小肠结肠炎耶尔森菌O∶3血清型特异性单克隆抗体制备

目的 制备出小肠结肠炎耶尔森菌血清O∶3型特异的单克隆抗体。方法 用常规的骨髓杂交瘤融合技术。结果 筛选到了一株针对于小肠结肠炎耶尔森菌O∶3血清型特异性的克隆株 (编号 :Y6H8) ,且证实分泌的抗体属于针对于脂多糖免疫球蛋白IgG ,可用于玻片凝集法鉴定 0∶3血清型小肠结肠炎耶尔森菌。 结论 通过本实验证实小肠结肠炎耶尔森菌血清O∶3型菌株脂多糖存在其特异性成分 。

2020-2023年辽宁省小肠结肠炎耶尔森菌表型分布和分子特征研究

目的通过研究表型分布和分子特征的关联性,了解辽宁省小肠结肠炎耶尔森菌(Yersinia enterocolitica,YE)的流行趋势,为辽宁省YE病的监测和防控提供数据支撑。方法对2020-2023年辽宁省60株YE分离株进行血清分型、生物分型、毒力基因检测和PFGE、MLST分子分型研究。结果60株YE分离株可分为4个血清型、2个生物型、8个毒力基因型和29种ST型。2023年40株YE分离株分为8组PFGE优势带型A-G,A组为2023年沈阳市地区流行分子型。PFGE的分辨力(DI)为0.954,MLST分辨力(DI)为0.948。ST3、ST252位于树状图核心位置向四周发散。PFGE较MLST方法分辨力稍高。结论2020-2023年辽宁省YE分离株流行致病血清型是O∶3,毒力基因型和ST型均呈现多样化状态。沈阳市YE污染较严重。应重点加强对于生物1A型菌株的研究工作。猪是辽宁省地区重要的宿主和传染源。PFGE和MLST对YE分离株分型均是可行的,ST分型与PFGE分型具有一致性。

小肠结肠炎耶尔森菌O∶9血清型特异性单克隆抗体筛选及其应用

目的利用杂交瘤技术筛选出能分泌小肠结肠炎耶尔森菌O∶9血清型特异性单克隆抗体的细胞株,用于该型菌株的鉴定。方法采用ELISA方法筛选克隆株,并用玻片凝集法进行单克隆抗体的特异性鉴定。结果筛选到3株能分泌小肠结肠炎耶尔森菌O∶9血清型特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分泌的抗体与经鉴定的18株小肠结肠炎耶尔森菌O∶9血清型菌株呈阳性反应,而与其他血清型小肠结肠炎耶尔森菌及常见肠道致病菌无交叉凝集反应;应用于小肠结肠炎耶尔森菌野生株分型鉴定时,能准确鉴定出其中的24株O∶9血清型菌株,与用日本进口分型血清鉴定、PCR毒力基因检测结果相同。结论筛选获得的细胞株产生的单克隆抗体,用于小肠结肠炎耶尔森菌O∶9血清型鉴定,具有很好的型特异性,避免了过去免疫血清制备中繁琐的抗原交叉吸收试验。

小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型特异性单克隆抗体的制备

目的利用杂交瘤技术制备小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型特异性单克隆抗体,用于小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型菌株的分型鉴定。方法用小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型菌株作为抗原,以骨髓杂交瘤细胞融合技术制备小肠结肠炎耶尔森单克隆抗体,用玻片凝集筛选法进行单克隆抗体的特异性鉴定。结果筛选到1株与小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型菌株呈现阳性反应,并与日本的抗血清检测结果相一致,而与被检测的其他血清型小肠结肠炎耶尔森菌和常见肠道致病菌无交叉凝集反应。结论本实验筛选获得的单克隆抗体,用于小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型菌株鉴定,具有良好的特异性,避免了免疫血清难以避免的交叉凝集现象。

温州市食源性小肠结肠炎耶尔森氏菌毒力基因分布及遗传多样性研究

目的了解温州市食源性小肠结肠炎耶尔森氏菌的毒力基因分布及遗传多样性特征。方法对温州市食品及食源性疾病腹泻病人中分离得到的小肠结肠炎耶尔森氏菌进行生物型、血清型和耐药性分析,并基于全基因组测序进行菌株的毒力基因、多位点序列分型(MLST)、核心基因组多位点序列分型(cgMLST)分析。结果71株食源性小肠结肠炎耶尔森氏菌,94.4%(67/71)的分离株为生物1A型,生物血清型以1A/O∶5占比最高(29.6%,21/71)。分离株对14种抗菌药物的敏感率达到95.8%以上。共获得了16种126个毒力基因,其中2株菌株携带pYV质粒和染色体相关毒力基因。分离株以ST3型最常见(31.6%,12/38),cgMLST分析显示除具有相同ST型的菌株外,菌株无明显基因型簇形成。结论温州市食源性小肠结肠炎耶尔森氏菌存在致病性菌株,菌株呈高度遗传多态性,需加强此类菌株的监测,以预防其引起食源性疾病的暴发。

O∶3和O∶9小肠结肠炎耶尔森菌主要毒力基因分布调查

目的 了解我国常见致病性血清型毒力基因的分布情况。方法 参照国外发展成熟的聚合酶链反应(PCR)技术进行毒力基因检测。结果 实验证实在我国分离到的主要流行血清型O∶3和O∶9小肠结肠炎耶尔森菌毒力基因分布特征为 :ail+ 、ystA+ 、ystB-、yadA+ 、virF+ 占 5 6.2 % ;ail+ 、ystA+ 、ystB-、yadA-、virF-占 2 5 .6% ;其他型占18.2 %。结论 通过实验证实在我国引起感染暴发和流行的血清型O∶3和O∶9小肠结肠炎耶尔森菌毒力基因的分布主要为 :ail +、ystA+ 、yadA+ 、ystB-、virF+ 型 ,很少部分的ail+ 、ystA+ 、ystB-、yadA-、virF-根据以前的资料被认为是毒力质粒丢失的结果 ,其他型很有可能是非致病的菌株。

2008-2013年宁夏小肠结肠炎耶尔森菌分布特征分析

目的了解宁夏小肠结肠炎耶尔森菌的分布特征。方法按照《全国小肠结肠炎耶尔森菌病监测方案》对宁夏2008-2013年采集的各类样本进行分离培养,将分离株送中国疾病预防控制中心传染病所进行血清分型、毒力基因检测和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型。结果采集各类样本9 643份,检出173株小肠结肠炎耶尔森氏菌,总检出率1.79%;各年度和各样本检出率差异均有统计学意义(P<0.01)。血清型O∶3和O∶9均携带ail和ystA基因,全部从猪和腹泻病人样本中检出;血清型O∶5、O∶8和未分型菌株均没有携带ail和ystA基因,在猪、牛、羊、鸡和狗样本中都有检出。结论小肠结肠炎耶尔森菌在宁夏分布较为广泛,猪是主要宿主,流行的致病性血清型以O∶3为主,O∶9为辅,且在我区的分布没有时间、地域上差异。

江苏省2016—2019年不同来源小肠结肠炎耶尔森菌血清、生物型分布及分子特征分析

目的:了解江苏地区2016—2019年间不同来源小肠结肠炎耶尔森菌血清、生物型分布及分子特征。方法:收集2016—2019年江苏地区各类标本进行小肠结肠炎耶尔森菌分离培养,对分离株进行生化和血清分型,并通过二代测序方法进行毒力基因和多位点序列分析。结果:2016—2019年在江苏地区共采集各类标本6398份,分离小肠结肠炎耶尔森菌186株,其中105株菌为血清型无法鉴定,可鉴定血清型中以O:8、O:3为主,存在3个生物型,大部分为生物型1A。通过测序分析发现毒力基因以Ⅲ型(ail-、ystA-、ystB+、yadA-、virF-)和Ⅳ型(ail-、ystA-、ystB-、yadA-、virF-)为主,多位点序列分析(MLST)将所有分离株分为81个ST型。结论:江苏地区不同来源小肠结肠炎耶尔森菌血清型较复杂,生物型相对集中,腹泻患者中可分离到毒力基因Ⅳ型菌株,ST基因型呈多样性发散分布,应重点加强猪、鸡、狗等动物的管控和监测。

中国致病性小肠结肠炎耶尔森菌生物分型研究

目的初步了解我国致病性小肠结肠炎耶尔森菌O∶3、O∶9血清型菌株的生物型分布,掌握我国致病性小肠结肠炎耶尔森菌的生物学特征。方法用文献报道方法对1986-2008年从我国不同地区的腹泻病人、家禽家畜、鼠类、食品、环境等各类宿主中分离到的427株致病性小肠结肠炎耶尔森菌进行生物分型。结果 427株致病性小肠结肠炎耶尔森中213株属于生物2型(49.9%),全部为O∶9血清型;208株属于生物3型(48.7%),其中191株为O∶3血清型,17株为O∶9血清型;6株属于生物4型(1.4%),全部为O∶3血清型。没有发现生物1A型、1B型与5型的致病性菌株。结论我国O∶3血清型致病性小肠结肠炎耶尔森菌以生物3型为主、O∶9血清型致病性菌株以生物2型为主,没有生物1B型菌株,与国外致病性菌株的生物血清型分布有一定差异。

河南省2007-2010年小肠结肠炎耶尔森菌监测分析

目的监测河南省小肠结肠炎耶尔森菌在腹泻病人和宿主动物中带菌情况,分析其血清学分布及毒力基因情况,探索疾病发生的原因。方法对2007-2010年河南省监测点的标本进行初步鉴定,鉴定后菌株送中国疾病预防控制中心传染病所进行最后鉴定,对部分菌株进行血清分型,并进行ail、ystA、ystB、yadA、verF、rfbC毒力基因检测。结果河南省2007-2010年共监测各类标本8 561份,检出小肠结肠炎耶尔森菌株273株,检出率为3.19%;各年份菌株检出率之间有统计学差异。血清分型中O∶5血清型占比最高(31.63%),其次为O∶8(17.35%),O∶3型占比也较高(11.22%),O∶9则未发现。猪的血清型分布最广,共涉及9个血清型,人的血清型主要为O∶3,O∶8,O∶10。毒力基因测定在病人、猪、牛、犬中检出致病菌株。结论河南省小肠结肠炎耶尔森菌在人群和各类动物中均有存在。人群中流行的血清型与全国流行情况一致。河南省最重要的动物宿主是猪、牛、犬,其在人类感染该病中可能会起到比较重要的作用。

2004-2005年我国部分地区小肠结肠炎耶尔森菌宿主分布调查

目的了解2004-2005年小肠结肠炎耶尔森菌宿主分布情况。方法对从不同宿主样品中分离到的小肠结肠炎耶尔森菌进行生物化学鉴定、血清学分型、毒力基因PCR检测。结果2004-2005年从8种常见动物宿主及食品中共分离到230株小肠结肠炎耶尔森菌,35.65%分离自猪,致病性菌株中51.52%来自猪,所占比例最高,而分离自腹泻病人、兔的菌株均为致病性菌株。结论我国小肠结肠炎耶尔森菌宿主分布广泛,猪是最主要的宿主动物。

江西省猪和啮齿动物宿主小肠结肠炎耶尔森菌病原学研究

目的了解江西省不同宿主动物中小肠结肠炎耶尔森菌的分布以及病原特征,为该菌防控提供科学依据。方法采集江西省不同年份的屠宰猪与鼠类标本,对foxA筛检阳性的标本进行分离培养,对分离到的小肠结肠炎耶尔森菌进行血清型、生物型、毒力基因与脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析。结果从1018份标本中分离到79株小肠结肠炎耶尔森菌,阳性率为7.76%(79/1018)。猪的阳性率为20.86%(63/302),均为O∶3血清型;鼠的阳性率为2.24%(16/716),血清型为O∶5、O∶8和未分型,生物型均为1A型。79株小肠结肠炎耶尔森菌中,致病性菌株均来自猪,占总分离菌株数的79.75%(63/79),其中59株(ystA^+、ystB^-、yadA^+、virF^+、ail^+、rfbc^+),4株(ystA^+、ystB^-、yadA^-、virF^-、ail^+、rfbc^+);非致病性菌株均来自鼠,占总分离菌株数的20.25%(16/79),其中12株(ystA^-、ystB^+、yadA^-、virF^-、ail^-、rfbc^-)、4株(ystA^-、ystB^-、yadA^-、virF^-、ail^-、rfbc^-)。致病性菌株可分为6种带型,以K6GN11C30021为主要型别,占比80.95%(51/63)。结论在江西省的不同宿主动物中,致病性小肠结肠炎耶尔森菌的主要携带者为生猪。应加强江西地区以生猪为宿主的小肠结肠炎耶尔森菌的监测。

浙江省部分地区小肠结肠炎耶尔森菌(动物株)分子生物学特征初探

目的：了解浙江省部分地区小肠结肠炎耶尔森菌的血清型别、毒力基因分布等情况。方法：利用常规细菌分离方法从家禽、家畜和鼠类粪便标本中分离小肠结肠炎耶尔森菌，并进行毒力基因检测，同时对血清型O：3、O：5和O：8的菌株进行脉冲场凝胶电泳分析。结果：2004～2005年，从全省各点采集的动物标本中共分离到22株小肠结肠炎耶尔森菌，分布于11个血清型，并以O：8和O：3为主。PCR检测将分离到的22株小肠结肠炎耶尔森菌毒力携带情况分为4型：Ⅰ型（ail^＋、ystA^＋、ystB^-、yadA^＋、virF^＋），Ⅱ型（ail^＋、ystA^＋、ystB^-、yadA^-、virF^-），Ⅲ型（ail^-、ystA^-、ystB^＋、yadA^-、virF^-），Ⅳ型（ail^-、ystA^-、ystB^-、yadA^-、virF^-）。脉冲场凝胶电泳分析，O：3型菌株显示有2种带型，O：5型菌株的带型完全相同，O：8型菌株的带型则存在明显差异。结论：浙江省的从动物分离的小肠结肠炎耶尔森菌以非致病性菌株居多，且存在一定的地区差异。猪是致病性小肠结肠炎耶尔森菌的重要携带者，应警惕致病性小肠结肠炎耶尔森菌通过猪感染人和其它动物以及环境的危险。

小肠结肠炎耶尔森菌不同pH值下生长模型的研究

目的:了解pH对小肠结肠炎耶尔森菌生长繁殖的影响,推导出该菌在某一温度下关于pH的生长预测模型。方法:用液体稀释法计细菌总量,再按对数法作出同一温度不同pH值下的生长曲线,将得到的不同pH值下的生长速率结合微生物预测模型理论建立生长速率与pH的关系模型。结果:在3个pH值下该菌延滞期的长短依次为:pH 5.5>pH 8.5>pH 7.0;生长速率为:pH 8.5>pH 7.0>pH 5.5;20℃时本菌(O:3血清型)的生长速率关于pH的生长预测模型符合Arrhenn ius关系式,为lnR=-0.076pH2+1.2005pH-5.3306。结论:实验表明该菌最适于微碱条件下生长,对酸性条件的非常敏感度;20℃时本菌(O:3血清型)的最适pH为7.898。

北京市人源性小肠结肠炎耶尔森菌病原学特征分析

目的了解北京市腹泻病人分离的小肠结肠炎耶尔森菌的病原学特征。方法对腹泻病人粪便样本中分离到的小肠结肠炎耶尔森菌进行血清分型、生物分型、毒力基因检测、核心基因组多位点序列分型(core genome multilocus sequence typing,cgMLST)、耐药分析以及脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)分子分型试验。结果2016-2019年从腹泻病人中共检出8株小肠结肠炎耶尔森菌,其中生物血清型3/O∶3型5株,1A/血清未定型3株;毒力基因检测可分为三种类型,致病株毒力基因分布为ail+、ystA+、ystB-、yadA+、virF+、foxA+、rfbC+;cgMLST显示有4株致病性菌株为cgST2571型,1株致病性菌株为cgST2572型,另3株非致病性菌株分别为三种其他型别。药敏试验结果显示,8株菌对头孢唑林、氨苄西林和磺胺异噁唑耐药率较高,且有7株存在多重耐药现象;经NotⅠ酶切后,8株菌共分为6种PFGE带型。结论北京市腹泻病人分离的小肠结肠炎耶尔森菌主要为生物血清型3/O∶3型致病性菌株,多重耐药现象比较严重,PFGE带型呈多态性分布。

小肠结肠炎耶尔森氏菌不同温度下生长预测模型的初步研究

目的研究小肠结肠炎耶尔森氏菌（以下简称耶氏菌）O：3和O：9血清型在增菌液MTSB中关于温度的生长模型。方法用液体稀释法计细菌总量，并应用此模型来预测耶氏菌O：3和O：9血清型在有效的生长温度下的生长速率，世代时间，迟缓期及不同时间的生长菌数．并比较相同条件下耶氏菌O：3与O：9血清型之间生长速率的差异。结果耶氏菌O：3血清型的最低生长温度为-17．8℃，耶氏菌O：9血清型的最低生长温度为-10．3℃，在增菌液MTSB中的生长模型：耶氏菌O：3血清型为√M=0．0134（T-255．1866），耶氏菌O：9血清型为√M：0．0173（T-262．7457）。结论在4～30℃的温度范围内，它们的生长速率都随着温度的升高而增加，而在4℃到15．7℃之间时，耶氏菌O：3血清型的生长速率大于耶氏菌O：9血清型，在15．7～30℃之间时，则耶氏菌O：9血清型的生长速率大于耶氏菌O：3血清型。

2004-2005年江苏省海安县小肠结肠炎耶尔森菌病监测分析

目的了解2004-2005年江苏省海安县小肠结肠炎耶尔森菌人群带菌情况以及家禽、家畜肉污染情况。方法采集动物和腹泻患者粪便及冷藏的禽、畜肉和苍蝇等样本进行小肠结肠炎耶尔森菌增菌培养,并对阳性菌株进行血清学分型和毒力基因检测。结果所有样本中,仅160份动物粪便样本检测阳性,阳性率达17.19%(160/931),其中猪的带菌率较高。151株小肠结肠炎耶尔森菌共有29个血清型,其中血清型以O∶16,29、O∶6,30、O∶5、O∶7,8、O∶12,26、O∶4,33、O∶8等为主,除61株ystB阳性外,其余毒力基因均为阴性。结论小肠结肠炎耶尔森菌江苏省海安县家畜家禽中普遍携带菌,但这些菌株大多属于非致病菌株,对人群威胁不大。

1株食源性小肠结肠炎耶尔森菌的鉴定分析

小肠结肠炎耶尔森菌是近年来受到全球关注的一种肠道致病菌,广泛分布于自然界中.由于其在低温环境下易于生长,所以是现代“冰箱病”的重要致病菌.小肠结肠炎耶尔森菌引起的食源性疾病在上海市呈低水平散发.上海市杨浦区疾病预防控制中心于2015年5月从监测食品中检出1株小肠结肠炎耶尔森菌,并对分离株进行了血清分型、生物分型和毒力基因检测.

中国小肠结肠炎耶尔森菌分布及分子流行病学特征

目的通过中国1980-2019年不同地区小肠结肠炎耶尔森菌的病原学与PFGE分子型别特征分析,为小肠结肠炎耶尔森菌病的防控提供依据。方法对中国不同区域,不同来源标本分离到的6 847株小肠结肠炎耶尔森菌,进行血清型别、生化表型、毒力基因分布研究,对致病性菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析。结果小肠结肠炎耶尔森菌中致病性菌株2 047株、非致病菌4 800株。致病性菌株仅存在两种血清型,O∶3占比88.96%(1 821/2 047)、O∶9占比11.04%(226/2 047)。18个省市自治区的致病株以O∶3血清型为主,宁夏回族自治区以O∶9血清型为主。非致病菌血清型众多,普遍比致病株具有更多的阳性生化反应。1 821株O∶3致病株分为93个PFGE型别,分布于19个省市自治区,其中K6GN11C30021、K6GN11C30012为优势带型(分别占比46.35%、22.5%),75.38%的人源菌株与分离自当地的动物、食品菌株带型一致;226株O∶9致病株共分为14个PFGE型别,分布于8个省市自治区,77.78%人源菌株与分离自当地的动物、食品菌株带型一致。结论我国小肠结肠炎耶尔森菌分布广泛、宿主众多,致病株仅有两个血清型,非致病株血清型众多、可能比致病株具有更强的生化代谢能力与环境适应力。致病性菌株PFGE优势带型相对集中,地域分布广泛,多数人源菌株与分离自当地的动物、食品菌株带型一致,应警惕通过家畜家禽、食品及外环境等多种来源感染人的风险。

我国牛羊主产区小肠结肠炎耶尔森菌的病原特征研究

目的对2018-2020年我国牛羊主产区牛羊源小肠结肠炎耶尔森菌进行病原特征研究,为该菌的防控提供科学依据。方法对来自于6个地区的2291份样本进行分离培养、PCR鉴定、玻片凝集以及药敏试验,以掌握其感染情况、毒力基因型和血清型的分布以及耐药情况。结果在2291份样本中,共分离出该菌109株,总检出率为4.76%,其中辽宁地区检出率最高(20.42%),并且各地区检出率差异有统计学意义(χ^(2)=288.153,P<0.01),而各种类样本检出率差异无统计学意义(χ^(2)=1.734,P>0.05)。在本次分离菌株中,ystB基因为优势毒力基因,O∶5,27为优势血清型,菌株对氨苄西林、红霉素、磺胺异恶唑和头孢噻吩耐药率为100%,对多粘菌素B和氟苯尼考敏感率为100%。结论牛、羊源小肠结肠炎耶尔森菌在全国牛、羊主产区分布不广泛,但其多重耐药率较高,建议加强对该菌耐药性的监测与管理。