白色链霉菌Ys6-101产盐霉素的发酵条件优化

盐霉素作为药物饲料添加剂在养禽业得到广泛应用和普及,但由于其主要生产来源存在耗油量大且成本高的难题,盐霉素的工业化生产受到较大阻碍。为优化盐霉素发酵过程工艺,提高盐霉素工业得率,本文基于实验室筛选菌株—白色链霉菌Ys6-101,通过改变一级种子液和二级种子液的消后pH和接种量,对盐霉素种子培养条件进行了探究和优化。结果表明,种子消后pH6.80和接种量18%分别为白色链霉菌种子培养阶段的最适pH和接种量,且发酵工艺条件优化后,即一级种子消后pH6.80,接种量20mL/110 L,二级种子消后pH6.80,接种量18%,发酵液中盐霉素效价提高了12.5%。因此,选择合适的接种量和消后pH不仅可以发挥发酵罐的最大效率,还有利于缩短发酵周期,提高发酵效价,降低生产成本。

白色链霉菌(Streptomyces albus)HS1产豆豉纤溶酶发酵条件优化

从豆豉中筛选的白色链霉菌(Streptomyces albus)HS1,产生的豆豉纤溶酶具有较好的体外溶栓效果.利用单因子和正交试验得到该菌株产酶的最佳发酵条件:大豆粉0.3%,蔗糖8%,MgSO40.15%,KH2PO40.2%,NaCl0.9%,生豆浆6.67%;150mL三角瓶装量为30mL;接种量2%;接种龄36h,初始pH6.5,摇床转速150r/min,28℃振荡培养60h;其发酵上清纤溶活性可达207.92I-U/mL.与优化前99.28IU/mL相比,提高了1.09倍.该菌株产DFE的模式为滞后合成型.

来源于链霉菌Streptomyces fradiae var.k11的抗蛋白酶甘露聚糖酶的基因克隆与鉴定

通过设计简并引物和TAIL-PCR的方法从Streptomyces fradiaevar.k11中克隆得到一个β-l,4-甘露聚糖酶编码基因manS221,其全长1 359 bp,编码452个氨基酸,前端28个氨基酸为预测信号肽。构建表达载体pET-28a-manS221并转化大肠杆菌BL2l(DE3),特异性表达manS221基因,重组的甘露聚糖酶通过Ni-NTA亲和层析纯化。酶学性质分析表明,重组甘露聚糖酶最适温度为52℃,最适pH值为6.0,在pH5.0～9.0的范围内有良好的稳定性,并且对中性蛋白酶具有高抗性。这些优良的性质使得ManS221在食品、饲料和纺织工业生产中具有良好的应用前景。

链霉菌Streptomyces tz92发酵液的抗真菌谱及稳定性

研究了链霉菌Streptomyces tz92发酵液的抗真菌谱及稳定性。结果表明,菌株Streptomyces tz92发酵液对水稻纹枯病菌、番茄灰霉病菌等31种植物病原真菌的抑菌圈直径在20mm以上,其中对水稻纹枯病菌的抑菌效果最好,抑菌圈直径达52.45mm;发酵液中的抗菌物质对温度变化、光照、紫外光以及在碱性条件下都比较稳定,但在强酸环境中不稳定;菌株Streptomyces tz92连续传接10代,抑菌活性仍然稳定。

梵净山土壤链霉菌Streptomyces sp.FJS 31-2生产的Ⅲ型聚酮类化合物

研究特殊生境梵净山土壤来源链霉菌Streptomyces sp.FJS31-2次级代谢产物,为微生物药物开发提供结构复杂新颖物质来源,也为其衍生物的合成提供先导物。通过薄层层析、反复正(反)相硅胶柱层析等技术对Streptomyces sp.FJS31-2次级代谢产物纯化分离;利用质谱、核磁共振波谱技术进行结构鉴定。从Streptomyces sp.FJS31-2发酵产物分离得到3个化合物,结合质谱、核磁共振波谱技术进行结构解析,鉴定为2-(2'S-羟基丙基)-7-羟基色原酮(1)、Aloesone(2)和3,4-dihydro-3-(2-oxo-propyl)-3,6,8-trihydroxy-1(2H)-naphthalenone(3),都为III型聚酮类化合物。化合物1~3是首次从放线菌家族中分离鉴定得到天然产物。

链霉菌Streptomyces candidus粗提物促进白血病细胞株K562凋亡的研究

观察链霉菌Streptomyces candidus发酵产物对白血病细胞株K562的抑制作用。采用MTT法和流式细胞术(Annexin V-FITC双染法)分别检测链霉菌粗提物(0.5 mg/mL、1.0 mg/mL、1.5 mg/mL、2.0 mg/mL及4.0 mg/mL)处理K562细胞从24 h,48 h及72 h 3个时间段所发生的凋亡。结果发现,链霉菌粗提物可促进K562细胞凋亡。随着链霉菌粗提物可作用浓度的升高,K562细胞的凋亡率逐渐升高;随着链霉菌粗提物可作用时间的延长,K562细胞的存活率也逐渐降低。表明链霉菌粗提物可显著促进白血病细胞株K562细胞凋亡。

卡那霉素链霉菌(Streptomyces kanamyceticus)抗噬菌体菌株的筛选

安徽朝阳化工厂在卡那霉素发酵生产中曾多次出现噬菌体感染。1977年春,我们从卡那霉素链霉菌的异常发酵液中分离出了噬菌体。电子显微镜研究说明,这是一种蝌蚪状的噬菌体。应用亚硝基胍或紫外光诱变并结合噬菌体处理,筛选得若干对噬菌体具有抗性的菌株,其中某些抗性菌株的卡那霉素产量在摇瓶发酵中大约比对照高百分之十六。

梵净山土壤来源链霉菌Streptomyces sp.FJS11-2次级代谢产物分析及抗菌活性研究

为了分析链霉菌Streptomyces sp. FJS11-2菌株次级代谢产物及次级代谢产物抗菌活性筛选,采用UPLC-DAD-HRMS方法对其次级代谢产物进行组分分析.用纸片扩散法对菌株次级代谢产物进行抗菌活性测试,测试菌株为金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌、粪肠球菌及布氏杆菌. UPLC-DAD-HRMS分析结果表明,该菌株含有多种未知代谢产物.且抗菌活性研究结果表明,该菌株代谢产物具有抗金黄色葡萄球菌、布氏杆菌活性. UPLC-DAD-HRMS分析结果及抗菌活性结果,为后续从该菌株次级代谢产物中发现活性良好、结构新颖的化学成分奠定基础,同时该方法也避免化学成分重复发现.

白刺链霉菌(Streptomyces albospinus)CT205产环己酰亚胺含量测定方法的建立

建立白刺链霉菌(Streptomyces albospinus)CT205代谢产环己酰亚胺含量的检测方法,为菌株CT205的开发利用提供技术支持。采用高效液相色谱法(HPLC)、生物活性法和分光光度法等三种检测手段分别测定菌株CT205发酵上清液及粗提物中活性物质环己酰亚胺(Cycloheximide)的含量。三种方法测定环己酰亚胺标准品均具有较好的线性关系,其中相关系数R_(HPLC)^(2)法(0.9992)>R_(生物活性法)^(2)(0.9937)≈R_(分光光度法)^(2)(0.9965)。HPLC法及生物活性法分别测定CT205发酵液及粗提物中活性物质含量分别为72.87、1555.70及66.15、1259.00μg/mL,HPLC法与生物活性法测定的发酵上清液中活性物质含量误差在+6.72μg/mL。HPLC检测方法的准确性及灵敏度均高于生物活性法,适用于样品含量的准确测定,生物活性法适用于菌株诱变筛选及条件优化实验产生的大批量样品的测定及比较,分光光度法不适用检测杂质含量较多的样品。

高产ε-聚赖氨酸白色链霉菌的复合诱变选育研究

为了进一步提高ε-聚赖氨酸的产量,本实验以白色链霉菌SA为出发菌株,采取紫外照射复合氯化锂(15W,25s,0.5%LiCl)诱变选育及0.025mol/L亚硝酸诱变选育,得到一株具有遗传标记AEC的抗性突变高产菌株UN2-71,在液体摇瓶发酵培养基中,ε-聚赖氨酸产量达到1.64g/L,较出发菌株提高57.7%。

白色链霉菌产木聚糖酶规律及其耐热耐碱性的初步研究

该文采用白色链霉菌为实验菌种,在不同诱导产酶培养基上经过2 40h的振荡培养,探索其产酶时程规律.结果表明,不同的诱导底物诱导产生的最大木聚糖酶活不等,其中木粉的诱导效果好于纯木聚糖,复合底物的诱导效果好于单一底物.该菌在筛选出的最佳诱导产酶培养基上培养14 4h后达到产酶高峰,粗酶液酶活可达到45 66U mL .对该酶进行高温及碱性处理的结果表明,它具有较好的耐热耐碱性,在pH 7 0下反应表现最高活性,同时在90℃下保温3 0min后酶活残留达83 46%

白色链霉菌聚赖氨酸抑菌作用的研究

筛选到1株聚赖氨酸(PL)产生菌白色链霉菌(Streptomyces albus)。发酵液经过Amberlite IRC-50离子交换粗分离和Sephadex G-25凝胶层析精制,得到纯化的白色链霉菌聚赖氨酸(PL110)。SDS-PAGE分析其分子量为5kDa。应用牛津杯法分析PL110对多种病原菌的抑制作用并测定最小抑菌浓度(MIC)。抑菌稳定性实验表明,高温加热后Streptomyces albus所产生PL110的抑菌作用没有下降;其在低pH值条件下有较好的抑菌效果。最后,应用扫描电镜初步探索了聚赖氨酸的抑菌机理。

娄彻氏链霉菌(Streptomyces rochei)对铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)的抑制作用

为寻找安全高效的抑制蓝藻方法,以娄彻氏链霉菌(Streptomyces rochei)为出发菌株,验证了其在不同浓度(1×105个/mL、1×106个/mL、1×107个/mL)、不同温度(25℃、35℃)、不同pH值(7、7.5、8)下对铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)的抑制作用。结果表明,娄彻氏链霉菌在35℃、pH值为7.5~8时的抑藻作用较强,其合适的抑藻浓度为1×106~107个/mL。

产溶菌酶白色链霉菌的筛选及鉴定

从广西各地土壤中取样,利用添加金黄色葡萄球菌的LB培养基初筛,然后用含金黄色葡萄球菌的营养盐平板复筛,所得突变株经摇瓶发酵后测定其用蛋白酶K处理前后的粗酶液活力变化,筛选到一株溶菌酶产生菌RJ-36b。通过菌株形态学和16S rDNA保守序列分析,鉴定其为白色链霉菌。对其发酵条件的初步研究表明,在32℃、200 r/min发酵60 h时粗酶液活力最大,达到108 U/mL。

海洋来源链霉菌M10抗白色念珠菌活性物质研究

对从大连海域沉积物样品中分离得到的海洋放线菌进行活性筛选,获得了1株对白色念珠菌具有良好拮抗活性的菌株M10.基于16S rRNA的系统发育分析表明,M10菌株与分离自植物根际土壤的模式菌种摩洛哥链霉菌(Streptomyces marokkonensis)DSM 41918T的亲缘关系最近.对M10菌株的发酵产物进行活性追踪,M10菌株拮抗白色念珠菌的活性物质存在于乙酸乙酯相中,在低于60℃时具有较好的热稳定性,在pH值介于3～8之间具有良好的酸碱稳定性,但pH值升至9～12时活性明显下降.采用溶剂萃取、柱色谱层析及制备HPLC等方法对M10菌株发酵液中的有机相活性物质进行了分离,得到2种纯化合物A和B,其最小抑菌浓度分别为0.125、0.250μg/cm3;红外光谱分析表明A和B组分可能是不饱和酮酯类和不饱和苯衍生物.本文首次报道了海洋来源的摩洛哥链霉菌近缘菌株抗白色念珠菌活性物质的分离纯化,可为进一步开发利用海洋来源的新型抗真菌药物库提供参考.

白色链霉菌分批发酵ε-聚赖氨酸的动力学分析

发酵过程动力学分析是实现发酵过程优化与控制的关键因素之一。通过运用Sigmoid模型,对白色链霉菌生产ε-聚赖氨酸的分批发酵过程进行分析,拟合得出底物消耗、菌体生长和产物形成的动力学方程,模拟得到的动力学曲线与试验值相符,可为ε-聚赖氨酸生产的分批发酵法和补料分批发酵法提供理论依据。

白色链霉菌乙酰木聚糖酯酶基因的克隆及生物信息学分析

乙酰木聚糖酯酶可以水解乙酰化木聚糖中的O-乙酰取代基团,消除该基团对木聚糖酶水解的空间阻碍作用,增强木聚糖酶对木聚糖的亲和力和降解能力。以白色链霉菌基因组为模板,利用简并PCR和TAIL-PCR扩增获得长约741 bp阅读框片段,编码247个氨基酸。生物信息学分析表明,该多肽片段具有AXE1家族蛋白保守区域;与已知的乙酰木聚糖酯酶蛋白C端区相比,相似性较高,二级和三级结构空间排布特点极为相似;初步判定该多肽片段为白色链霉菌乙酰木聚糖酯酶的C端区域。

白色链霉菌发酵液中赖氨酸的测定

对天然食品防腐剂ε-聚L‐赖氨酸的发酵液中赖氨酸浓度的测定方法进行了研究。结果显示:分光光度法测定白色链霉菌发酵液中的赖氨酸时适用的测量范围是0.075mg/mL～0.200mg/mL,反应液加热时间20min以上,反应液的最大吸收波长480nm～482nm。发酵液中如果添加脯氨酸对测定结果影响最为明显。

抗白色念珠菌的海洋来源链霉菌L131的鉴定及活性物质的初步纯化

使用卤化酶简并引物对海洋来源的链霉菌进行了基因筛选,共得到了3株阳性菌株,并发现L131和S077菌株具有抗白色念珠菌活性.其中阳性菌株L131的16S rRNA序列与灰白链霉菌(Streptomyces canescens)DSM 40001T具有99%的相似性,但L131菌株在Bennett培养基上菌落凸起,表面褶皱,产白色孢子和淡黄色可溶性色素,不能以阿拉伯糖、果糖作为惟一碳源,与模式菌株存在着明显差异.L131菌株的抗白色念珠菌活性物质在40℃以下,pH值介于5～10范围内活性稳定,且极性大于乙酸乙酯.以AB-8为吸附树脂,首先使用40%(V/V)甲醇洗去未吸附的杂质,然后使用100%(V/V)甲醇进行洗脱,可得到初步纯化的活性物质,其对白色念珠菌的最小抑菌浓度为32.00μg/cm3.上述研究结果可为抗白色念珠菌药物的开发提供参考.

白色链霉菌发酵ε-Polylysine动力学研究

利用白色链霉菌（StreptomycesAlbusKD-11）为出发菌株在30L全自动发酵罐中进行ε-PL分批发酵动力学研究。基于L0gistic方程、Luedeking-Piret方程、类似Luedeking-Piret方程建立TStreptomycesAlbusKD-11菌体生长、ε-PL产物合成和底物葡萄糖消耗的动力学模型。利用Origin8．1软件对模型参数进行非线性拟合，建立的模型拟合程度R2均大于O．980，拟合良好。当葡萄糖初始浓度在45-55g/L范围内，实验数据与模型预测值平均相对误差小于8％，适用性良好。表明该动力学模型对指导ε-PL的发酵工艺优化具有指导意义。