水体,是生活在长江上游和金沙江中下游的广温性鱼,其肌间刺少、肉质鲜嫩,具有较高的营养价值,深受消费者的青睐。随着岩原鲤人工繁殖技术成熟、规模化人工养殖技术的发展,由于养殖密度过大、生产过程中管理不当等因素导致岩原鲤病害频发,造成养殖效率低下,严重威胁到岩原鲤养殖业的健康发展。

一例虹鳟小瓜虫病诊断与治疗

2022年7月中旬,洛阳市洛宁县一家养殖场养殖的虹鳟暴发了鱼病。经过7 d综合治疗,病情得以控制。现就该病发病过程及诊疗方法介绍如下。1养殖场状况该场以水库自流水作养殖水源,水流量0.4 m^(3)/s,p H值为8.0~8.5,水温14℃,溶解氧质量浓度为6.5~7.5 mg/L。渔场有水泥鱼池25口,每口规格120 m^(2),共3000 m^(2),水深0.8 m。各池有独立的进排水、排污和增氧设施。

36种天然植物提取物抗多子小瓜虫活性研究

研究36种天然提取物对多子小瓜虫的体外和体内杀虫活性。利用水提法和醇提法制备36种天然植物的提取物,构建体外和体内杀小瓜虫药效模型,研究36种天然植物提取物抗小瓜虫的活性。实验结果表明,牛蒡子、小果博落回、丁香、博落回、大黄等7种天然植物提取物可100%杀灭小瓜虫的掠食体和包囊。其中,大黄乙醇提取物杀虫效果最佳,其浓度达到10.0 mg·L^(-1)时,可100%抑制小瓜虫包囊的分裂孵化;其浓度为5.0 mg·L^(-1)时,可100%杀灭小瓜虫掠食体。浸泡使用30.0 mg·L^(-1)大黄乙醇提取物后,草鱼鱼体感染小瓜虫的数量显著减少,存活率可达65.8%,而对照组存活率仅为30.0%。大黄乙醇提取物对多子小瓜虫具有较好的杀灭作用。

牛蒡子杀小瓜虫活性成分研究

牛蒡子是菊科植物牛蒡的一种干果,它被广泛应用于驱散致病风热、促疹、止疮咽喉、排毒、消肿。牛蒡子的主要活性成分是木质素类化合物,被证实具有抗氧化、抗炎和抗菌作用,此外,其也被证实具有抗肿瘤活性。在水产动物上,王高学等报道其具有较好的杀指环虫的作用,同时利用活性追踪试验发现其主要杀虫活性成分为牛蒡子苷和牛蒡子苷元。

青海湖裸鲤小瓜虫病治疗实例

小瓜虫病也称白点病,是由多个小瓜虫侵入鱼的皮肤及鳃部引起的一种鱼的侵袭性寄生虫病。小瓜虫的适宜水温为15~25℃,此病多在初冬、春末和梅雨季节发生,尤其在缺乏光照、低温、活饵的情况下容易流行。工厂化恒温循环水车间中青海湖裸鲤鱼苗培育水温一般控制在16~18℃,由于高密度养殖,投饵率高,缺乏光照,换水量大,外部进水中的小瓜虫病原体携带率较高,故易发小瓜虫病。

瓜实蝇的绿色防控

瓜实蝇,属于双翅目实蝇科,是一种钻蛀性害虫,是我国二类植物检疫对象,主要为害葫芦科蔬菜。一、形态特征瓜实蝇分为成虫、卵、幼虫、蛹4个虫态。成虫体形似蜂,黄褐色,长7~9毫米,宽3~4毫米;前胸左右及后胸有褐色纵带纹,翅膜质、透明有暗褐色斑纹,腹部背面有“T”形黑色纹路,产卵器扁平,坚硬。

抗南方根结线虫黄瓜砧木的筛选

搜集国内外黄瓜嫁接砧木资源108份,对其抗南方根结线虫能力进行鉴定,筛选抗或耐南方根结线虫的砧木品种,探讨用抗根结线虫的瓜类野生种作砧木的可能性。结果表明,以野生瓜棘瓜为砧木的黄瓜嫁接苗在嫁接亲和性、抗南方根结线虫能力、产量、株高和果实品质等方面,优于目前生产上大面积推广的以黑籽南瓜和火凤凰为砧木的黄瓜嫁接苗。

鱼类小瓜虫病的研究进展

小瓜虫病又叫白点病,是由多子小瓜虫Ichthyophthiriusmultifiliis寄生于各种淡水鱼和观赏鱼的体表和鳃上引起的。该病由于危害严重、治疗困难,所以一直是鱼病专家研究的热点。本文中作者就目前小瓜虫病的病原学、病理学、免疫学,以及防治方法的研究进展作一综述,旨在为国内小瓜虫病的研究提供一些借鉴。

丁香酚的分离及其杀多子小瓜虫活性研究

利用不同极性大小的溶剂石油醚、乙酸乙酯、氯仿、甲醇回流提取丁香制备粗提物,进行杀灭多子小瓜虫幼虫和包囊的药效活性追踪,确定丁香杀虫的活性部位为石油醚提取部分,进而利用硅胶柱层析和中压制备液相等分离技术结合活性追逐试验追踪分离丁香石油醚提取物（对多子小瓜虫幼虫和包囊的100%致死质量浓度分别为50mg/L和80mg/L）,最终分离获得一种杀虫活性物质,经质谱、核磁氢谱、核磁碳谱等多种波谱分析技术确定该活性物质为丁香酚。体外杀虫结果表明,丁香酚对多子小瓜虫具有较强的杀灭作用,其对幼虫15min、1h、2h、3h和4h的半数致死质量浓度分别为6.21（5.85~6.65）mg/L、3.50（3.24~3.84）mg/L、2.90（2.62~3.22）mg/L、2.33（2.10~2.50）mg/L和2.15（1.98~2.32）mg/L,对幼虫4h的100%杀灭的质量浓度为3.5mg/L,对包囊6h的100%杀灭质量浓度为3.5mg/L。结果表明,丁香酚是一种具有较好开发前景的杀多子小瓜虫药物。

20种中草药杀灭离体小瓜虫的药效研究

选用20种不同中草药,研究其不同浓度的水提物对多子小瓜虫(Ichthyophthirius multifiliis)成虫、包囊和幼虫的离体杀灭实验效果。结果显示:0.1 g/L槟榔和乌梅对各个阶段的虫体均有杀灭效果,0.1 g/L大黄和黄芩1 h内对幼虫有杀灭效果,1.0 g/L浓度能杀灭成虫和包囊,表明槟榔、乌梅、大黄、黄芩的杀虫效果相对较好;贯众、乌药、枳壳等13种中药浓度达到10 g/L、50 g/L或100 g/L才具有一定杀虫作用,但效果不很显著;熟地黄、茯苓和黄芪即使浓度达到100 g/L时,也不能杀灭虫体。