小细胞外囊泡及其携带的非编码RNA在非酒精性脂肪性肝病中的作用

小细胞外囊泡(small extracellular vesicles,sEVs)是由细胞分泌的一种细胞外囊泡,产生于多泡体,多泡体与质膜融合并释放到细胞外基质。由于小细胞外囊泡可以携带分子质量相对较小的核酸、蛋白质、脂质,能够执行细胞间物质传递、细胞间通讯等功能。因此,小细胞外囊泡及其携带的非编码RNA不仅参与细胞正常生理过程,也可以在多种疾病的发生发展过程中起重要作用。本文综述了小细胞外囊泡在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)中的作用,小细胞外囊泡及其携带的非编码RNA不仅有望成为NAFLD诊断的标志物,同时也具有治疗NAFLD的潜在作用,或能为治疗NAFLD提供新思路。

干细胞来源与组织来源小细胞外囊泡诱导脂肪新生的比较

背景:再生医学近几十年的发展,使胞外囊泡诱导脂肪组织再生成为修复软组织缺损的可行方法。但由于实验模型不同以及胞外囊泡使用剂量不同,目前仍无法对不同来源胞外囊泡在脂肪再生中的应用效果进行定量比较。目的:比较干细胞来源小细胞外囊泡与组织来源小细胞外囊泡在体内诱导脂肪新生的效果。方法:采用超速离心法提取脂肪干细胞来源小细胞外囊泡和脂肪组织来源小细胞外囊泡,采用纳米颗粒跟踪分析、透射电镜和Western blot鉴定比较2种小细胞外囊泡的数量、粒径、形态和标志蛋白表达;使用定制硅胶管建立C57小鼠皮下脂肪新生定量评估模型,通过细胞计数和苏木精-伊红染色比较2种小细胞外囊泡体内促进脂肪组织新生的效果。结果与结论:①通过超速离心法提取2种小细胞外囊泡,粒径均位于50-200 nm之间,在透射电镜下均为典型的圆形,均表达小细胞外囊泡的特征性蛋白CD81、CD63、TSG101;②使用定制硅胶管,将等粒子数小细胞外囊泡与Matrigel凝胶混合于硅胶管中植入小鼠背部皮下,建立小鼠体内无细胞、可定量的脂肪新生模型;③植入后3,7 d,硅胶管内容物苏木精-伊红染色和细胞计数显示,加入了小细胞外囊泡的2组都比空白对照组募集到更多的宿主细胞,且脂肪组织来源小细胞外囊泡组优于脂肪干细胞来源小细胞外囊泡组;④体内植入4周的硅胶管内容物苏木精-伊红染色显示,小细胞外囊泡促进脂肪新生,且脂肪组织来源小细胞外囊泡组优于脂肪干细胞来源小细胞外囊泡组。以上结果表明,组织来源小细胞外囊泡促进脂肪新生的效果优于干细胞来源小细胞外囊泡。

小细胞外囊泡(sEVs)介导HBV感染及相关机制的研究进展

小细胞外囊泡(sEVs)是由大多数细胞分泌的具有脂质双分子层的纳米级别的膜性囊泡,因其是物质交换和信号传递的重要媒介,而被研究者广泛关注。治愈乙型肝炎的基础在于充分掌握HBV复制调控分子机制,HBV主要通过与膜表面受体结合进行复制传代,但其并不是唯一传染途径,除受体途径外,sEVs可将游离的HBV传播给未感染的肝细胞。但sEVs介导HBV感染的机制并不十分明确,因此,本文主要对HBV感染后肝细胞分泌的sEVs与HBV病毒传递的关系和感染机制进行探讨,为临床上治疗HBV感染疾病提供科学的理论指导。

小细胞外囊泡与三阴性乳腺癌的关系

三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)是一种不表达雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和人表皮生长因子受体2(HER-2)的特殊乳腺癌亚型,组织分型属浸润性乳腺癌[1]。TNBC的临床特征包括高侵袭性、高转移潜力、易复发和预后不良,属难治型疾病,目前仍缺乏标准化治疗方案[2]。TNBC治疗主要有手术治疗、放射及化学治疗、内分泌治疗、靶向治疗[3-4]。目前主流治疗方式主要基于宏观手术和微观基因水平上,在细胞学方向仅以靶向和免疫为主。而小细胞外囊泡(small extracellular vesicles,sEV)广泛参与多种肿瘤的演变过程。本文就sEV的功能特性及其与TNBC相关情况进行综述。

团体标准《人多能干细胞来源的小细胞外囊泡》与《人间充质干细胞来源的小细胞外囊泡》解读

人干细胞来源的小细胞外囊泡(sEVs)作为“无细胞的干细胞治疗技术”,在多种疾病的临床前研究中展现出显著的治疗效果,并逐步开展了多项临床试验。然而目前人干细胞来源的sEVs的质量属性尚缺乏统一标准,限制了其进一步临床应用。为此,中国研究型医院学会细胞外囊泡研究与应用专业委员会在深入解析国内外学者研究成果,并由此广泛征求业内相关专家意见的基础上起草并制定了团体标准《人多能干细胞来源的小细胞外囊泡》与《人间充质干细胞来源的小细胞外囊泡》。这2项标准的制定将有助于规范并推动人干细胞来源sEVs研究与应用,并为其临床转化制剂制备提供参照标准。对这2项团体标准的重点条款进行解读,有助于相关专业技术人员更好的理解和应用该标准。

骨髓间充质干细胞来源小细胞外囊泡对骨质疏松症的改善作用

目的·探究人骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)来源的小细胞外囊泡(small extracellular vesicle,sEV)对小鼠破骨细胞分化和巨噬细胞极化的调控作用,以及对骨质疏松症小鼠的影响。方法·培养BMSC并通过差速离心法提取sEV,通过透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)及纳米颗粒跟踪分析技术(nanoparticle tracking analysis,NTA)鉴定得到的sEV。通过巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor,M-CSF)及核因子κB受体激活蛋白配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)刺激RAW264.7细胞以诱导形成破骨细胞,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色及鬼笔环肽染色检测sEV对破骨细胞分化的调控作用。通过荧光定量PCR检测sEV对破骨细胞标志基因环磷腺苷效应元件结合蛋白(cAMPresponse element binding protein,CREB)、组织蛋白酶K(cathepsin K,CTSK)及c-Jun(Jun proto-oncogene)mRNA表达量的影响。使用脂多糖刺激RAW264.7细胞极化为M1型巨噬细胞;使用白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)及IL-13刺激RAW264.7细胞极化为M2型巨噬细胞。利用流式细胞术检测sEV对M1及M2型巨噬细胞极化的影响。通过微计算机断层扫描成像(micro-computed tomography,micro-CT)及TRAP染色观察sEV对骨质疏松症小鼠模型腰椎骨组织的影响。结果·TEM及NTA结果显示分离得到的sEV具有典型的球状结构,直径为30~150 nm。TRAP染色及鬼笔环肽染色结果显示,BMSC来源的sEV能够有效抑制RAW264.7细胞融合形成破骨细胞。PCR结果表明sEV能够降低CREB、CTSK和c-Jun mRNA的表达量(均P<0.05)。流式细胞术分析表明,BMSC来源的sEV能够抑制RAW264.7细胞极化为M1型巨噬细胞,促进其极化为M2型巨噬细胞。Micro-CT检测结果显示,sEV干预后模型小鼠腰椎骨小梁数量和骨体积分数显著高于未干预小鼠(均P<0.05);TRAP染色结果显示,sEV干预后腰椎组织中的破骨细胞数量减少。结论·人BMSC来源的sEV可以延缓骨质疏松小鼠的骨质流失,这可能与其抑制小鼠破骨细胞分化及促进M2型巨噬细胞极化的作用有关。

小细胞外囊泡在牙周及牙髓再生中的应用与进展

背景:小细胞外囊泡是细胞旁分泌途径中的重要成分,近些年小细胞外囊泡在口腔组织再生中的应用受到广泛关注。目的:对小细胞外囊泡在牙周和牙髓组织再生中的作用和应用进展做一综述。方法:检索近10年Pub Med、Web of science数据库及中国知网和万方医学数据库,英文检索词为“small extracellular vesicles,exosomes,pulp stem cells,periodontal regeneration,bone regeneration,pulp regeneration,regenerative endodontics,revascularization”,中文检索词为“小细胞外囊泡,外泌体,牙髓干细胞,牙周组织再生,骨再生,牙髓再生,牙髓血运重建”。经过文题、摘要的筛选,排除相关性差及陈旧和重复的文献,对最终符合标准的71篇文献进行综述。结果与结论:(1)小细胞外囊泡由多种细胞分泌,参与细胞间通讯,介导免疫应答反应,在组织再生中具有较大的应用潜力;(2)小细胞外囊泡在牙周组织修复再生中发挥重要的作用,可调控牙周炎症,促进牙周膜和周围骨组织再生;(3)小细胞外囊泡作用于牙源性干细胞可再生功能性牙髓-牙本质复合体。

小细胞外囊泡在消化道肿瘤诊疗中的应用进展

小细胞外囊泡因其丰度高且携载多种生物活性物质如蛋白质、核苷酸、脂质及代谢物等特性,正被用于消化道肿瘤新型标志物诊断技术的开发。随着高通量检测技术和生物信息学技术的不断拓展,消化道肿瘤患者小细胞外囊泡内分子标志物的检测、智能药物递送系统、传统治疗方案改良策略等方面已取得了显著进步,显示其广泛的临床转化应用前景。本文将主要阐述消化道肿瘤小细胞外囊泡中分子标志物的诊断价值及临床治疗策略的最新进展。

M2型巨噬细胞来源的小细胞外囊泡抑制内质网应激减轻慢性间歇性缺氧诱导的H9C2心肌细胞损伤

目的:探讨M2型巨噬细胞来源的小细胞外囊泡(M2 macrophages-derived small extracellular vesicle,M2-sEV)对慢性间歇性缺氧(chronic intermittent hypoxia,CIH)诱导的H9C2心肌细胞损伤的影响及机制。方法:白介素-4(interleukin 4,IL-4)诱导巨噬细胞向M2型极化,实时荧光定量PCR(real time fluorogenic quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测M2型标志物CD206、精氨酸酶-1(arginase-1,Arg-1)表达水平。提取并鉴定M2-sEV。将H9C2细胞分为对照组(CON组)、CIH组、CIH+M2-sEV组。CCK8法检测细胞活力,qRT-PCR和蛋白质印迹法检测缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)等炎症因子,活化的胱天蛋白酶3(cleaved caspase-3)、活化的胱天蛋白酶9、B细胞淋巴瘤2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)和凋亡蛋白Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)等凋亡因子,内质网跨膜蛋白肌醇酶1α(inositol-requiring enzyme 1α,IRE1α)、转录因子剪接型X-盒结合蛋白1(spliced X-box binding protein 1,XBP1)、转录激活因子6(activating transcription factor 6,ATF6)和葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)等内质网应激因子。结果:成功极化M2型巨噬细胞,并获取M2-sEV。CCK8检测显示,M2-sEV可提高CIH下H9C2心肌细胞增殖活性。qRT-PCR和蛋白质印迹法显示,与CON组比,CIH组HIF-1α、IL-6、TNF-α、TGF-β、活化的胱天蛋白酶3、活化的胱天蛋白酶9、Bax、IRE1α、XBP1、ATF6、GRP78表达水平明显增高(均P<0.05),Bcl-2表达水平降低、Bax/Bcl-2比值增高(均P<0.05);加入M2-sEV共孵育后,上述缺氧诱导因子、炎症因子、促凋亡蛋白、内质网应激因子等表达均显著降低(均P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达增高、Bax/Bcl-2比值降低(均P<0.05)。结论:M2-sEV减轻CIH诱导的H9C2细胞损伤,其机制可能与下调内质网应激水平,抑制炎症反应和心肌细胞凋亡有关。

新型纳米递送系统:工程化小细胞外囊泡

背景:小细胞外囊泡因其独特的来源、结构与生理功能,常被作为一种理想的天然内源性纳米递送系统用于药物递送。为了克服小细胞外囊泡的天然局限性,可利用多重手段对小细胞外囊泡进行工程化改造。目的:针对工程化小细胞外囊泡作为纳米递送系统的研究现状及最新进展做一综述。方法:应用计算机在中国知网、PubMed等数据库检索关于小细胞外囊泡工程化改造及其作为纳米药物递送系统的相关研究,检索关键词为“小细胞外囊泡、载药、药物递送”及“sEVs、Engineered exosomes、Drug Loading、Nanopartical delivery system”,检索文献时限为2011年1月至2020年8月。结果与结论:小细胞外囊泡的工程化方法主要包括针对亲代细胞的“细胞工程”及针对分离后小细胞外囊泡的“小细胞外囊泡工程”。工程化小细胞外囊泡旨在通过表面改造或用功能配体修饰实现将内外源性分子、药物、蛋白质或核酸负载到小细胞外囊泡表面或腔内,或实现将小细胞外囊泡靶向特定类型的细胞或组织,从多角度多方面改善小细胞外囊泡的递送性能,在促进小细胞外囊泡临床应用上具有显著意义。工程化小细胞外囊泡逐渐成为癌症治疗、免疫疗法、再生医学等重要领域的一项研究前景广泛的重要治疗手段。

人脐带间充质干细胞源性小细胞外囊泡静脉注射对小鼠实验性自身免疫性葡萄膜炎的治疗作用

目的探讨静脉注射人脐带间充质干细胞(MSCs)源性小细胞外囊泡(sEVs)对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)小鼠的治疗作用。方法分离并培养人脐带MSCs,收集细胞培养上清液,采用超速离心法分离MSCs源性sEVs。采用Nanosight分析sEVs粒径,透射电子显微镜下鉴定sEVs形态;采用Western blot法检测sEVs表面标志物CD9、CD81和CD63蛋白的表达。取48只SPF级7周龄C57BL/6雌性小鼠,采用光感受器间维生素A类结合蛋白651-670(IRBP_(651-670))注射法制备EAU模型。采用随机数字表法将模型小鼠随机分为sEVs治疗组和磷酸盐缓冲液(PBS)对照组,每组24只。sEVs治疗组小鼠于EAU造模后第11天尾静脉注射MSCs源性sEVs 50μg,PBS对照组以同样方法注射同体积PBS。造模后第8天各组分别随机选取6只小鼠扩瞳后检眼镜下观察眼底炎症情况,隔日1次,并进行炎症评分。造模后第18天采用颈椎脱臼法各组处死6只小鼠,立即摘取双眼眼球制作眼球石蜡切片并行苏木精-伊红染色,进行眼底病理炎症评分。各组分别随机选取6只小鼠,于造模后第18天颈椎脱臼法处死,立即摘取双眼眼球,采用流式细胞术检测小鼠眼球组织中辅助性T细胞1(Th1细胞)、Th17细胞浸润情况;于造模后第14天各组分别颈椎脱臼法处死6只小鼠,立即分离脾脏及引流淋巴结中的T细胞,采用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)法检测终质量浓度为0、1、10和20μg/ml IRBP_(651-670)条件下T细胞增生情况。另选取3只正常小鼠,采用磁珠阴选法分离脾脏初始T细胞,分为sEVs处理组和PBS对照组,根据分组加入10μg/ml的MSCs源性sEVs或等体积PBS进行共孵育,分别在Th1/Th17细胞分化条件下培养,采用流式细胞术检测各组初始T细胞向Th1/Th17细胞分化情况。结果分离的人脐带MSCs源性sEVs直径平均为(102.4±33.6)nm,透射电子显微镜下sEVs呈双层膜囊泡结构,sEVs中CD9、CD63和CD81蛋白呈高表达。造模后14、16、18、20和22 d,sEVs治疗组眼底炎症评分均低于PBS对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。造模后18 d,sEVs治疗组小鼠眼球组织病理评分明显低于PBS对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。造模后18 d,sEVs治疗组小鼠眼球组织中Th1、Th17细胞百分比分别为(15.55±2.03)%和(15.67±2.15)%,明显低于PBS对照组的(21.35±0.72)%和(20.90±1.10)%,差异均有统计学意义(t=6.58、5.31,均P<0.01)。在IRBP_(651-670)质量浓度为20μg/ml条件下,sEVs治疗组T细胞体外增生能力显著低于PBS对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。sEVs处理组初始T细胞分化为Th1细胞和Th17细胞的百分比分别为(28.15±1.32)%和(11.60±2.23)%,明显低于PBS对照组的(31.58±1.75)%和(23.52±1.76)%,差异均有统计学意义(t=3.93、10.26,均P<0.05)。结论尾静脉注射人脐带MSCs源性sEVs可明显减轻EAU小鼠眼底炎性反应,其机制与抑制初始T细胞向Th1和Th17细胞的分化,减少眼球中Th1和Th17细胞浸润有关。

角质形成细胞低表达Hsp90蛋白与小细胞外囊泡数量的相关性及其临床意义探讨

目的:评价角质形成细胞中热休克蛋白90(heat shock protein 90,Hsp90)表达水平与小细胞外囊泡(small extracellular vesicles,sEVs)数量的关系。方法:采用人角质形成细胞株(HaCaT),分为野生型组、短发夹RNA干扰组(shRNA组,Hsp90蛋白抑制剂)和格尔德霉素抑制组(17-AAG组,Hsp90低表达),进行体外培养。以超速离心法收集各组培养体系中的sEVs,利用透射电镜观察其形态学特征;蛋白质免疫印迹法鉴定生物学特性;纳米颗粒跟踪分析检测粒子数量。采用GraphPad Prism 8.0软件包中的t检验(非参数Mann-Whitney U检验)统计分析各组之间sEVs的数量差异。结果:超速离心法获得的HaCaT细胞来源的sEVs符合形态学和生物学鉴定标准,sEVs中Hsp90蛋白无明显表达。shRNA干扰角质形成细胞中的Hsp90AA1表达后,其sEVs数量上升。第5天时,shRNA干扰组的sEVs粒子数为[(177.4±4.18)×10^(8),n=3],与空载质粒组的粒子数[(82.34±4.83)×10^(8),n=3]相比显著升高(P<0.0001)。17-AAG抑制Hsp90蛋白5天后,17-AAG组的粒子数为[(652.5±26.73)×10^(8),n=3],对照组粒子数为[(262.22±5.44)×10^(8),n=3],差异具有统计学意义(P<0.0001)。结论:低表达Hsp90蛋白可促进HaCaT细胞分泌sEVs,sEVs可能与炎症状态下上皮细胞和免疫细胞间的物质传递有关。

小细胞外囊泡在乳腺癌诊断与治疗中的研究进展

小细胞外囊泡(small extracellular vesicles,sEVs)是一类具有脂质双层膜结构的细胞外囊泡,能够参与细胞间通讯,是一种良好的药物递送载体。小细胞外囊泡中的微小RNA(miRNA)、长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)、环状RNA(circRNA)和蛋白质等多种成分参与调控肿瘤发生发展的重要机制,能够反映细胞的生理状态与功能状态,且大量存在于患者的血浆、尿液、唾液中,对小细胞外囊泡进行分析和检测可能成为肿瘤诊断的新型手段。除了作为肿瘤诊断的生物标志物,小细胞外囊泡还通过其内容物或作为特异性药物递送载体来调控肿瘤细胞的侵袭转移、机体耐药、细胞因子分泌表达与免疫应答,发挥其抗肿瘤作用。总结近五年来小细胞外囊泡中RNA(miRNA、lncRNA、circRNA)与蛋白质作为乳腺癌诊断的生物标志物以及在乳腺癌治疗中的潜力的相关研究,阐述小细胞外囊泡作为新型诊断与治疗方法的优势与不足,为小细胞外囊泡在乳腺癌诊疗领域的临床应用提供参考。

工程化小细胞外囊泡的制备方法和应用前景

小细胞外囊泡(sEVs)凭借优异的生物相容性、固有稳定性以及低免疫原性,被认为是理想的天然纳米药物递送系统。基于天然sEVs的局限性,工程化sEVs的构建旨在通过负载药物等手段提高其内容物质量和靶向特异性,使sEVs具有更强的药物递送效率,从而最大限度地提高治疗效果。当前的研究已经证实工程化sEVs在生物医学领域和临床应用上表现出极大的潜力。本文重点综述了国内外工程化sEVs制备策略的最新研究成果及其应用前景,针对亲本细胞和sEVs的直接修饰方法进行总结分类并通过举例比较不同方法之间的优缺点;阐述了工程化sEVs在肿瘤、神经系统疾病和组织再生领域的研究进展;评估现阶段工程化sEVs在制备过程中所面临的问题和未来的发展机遇。

小细胞外囊泡在皮肤光老化等皮肤疾病中的作用及机制研究进展

小细胞外囊泡(small extracellular vesicles,sEVs)是近几年纳米医学界的新星,它有着独特的形态结构和理化性质,可以充当细胞间信息传递的介质,并作为疾病发生发展过程中的生物学标志物。现今人们越来越关注皮肤光老化问题,有关sEVs延缓和改善皮肤光老化的研究也逐渐成为热点。来源于间充质干细胞的sEVs不仅在皮肤光老化中有减轻炎症反应和减弱氧化损伤等的作用,而且对于其他皮肤疾病(例如皮肤创伤、斑块状银屑病、系统性红斑狼疮以及皮肤肿瘤等)也有着显著的作用。此外,由于sEVs的囊泡性质,sEVs正在成为一种新的药物递送系统。然而在将干细胞源性sEVs作为一种新的治疗方法时,仍需重视其安全性和毒性问题。

超速离心结合CD63免疫磁珠分离口腔黏膜组织来源小细胞外囊泡的实验研究

目的:探索口腔黏膜组织来源的小细胞外囊泡(small extracellular vesicles,sEVs)分离富集的方法。方法:对口腔黏膜活检后的残余组织进行称重,胶原酶、蛋白酶抑制剂处理,300×g至10000×g离心,取上清进一步用超速离心、CD63免疫磁珠捕获等方式分离富集sEVs,分别通过透射电镜、纳米粒子追踪颗粒、蛋白定量等方法从形态学、颗粒粒径和数量、蛋白量等方面评价提取sEVs的效果,通过sEVs质量和组织质量的比值计算提取率。结果:超速离心可从微量口腔黏膜组织中获得sEVs,平均提取率为0.051%,但含有一定杂质颗粒,超速离心结合CD63磁珠捕获的sEVs杂质较少,但提取率仅为0.010%。结论:超速离心法对口腔黏膜微量组织sEVs的提取效率偏低;结合CD63免疫磁珠分离可提高提取纯度,然而提取量更少。未来需进一步优化条件,或结合微流控、核酸适配体等方法,有望提高sEVs的提取率和纯度。

内皮祖细胞来源小细胞外囊泡促进小鼠脊髓损伤修复的实验研究

目的探讨内皮祖细胞来源小细胞外囊泡(endothelial progenitor cells derived small extracellular vesicles,EPCs-sEVs)对小鼠脊髓损伤的治疗效果。方法取20只C57BL/6雄性小鼠股骨及胫骨骨髓分离培养EPCs,采用双荧光染色及流式细胞术鉴定;然后对EPCs进行传代,收集P2~P4代细胞上清,以超速离心法提取EPCs-sEVs,采用透射电镜、纳米流式检测仪及Western blot进行鉴定。取40只C57BL/6雌性小鼠随机分为4组(n=10),其中假手术组仅切除T10椎板,模型组以及低、高浓度干预组制备T10脊髓损伤模型;模型制备后30 min、3 d及7 d低、高浓度干预组经尾静脉分别注射浓度为1×109、1×1010个/mL的EPCs-sEVs。术后行小鼠行为学检测(BMS评分、斜板实验、Von Frey实验),术后4周取材行大体、HE染色及免疫组织化学染色观察脊髓组织结构变化。另取3只C57BL/6雌性小鼠制备T10脊髓损伤模型后,经尾静脉注入DiR标记的EPCs-sEVs,30 min后活体成像仪观察EPCs-sEVs是否达脊髓损伤部位。结果经鉴定,成功获取小鼠骨髓来源的EPCs及EPCssEVs;活体成像仪观察显示EPCs-sEVs在注射后30 min内募集至脊髓损伤区域。行为学检测示,术后2周内两干预组BMS评分及斜板实验最大角度与模型组比较差异均无统计学意义(P>0.05),2周后均明显优于模型组(P<0.05);术后4周两干预组Von Frey实验示机械痛阈值明显高于模型组、低于假手术组,差异均有统计学意义(P<0.05);上述指标两干预组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与模型组相比,两干预组损伤节段脊髓组织缺损较小,单个核细胞浸润较少,组织结构恢复明显,血管新生更多(P<0.05);两干预组间无明显差异。结论 EPCs-sEVs可促进小鼠脊髓损伤修复,为脊髓损伤的生物治疗提供了新的方案。

切向流过滤结合超速离心分离小细胞外囊泡方法的建立

目的建立切向流过滤结合超速离心分离小细胞外囊泡的方法,以期提升小细胞外囊泡的分离效率。方法使用切向流过滤结合超速离心的方法分离小细胞外囊泡,并通过透射电镜观察、纳米颗粒追踪、Western blot等技术对分离的囊泡进行鉴定。结果通过该方法分离的小细胞外囊泡直径主要分布在30~250 nm之间,透射电镜下可明确观察到囊泡样结构,纯化后的细胞外囊泡CD9、CD63和ALIX蛋白呈阳性表达,分离时间较常规超速离心方法明显缩短。结论切向流过滤结合超速离心能够有效分离小细胞外囊泡,提升分离效率。

牛脐带提取物的特定成分分析及细胞功效评价

为开发动物源功能性化妆品原料,采用检验合格的牛脐带组织,利用一系列生物学分离提取技术手段,摸索并建立稳定可重复的牛脐带提取物的提取制备工艺,并开展细胞功效评价。研究结果如下:(1)建立了一种稳定的牛脐带提取物的提取制备工艺,通过切向流浓缩,牛脐带提取物蛋白质量浓度可达(9.21±1.95)mg/mL;(2)小细胞外囊泡成分检测显示产物中富集小细胞外囊泡成分;(3)基于细胞模型的功效评价结果显示,牛脐带提取物促进人皮肤成纤维细胞(HSF)模型的细胞增殖活性,并提高细胞划痕修复率,显著下调小鼠巨噬细胞炎性细胞模型的IL-6、TNF-α表达水平,减少人永生化表皮(HaCaT)细胞凋亡模型的凋亡细胞百分率,减少HSF衰老模型的β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数量。建立了一种富含小细胞外囊泡成分且具有多种细胞功效的牛脐带提取物的标准化制备工艺。

外泌体在糖尿病心肌损伤中的作用研究进展

外泌体是细胞膜向内凹陷释放的细胞外囊泡,直径为50～150nm,能够携带蛋白质、脂质、核酸、糖等生物活性分子,具有重要的细胞间信息传递功能。心肌损伤是糖尿病心血管疾病的严重并发症之一,早期诊断及预防糖尿病心肌损伤是目前临床亟需解决的问题。外泌体在糖尿病心肌损伤的防治方面起重要作用。本文就外泌体在糖尿病心肌损伤中的作用研究进展作一综述。