干细胞因子对糖尿病小鼠小肠Cajal间质细胞的影响

目的探讨外源性干细胞因子(stem cell factor,SCF)对糖尿病(diabetes mellitus,DM)小鼠小肠Cajal间质细胞的影响。方法将雄性Balb/c小鼠随机分为正常对照组、糖尿病组(DM组)、糖尿病+外源性SCF组(DM+SCF组),DM组和DM+SCF组一次性腹腔注射(ip)链脲佐菌素(STZ,150 mg/kg)造模,选取成功模型;DM+SCF组再ip SCF 0.2μg/(kg.d);正常组和DM组每天ip等量的磷酸盐缓冲液(pH=7.4)。所有小鼠干预6周结束后,给予印度墨水灌胃测定小肠传输速率,免疫组化观察小肠c-kit的表达,Western blot观察c-kit蛋白的表达。结果饲养6周后,DM+SCF组的体质量(g)、推进率、c-kit阳性细胞数(个/hpf)、c-kit蛋白的表达均比DM组明显增加(P均<0.05),仍低于正常组(P均<0.05);DM+SCF组的血糖(mmol/L)比DM组明显降低(P<0.01),仍高于正常组(P<0.05)。结论外源性SCF可以逆转Cajal间质细胞的异常改变,并对糖尿病小鼠的小肠动力障碍有一定的改善作用。

小鼠小肠Cajal间质细胞的分布与c-kit mRNA表达初步研究

目的 观察Cajal间质细胞在BALB c小鼠小肠中的分布及c kitmRNA表达的研究。方法 选取成年BALB c小鼠,采用免疫组化法鉴定Cajal间质细胞,采用RT PCR及mRNA提取法检测c kitmRNA的表达情况。结果 Cajal间质细胞主要分布在小肠环肌层纵肌层间以及浆膜下区,小肠肌条中c kitmRNA表达量很低,需经过mRNA提取后方能检测出。结论 明确了Cajal间质细胞在BALB c小鼠小肠中的分布,探讨了c kitmRNA表达情况并进一步提出了研究c kitmRNA表达的方法,为更深入研究Cajal间质细胞奠定了基础。

体外培养小鼠小肠Cajal间质细胞及其形态学变化

目的:分析Cajal间质细胞(interstitialcellsofCajal,ICC)体外培养的要点,研究ICC在体外培养过程中的形态学变化;方法:体外分离、培养小鼠小肠ICC,采用ICC特异的c-kit抗体进行免疫荧光鉴定,应用光学显微镜和激光共聚焦显微镜观察其在体外生长30d的形态学改变过程。结果:体外分离、培养的ICC,贴壁后24h呈三角形或梭形,有少量突起;体外培养72h的ICC即出现明显的长突起,并且可与周围ICC相互形成突触连接,7d以上的ICC可以形成广泛的连接。体外培养的ICC可以在体外长时间培养,并且未发现明显的形态学变化。结论:体外培养3d后ICC形成类似于体内的网络连接,即可用于下一步实验,并可以稳定培养至少30d以上。ICC在体外的成功培养有望为深入研究ICC提供新的手段和借鉴。

缺血再灌注损伤对豚鼠小肠Cajal间质细胞的影响

目的探讨豚鼠缺血再灌注损伤模型中,小肠Cajal间质细胞(ICCs)网络的变化情况。方法采用夹闭肠系膜血管80 min然后再恢复血流12 h或者4 d的方法建立缺血再灌注损伤模型,冰冻切片和全层铺片并结合KIT免疫细胞化学染色观察。结果缺血80 min再灌注12 h,在切片和铺片上均可见ICCs明显减少,其中IC-MY减少最显著,再灌注4 d ICCs的数量恢复正常。结论小肠壁内ICCs在缺血再灌注模型中可明显减少,但随着时间延长,ICCs逐渐恢复正常的细胞网络。

阻断c-kit对小鼠小肠Cajal间质细胞的影响及机制初探

目的:观察阻断c-kit对小鼠小肠Cajal间质细胞(ICC)的影响以及与Cajal间质细胞c-kit基因表达的关系。方法:选取新出生Balb/c小鼠,腹腔内隔天注射c-kit抗体(ACK2)100μg,共5次,对照组注射生理盐水,于小鼠出生后第10天观察小肠Cajal间质细胞的分布情况并检测小肠肌条c-kitmRNA及蛋白的表达。结果:阻断c-kit后小鼠小肠中未能明显观察到ICC分布,并且c-kitmRNA表达以及c-kit蛋白表达明显减少。结论:阻断c-kit可导致小鼠小肠Cajal间质细胞缺失,与ICCc-kit基因水平表达下调引起ICC发育受影响有关。

快速进入高海拔地区对大鼠小肠Cajal间质细胞和缝隙连接蛋白43的表达影响

目的通过观察快速进入高海拔地区大鼠小肠动力紊乱发生过程中,小肠Cajal间质细胞(interstitial cell of Cajal,ICC)与缝隙连接蛋白43(Connexin 43,Cx43)的表达变化,探讨其发病机制。方法 30只SD雄性大鼠以低海拔地区(海拔400 m)为对照组,并以进入高海拔地区(海拔4 300 m)后的时间节点依次分为3 d和14 d组,每组10只。测定各组大鼠小肠电活动数据,应用电子显微镜观察ICC的微观结构变化,应用双重免疫荧光组织化学染色法观察同区域ICC和Cx43的表达变化。结果大鼠快速进入高海拔地区后,其小肠电波幅及波频于3 d组下降到最低点(P<0.05)。使用双重免疫荧光组织化学染色法同步标记小肠电起搏区ICC和Cx43,所得免疫荧光强度同样在高海拔地区3 d组表达下降到最低点(P<0.05)。结论 ICC细胞缝隙连接受损及其与Cx43的表达异常导致ICC细胞间、ICC与消化道平滑肌(smooth muscle cell,SMC)间物质及电信号传递障碍,可能是快速进入高海拔地区胃动力紊乱形成的重要机制之一。

牵张应变对小肠Cajal间质细胞起搏电流的作用

目的研究牵张应变刺激对体外培养的小肠Cajal间质细胞(ICC)起搏电流的影响。方法利用II型胶原酶消化并在含有干细胞因子的SmGM培养基中培养ICC,72h后采用免疫荧光细胞化学方法鉴定培养的ICC。利用传统全细胞记录模式膜片钳技术记录正常小肠ICC起搏电流,然后采用对细胞直接施加正压和灌流低渗溶液的两种方法给细胞膜施加张应变刺激,以观察牵张应变对小肠ICC起搏电流的影响。结果培养72h后的ICC在光镜下,胞体呈三角形或梭形,且自胞体发出2￣4条长突起,并与邻近ICC突起相互连接成网络状;荧光显微镜下观察ICC胞体和突起酪氨酸激酶受体c-kit表达呈阳性;在膜电位钳制在-60mV的条件下,可以记录到自发而节律性内向电流,即起搏电流;在传统全细胞记录模式下,两种张应变刺激均可以激活一种内向电流同时明显增加起搏电流的振幅及频率。结论牵张应变对胃肠壁的刺激可能作用于胃肠平滑肌节律性运动的起搏细胞ICC并改变其电生理特性,从而调节胃肠平滑肌运动的基础张力和频率。

快速进入高海拔地区对大鼠小肠电活动及小肠Cajal间质细胞微观结构和功能的影响

目的快速进入高原后,不同海拔高度及时间点下大鼠小肠电活动变化及其对小肠Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)微观结构和功能的影响。方法 130只SD雄性大鼠随机分为低海拔地区组(A组,海拔400 m)、中度海拔地区组(B组,海拔2 260 m)和高海拔地区组(C组,海拔4 300 m),B、C组又以进入高原地区后的时间划分为1 d、3 d、5 d、7 d、10 d和14 d组,每组10只大鼠。测定各组大鼠空肠电活动数据,并应用免疫荧光染色及电子显微镜观察小肠ICC的功能及微观结构变化。结果大鼠小肠电波幅及波频在中度海拔地区5 d组及高海拔地区3 d组行到最低点(P<0.05),且高海拔地区3 d组受损伤更加明显(P<0.05)。小肠ICC的功能及微观结构也可同步观察到类似改变,于中度海拔地区5 d组及高海拔地区3 d组受损伤最明显,电镜下可观察到ICC的缝隙连接减少、细胞器减少并出现凋亡小体等,并以高海拔地区3 d组最显著。用c-kit免疫荧光标记同部位ICC,也可观察到中度海拔地区5 d组及高海拔地区3 d组免疫荧光强度最低(P<0.05),且高海拔地区3 d组降低更显著(P<0.05)。结论快速进入高原对于大鼠小肠电活动影响显著,且海拔高度越高大鼠小肠电活动受损越严重,下行速度越快。大鼠小肠ICC微观结构及功能也出现相应同步损伤,表明ICC可能在快速进入高原胃肠动力紊乱形成机制中广泛参与并发挥重要作用。

Balb/c小鼠小肠Cajal间质细胞形态学特征及慢波活动的研究(英文)

目的观察未成年Balb/c小鼠小肠Cajal间质细胞(ICC)的形态及分布,并测定其慢波活动情况,以进一步认识ICC的发育。方法首先,通过免疫组织化学方法观察10天大小Balb/c小鼠小肠ICC的分布及形态特征,采用电镜观察ICC的超微结构;再分别测定10d大小Balb/c小鼠及成年Balb/c小鼠小肠在体慢波活动情况。结果ICC主要分布于小肠环肌层与纵肌层间区(称之为ICC-MY),以及环形肌的内薄层与外厚层间(称之为ICC-DMP)。ICC-MY呈现为连续性分布特点。电镜结果显示ICC有2个以上长突起,胞浆内含有大量的线粒体,而中间丝很少见。成年小鼠小肠慢波活动表现为近似正弦波样曲线,频率为(17.78±1.52)次/min,振幅为(0.16±0.02)mV,10d大小Balb/c小鼠小肠慢波活动类似于成年小鼠,但其频率为(14.00±0.98)次/分,振幅为(0.09±0.02)mV,均明显低于成年小鼠(P<0.01)。结论Balb/c小鼠小肠主要分布着ICC-MY及ICC-DMP两类ICC,为双极或多极细胞,ICC-MY相互连接成网络状;未完全发育好的ICC表现出不成熟的慢波活动。

重型颅脑损伤对小鼠小肠Cajal间质细胞与缝隙连接蛋白43影响的实验研究

目的通过观察重型颅脑损伤(SHI)后小鼠末端回肠离体肌条运动,肠肌丛Cajal间质细胞(ICC)数量和小肠组织缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的变化,探讨SHI后肠动力障碍的可能机制。方法将36只8周龄清洁级健康雄性C57BL/6小鼠,按随机数字表法分为创伤组(参照Feeney自由落体法建立小鼠SHI模型)和对照组(仅开骨窗不打击),每组18只。于伤后3、7、14d取末端回肠,多通道生物信号采集与处理系统RM6280监测离体肌条自主收缩运动、激光共聚焦和Western blot检测ICC细胞数量及Cx43蛋白表达。结果创伤组伤后3d平滑肌收缩模式与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),且收缩节律紊乱;7d时张力下降(P<0.05);14d时张力、频率与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。创伤组各时相点ICC细胞数量显著低于对照组(P<0.01),ICC分支变少且网络稀疏。创伤组Cx43表达量显著低于对照组(P<0.01)。结论小鼠SHI后肠道平滑肌自主收缩运动紊乱,ICC数量和Cx43表达的减少或缺失,可能是造成肠神经-ICC-平滑肌网络结构电信号传递障碍,引起肠道收缩模式紊乱,导致肠动力障碍发生的机制之一。

健脾清肠方含药血清对小鼠小肠Cajal间质细胞增殖的影响

目的研究健脾清肠方含药血清(Jianpi Qingchang Decoction containing serum,JQD-CS)对小鼠小肠Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)增殖的影响。方法体外培养小鼠小肠ICC并鉴定,制备JQD-CS,MTT检测不同浓度JQD-CS对ICC的增殖作用。结果适度浓度(≤20%)的JQD-CS,ICC的OD值随着含药血清浓度的增加而升高。结论适度浓度的JQD-CS可对ICC增殖分化起促进作用。

新生小鼠小肠Cajal间质细胞增殖的实验研究

目的探讨在新生小鼠小肠Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)的发育过程中是否出现增殖。方法采用新生2 d(P2d)、14 d(P14d)和24 d(P24d)的小鼠小肠,应用BrdU腹腔注射,24 h后取材,Kit和BrdU免疫荧光染色。结果P2d小鼠小肠,可见大量Kit/BrdU双重标记阳性细胞,这些细胞的形态与成熟ICC基本相似,这些细胞在P14d时减少,而在P24d消失。统计学分析发现,不同时间点之间Kit/BrdU双标阳性细胞数量存在显著差别(P<0.05)。结论在小肠生后发育过程中,出现了ICC增殖,而这种增殖在发育过程中逐渐减弱,最后在成年前消失。

体外培养小鼠小肠Cajal间质细胞的电生理学特性

目的采用膜片钳技术观察体外培养的小鼠Cajal间质细胞(ICC)的电生理学特性,为进一步研究不同种类ICC的功能奠定实验基础。方法用C-Kit染色法对ICC进行形态学鉴定后,分别在全细胞模式、膜内向外和细胞吸附的钳制模式下,观察胞内低钙和钙调蛋白抑制剂对ICC起搏电流的影响。结果免疫学鉴定结果表明,培养的大部分细胞均为ICC。在全细胞模式下,高浓度钙鳌合剂使细胞内游离钙浓度降低后,可以激活持续性内向电流;在膜内向外的膜片钳模式下,当灌流液中钙浓度由1μmol/L降低到0.1μmol/L时,激活幅度大和频率快的自发性内向电流;在全细胞模式下,钙调蛋白抑制剂(W-7)可以激活持续性内向电流的同时增加自发性内向电流的幅度;在细胞吸附模式下,W-7激活幅度大和频率快的自发性内向电流。另一种细胞电生理学特性却不受细胞内低钙环境和W-7的影响。结论在培养的ICC中对细胞内低钙和W-7敏感的细胞可能就是具有起搏功能的肌层间ICC,而对细胞内低钙和W-7不敏感细胞可能就是不具有起搏功能的肌间ICC。

腹腔注射肿瘤坏死因子α对鼠小肠Cajal间质细胞损伤的研究

目的探讨腹腔注射肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)对鼠小肠Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)的损伤作用。方法 BALB/c裸鼠20只,腹腔注射TNF-α(50μg/kg)后,随机分为4组。分别于注射后即刻(0 h)、6 h、12 h和24 h处死动物,取上段小肠标本。利用HE染色、免疫荧光及透射电镜观察小肠组织、ICC细胞及细胞网络的损伤情况,并通过Western blot方法检测干细胞因子(stem cell factor,SCF)蛋白的表达情况。结果腹腔注射TNF-α后引起小肠组织明显的炎症细胞浸润。12 h后观察到ICC细胞网络结构的缺失,ICC细胞内线粒体肿胀,变形,结构模糊,线粒体嵴结构减少或消失。SCF蛋白表达呈现升高后再降低的变化过程。结论腹腔注射TNF-α对鼠小肠ICC细胞及细胞网络具有损伤作用。

糖尿病大鼠小肠Cajal间质细胞超微结构的改变

目的 明确糖尿病大鼠小肠Cajal间质细胞 (interstitialcellsofCajal,ICC)超微结构的变化 ,探讨糖尿病小肠运动功能改变原因。方法 用链尿佐菌素建立大鼠糖尿病模型 ,3个月后测定小肠传输速度 ,对小肠组织进行透射电镜观察。结果 糖尿病大鼠小肠传输速度明显延迟 ,Cajal间质细胞与其他细胞间的缝隙连接显著减少、结构破坏、连接松散 ;细胞器变性、减少 ;胞质广泛溶解 ;核周间隙增宽。结论 糖尿病Cajal间质细胞变性可能是导致小肠运动功能低下的一个重要原因。

小鼠小肠Cajal间质细胞和氮能与胆碱能神经元的数量和形态生后发育特征

目的观察出生后至成年小鼠小肠Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)、氮能神经元、胆碱能神经元的发育情况。方法取出生后7d、28d和60d小鼠小肠制作全层铺片,利用(免疫)组织化学等技术分别显示ICC、氮能神经元、胆碱能神经元的数量和形态。结果小鼠生后小肠ICC的数量明显增多,但单位面积细胞数量随小肠长度和面积的增加而降低,在生后28d达到成体水平。而氮能神经元和胆碱能神经元的数量生后即达成体水平,随年龄增加仅见神经突起增长、神经纤维增粗以及神经网络的密度变疏等改变。结论小鼠小肠ICC和胃肠壁内的肠神经系统(enteric nervous system,ENS)神经元的发育并非同步,ICC的发育成熟明显晚于ENS,提示出生后早期局部微环境更易影响ICC的发育与成熟,可能与部分婴幼儿胃肠运动功能障碍疾病的发生发展有关。

大承气汤对Wistar大鼠小肠Cajal间质细胞起搏电流影响分析

目的:探讨大承气汤含药动物血浆对Wistar大鼠小肠Cajal间质细胞起搏电流影响,为大承气汤对胃肠道Cajal间质细胞的离子通道的研究提供参考依据。方法:选取8~14天SPF级的Wistar大鼠共20只,雌雄不限,培养大鼠小肠Cajal间质细胞,并采用免疫细胞化学法对其进行鉴定;取Wistar大鼠20只,体重350±20克,雌雄不限,制备服大承气汤含药动物血浆;采用膜片钳技术记录并分析大乘气汤含药动物血浆对Wistar大鼠小肠Cajal间质细胞起搏电流影响。结果:免疫细胞化学法鉴定小肠Cajal间质细胞培养成功。大乘气汤含药血浆条件下,Wistar大鼠小肠Cajal间质细胞起搏电流为~418±60PA,电流振幅相对对照组增加52.6%,差异有统计学意义(P<0.05);频率为15±0.82次/分钟,相对对照组增加76.4%,差异有统计系意义(P<0.05)。结论:大承气汤含药动物血浆对Wistar大鼠小肠Cajal间质细胞的起搏电流有明显的加强作用,大承气汤可通过加强胃肠道Cajal间质细胞起搏电流,改善MODS胃肠运动功能障碍。

胃癌细胞腹腔种植模型的胃小肠Cajal间质细胞表达的分析

目的观察比较胃小肠Cajal间质细胞的表达。方法选取健康雌性裸鼠18只,随机分成正常对照组、胃癌细胞培养液组(培养液组)和胃癌细胞腹腔种植组(模型组),每组6只。分别于术后的3周,5周采集标本。采用免疫荧光法检测各组裸鼠胃、小肠壁层中c-Kit的表达并用软件测量其灰度值。结果①模型组、胃癌细胞培养液组胃壁c-Kit与正常对照组相比蛋白表达水平降低(P<0.01);②模型组、胃癌细胞培养液组小肠壁c-Kit与正常对照组相比蛋白表达水平降低(P<0.01);③小肠壁的Ca-jal间质细胞数量的减少明显高于胃壁的Cajal间质细胞数量的减少(P<0.05)。结论胃癌晚期的胃肠蠕动减慢与小肠壁中Cajal间质细胞的减少有直接的关系。

急性细菌性腹膜炎对豚鼠小肠Cajal间质细胞的影响

目的 探讨豚鼠腹膜炎模型中小肠Cajal间质细胞网络的变化情况。方法 利用腹腔内注射大肠杆菌和10％BaSO4肉汤佐剂的方法建立腹膜炎模型，冰冻切片和全层铺片并结合KIT免疫细胞化学染色观察。结果 腹膜炎12～24h，腹膜炎症状最明显，在切片和铺片上均可见ICCs明显减少，其中IC-MY减少最显著，48～96h后ICCs的数量逐渐恢复正常，同时豚鼠的腹膜炎反应也减轻甚至康复。结论 小肠壁内ICCs在腹膜炎模型中可明显减少，但随着时间延长，ICCs逐渐恢复正常的细胞网络。