小眼虫的核骨架研究

小眼虫细胞经轻度超声处理、选择性抽提后，利用ＤＧＤ包埋－去包埋剂电镜技术及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析技术对其核骨架、核纤层进行了研究。结果显示：细胞核内存在一个不被ＤＮａｓｅ所降解和热三氯醋酸所去除的纤维蛋白性网架结构；核的周围有一层明显的核纤层结构；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析表明其核纤层有两种阳性蛋白成分，一为相当于高等真核细胞核纤层蛋白 ｌａｍｉｎ Ｂ的强阳性成分，另一为相当于 ｌａｍｉｎＡ的弱阳性成分，但无相当于ｌａｍｉｎ Ｃ的成分。本文认为小眼虫这种低等的单细胞真核生物已具有了核骨架、核纤层结构，其核纤层的蛋白组成应该代表了核纤层进化历程中早期的一个阶段。

小眼虫的着丝粒蛋白检查

为了从起源与进化的角度考察着丝粒蛋白，我们从比酵母更低等的原生生物着手，检查它们的着丝粒蛋白。另文我们已报道了对四膜虫研究的结果，本文报道的是对小眼虫（Ｅｎｇｌｅｎａｇｒａｃｉｌｉｓ）的检查。我们的结果表明：眼虫细胞核里存在的ＡＣＡ抗原的分子量，包括了用ＡＣＡ血清在高等生物中检出来的ＣＥＮＰ－Ａ、ＣＥＮＰ－Ｂ、ＣＥＮＰ－Ｃ和ＣＥＮＰ－Ｄ这几类基本的着丝粒蛋白组分。作免疫荧光染色后，细胞核呈很强的阳性反应，但分辨不出前着丝粒小点。核仁不被荧光染色，除了核仁外似乎整个核都被染色。这可能反映了抗原的分布在核内不是集中成点状的。经过制备核骨架的程序处理后，细胞核仍为阳性（尽管荧光较弱）。如此看来，眼虫至少已有相当大一部分的ＡＣＡ抗原是与核骨架结合着的。对分离的细胞核作相应的抽提处理后再作免疫印迹检查，得到的阳性反应带也证明了这一点。

二氯化镉对小眼虫细胞的毒性作用

目的分析小眼虫细胞Z株和SMZ株对二氯化镉的毒性反应特点。方法采用Koren-Hutner细胞培养液培养小眼虫细胞,制成细胞悬液接种于96孔培养板,二氯化镉染毒,浓度为6.25-800.0μM。于染毒培养后的24h和48h,用FLUOstarOPTIMA多功能微板读取仪分别于波长610nm和490nm处读取小眼虫细胞吸光度(ABS)和细胞增殖活性(MTS),光镜下观察形态学变化。结果二氯化镉浓度为6.25μM和12.5μM时即可对小眼虫细胞的SMZ和Z株细胞的增殖有明显的毒性作用,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),对Z株细胞24、48h后的ABS及24h低于200μM组的MTS检测未见明显改变,与对照组比较差异无统计学意义;染毒后48h光镜下观察小眼虫细胞Z株和SMZ株均可见V形、星形及多形细胞。结论小眼虫细胞对受试物浓度变化的反应是SMZ株较Z株敏感,Z株细胞对二氯化镉显示一定程度的耐受。

小眼虫(Euglena gracilis)中微管组织中心与微管体系的构建

利用电镜观察小眼虫 (Euglenagracilis)微管组织中心和口咽部位的精细结构。发现小眼虫微管体系是以鞭毛根为微管组织中心 ,从微管组织中心 (Microtubuleorganizingcenter,MTOC)的外围区域呈排状向上发出 ,逐步添加微管至 4 0对止 ,并通过储蓄泡逐步形成环绕沟道 (Canal)的微管支撑层。支撑层两根一组的微管单位向外延伸形成细胞表面的沟嵴结构。

小眼虫藻Δ~8-脂肪酸脱氢酶基因的克隆及其在酿酒酵母中的表达

Δ8途径是合成多不饱和脂肪酸的替代途径,Δ8-脂肪酸脱氢酶是该途径的关键酶之一。根据已报道的Δ8-脂肪酸脱氢酶基因设计引物,分别从小眼虫藻基因组DNA和cDNA中扩增得到该基因片段,序列分析表明:结构基因长1266bp,编码421个氨基酸;该基因没有内含子,比已经报道的Δ8-脂肪酸脱氢酶基因长6bp,并且N末端序列也有所不同。利用酿酒酵母的载体pYES2.0构建Δ8-脂肪酸脱氢酶表达载体pYEFD,并转化到营养缺陷型酿酒酵母菌株INVSc1中,在选择培养基中筛选得到酿酒酵母转化菌株YD8。YD8在合适的培养条件下,添加外源底物二十碳二烯酸和二十碳三烯酸并诱导基因表达。脂肪酸甲酯气相色谱分析表明小眼虫藻Δ8-脂肪酸脱氢酶基因在酿酒酵母中获得了高效表达,将二十碳二烯酸和二十碳三烯酸分别转化成二高-γ-亚麻酸和二十碳四烯酸,其底物转化率分别达到了31.2%和46.3%。