雄激素调控大鼠阴茎海绵体组织中eNOS表达的分子机制

目的:研究雄激素是否通过蛋白激酶B-3(AKT3)、Ⅰ类磷脂酰肌醇-3-激酶的p110催化亚单位(PIK3CA)、钙调蛋白(CALM)、小窝蛋白1(CAV1)调控大鼠阴茎海绵体组织内皮型一氧化氮合酶(e NOS)的表达,并影响阴茎勃起功能。方法:8周龄健康雄性SD大鼠36只,随机均分为6组:4周对照组(A组)、6周对照组(B组)、4周去势组(C组)、6周去势组(D组)、4周去势+睾酮(T)替代组(E组)、6周去势+T替代组(F组)。C、D、E、F组切除双侧睾丸及附睾,1 d后E、F组隔日1次丙酸睾酮3 mg/kg皮下注射,其余各组等量植物油皮下注射。4周后(A、C、E组)、6周后(B、D、F组)分别检测各组大鼠海绵体内压(ICP_(max))/平均动脉压(MAP)、血清T,通过免疫组化法及Western印迹法分别测定e NOS、P-e NOS、AKT3、PIK3CA、CALM、CAV1在各组大鼠阴茎海绵体中的表达。结果:各组实验大鼠体重、MAP无显著差异。血清T值和ICP_(max)/MAP比值:去势组(C、D组)较对照组(A、B组)及去势+T替代组(E、F组)极显著降低(P均<0.01),且去势6周组(D组)较去势4周组(C组)显著降低(P均<0.05),去势+T替代组(E、F组)及对照组(A、B组)各组间无显著差异。免疫组化结果显示:e NOS、Pe NOS主要表达在血管内皮细胞胞膜和海绵窦血管腔内;AKT3、PIK3CA、CALM、CAV1主要表达于血管内皮细胞胞质和胞膜,少数表达于平滑肌细胞。e NOS、P-e NOS、AKT3、PIK3CA、CALM、CAV1Western印迹结果显示:去势组(C、D组)与对照组(A、B组)、去势+T替代组(E、F组)相比极显著降低(P均<0.01),去势+T替代组(E、F组)与对照组(A、B组)相比无显著差异,且6周去势组(D组)比4周去势组(C组)表达显著降低(P均<0.05),6周去势+T替代组(F组)与4周去势+T替代组(E组)相比无显著差异,6周对照组(B组)与4周对照组(A组)相比无显著差异。结论:雄激素可能通过上调AKT3、PIK3CA、CALM、CAV1蛋白的表达,磷酸化e NOS后激活e NOS,促进勃起;然而,确切的机制还应该采用AKT3、PIK3CA、CALM、CAV1等的阻滞剂或者激活剂,以及采用基因转染或者基因敲除等方法,进一步明确分子机制。