小肽转运载体1的生物学特性及其功能

小肽转运载体1(PepT1)是H+/肽偶联的转运载体。该载体通过利用肠腔到肠细胞的质子梯度来转运二肽和三肽。PepT1对游离氨基酸、多肽在动物肠道内的转运调控具有重要作用。本文综述了PepT1的分类、生物学特征及功能,并探讨了影响PepT1活性调控的因素。

驴小肽转运载体1基因的克隆、序列分析及组织表达研究

小肽转运载体1(PepT1)在动物肠道小肽的摄取过程中发挥重要作用。本试验旨在研究驴(Equus asinus)PepT1(ePepT1)基因的分子克隆、序列分析和组织表达。提取驴肠道组织总RNA,PCR克隆ePepT1基因片段,测序验证并进行序列分析;采用实时荧光定量PCR(real⁃time qPCR)方法分别测定驴肾脏、脾脏、心脏、肝脏、肺脏、胃、十二指肠、空肠和回肠组织中ePepT1基因的相对表达量。结果表明:ePepT1开放阅读框为2124 bp,共编码707个氨基酸残基。蛋白质理化性质预测显示,ePepT1蛋白分子质量为78.6 ku,等电点为7.52,具有11个跨膜区(TMD),且TMD 9和TMD 10之间有1个大的细胞外环;ePepT1蛋白有5个胞外N-糖基化位点,5个胞外蛋白激酶C(PKC)作用位点和3个蛋白激酶A(PKA)作用位点。组织分布研究发现,ePepT1基因在各组织均有表达,但在肠道(十二指肠、空肠和回肠)中相对表达量最高。综上所述,本研究首次克隆了ePepT1基因,研究了其组织表达规律,为进一步研究驴肠道小肽吸收提供了基础。

过表达驴小肽转运载体1 CHO细胞的构建

为了研究驴小肽转运载体1(oligopeptide transporter1,PepT1)的转运功能,试验取驴肝脏组织,对PepT1基因进行克隆构建了驴PepT1的表达载体pcDNA3.1-PepT1,并将其转染至中华仓鼠卵巢(CHO)细胞中,采用Western-blot方法检测转染效率,然后以未转染的CHO细胞作对照进一步检测转染后CHO细胞对β-丙氨酸-赖氨酸-N-7-氨基-4-甲基香豆素-3-乙酸(β-Ala-Lys-AMCA)的摄取情况。结果表明:成功扩增出驴PepT1基因CDS序列,并构建了表达载体pcDNA3.1-PepT1;转染pcDNA3.1-PepT124 h后,在CHO细胞中检测到过表达的驴PepT1蛋白,且过表达驴PepT1蛋白的CHO细胞对β-Ala-Lys-AMCA的摄取量显著高于对照组(P<0.05)。说明成功构建了pcDNA3.1-PepT1表达载体并转染至CHO细胞中,实现了驴PepT1蛋白的瞬时过表达。

鱼类肠道小肽转运载体PepT1的研究进展

从生理特性,cDNA序列和蛋白质分子结构,组织分布与表达这三个方面叙述了欧洲鳗鲡(An-guilla anguilla),罗非鱼(Oreochromis mossambicus),rockfish(Sebastes caurinus),银鱼(Chionodraco hama-tus),斑马鱼(Danio rerio),亚洲泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus),大西洋鳕鱼(Gadus morhua)和欧洲黑鲈(Dicentrarchus labrax)中有关肠道Ⅰ型肽转运载体(PepT1)方面的研究进展情况。

海东鸡种鸡日粮精氨酸水平对子代7日龄雏鸡小肠黏膜中营养转运载体及消化酶基因表达影响

为探讨种鸡日粮中添加不同水平的精氨酸对海东鸡雏鸡小肠黏膜中营养转运载体(PepT1、SGLT1、GLUT2)及消化酶(APN、SI)基因表达影响,将440只种鸡分为5组,分别添加0.96%、1.16%、1.36%、1.56%和1.76%的L-精氨酸。种鸡饲养44 d,对7日龄雏鸡的十二指肠、空肠、回肠取样,通过实时荧光定量PCR技术对各肠段内相应目的基因进行表达量测定。结果显示:海东鸡不同肠段PepT1、SGLT1、APN mRNA的相对表达量差异极显著(P<0.01),GLUT2和SI mRNA相对表达量存在显著差异(P<0.05);不同L-精氨酸水平海东鸡肠道PepT1、GLUT2、SGLT1、SI mRNA相对表达量存在极显著差异(P<0.01),APN mRNA差异不显著(P>0.05)。由此可见,海东鸡肠道营养转运载体PepT1、SGLT1、GLUT2及消化酶APN、SI mRNA表达具有肠段及L-精氨酸水平的差异性,日粮添加1.16%L-精氨酸对于肠道整体营养转运载体及消化酶的基因表达影响最佳。