雷公藤内酯醇对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠小胶质/巨噬细胞极化的影响

目的观察雷公藤内酯醇(Tri)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠小胶质/巨噬细胞极化的影响。方法60只SJL/J小鼠随机分为对照组、模型组、Tri组,每组各20只。将髓鞘蛋白脂质蛋白139-151(PLP139-151)、完全弗氏佐剂、灭活结核杆菌混合,乳化制成诱导乳剂。模型组、Tri组腹部皮下注射乳剂,并辅以腹腔注射百日咳毒素,诱导小鼠EAE模型;对照组予以等容积生理盐水。免疫后第7天,Tri组给予腹腔注射Tri 100μg/(kg·d),对照组和模型组给予腹腔注射等容积的生理盐水,均每天1次,持续7 d。观察3组免疫后第14天神经功能评分。HE染色观察颈膨大病理变化,免疫荧光法测定大脑小胶质/巨噬细胞M1、M2型标志物CD80、CD206蛋白的表达,ELISA法测定腰膨大促炎因子TNF-α蛋白与抗炎因子TGF-β1蛋白的表达。结果对照组神经功能评分及病理无改变,而模型组、Tri组出现神经功能评分升高,颈膨大可见炎性细胞浸润;与模型组比较,Tri组小鼠神经功能评分降低(P<0.05),炎性细胞浸润程度减轻(P<0.05),CD80蛋白和TNF-α蛋白的表达降低(P<0.05),CD206蛋白和TGF-β1蛋白的表达升高(P<0.05);模型组CD80蛋白的表达高于CD206(P<0.05);Tri组CD206蛋白的表达高于CD80(P<0.05)。结论Tri对EAE小鼠有治疗作用,其机制可能与促进小胶质/巨噬细胞从M1向M2极化有关。

Necrostatin-1通过抑制细胞凋亡及M1型小胶质/巨噬细胞极化促进小鼠脊髓损伤后运动功能恢复

目的研究坏死抑制蛋白1(necrostatin-1)对小鼠脊髓损伤(SCI)的保护作用,并探讨该作用与细胞凋亡及M1型小胶质/巨噬细胞介导的促炎性免疫的相关性。方法将雄性C57BL/6小鼠随机分为空白对照组、necrostatin-1对照组、脊髓损伤(SCI)模型组、SCI后necrostatin-1治疗组,每组20只。各组小鼠在造模后1、3、5、7、10、14 d,进行旷场试验BMS评分及标准化尾高指数测定,以评价小鼠SCI后的运动功能恢复;于损伤后1、3、7、14 d,TUNEL染色观察脊髓组织的细胞凋亡情况;损伤后14 d,采用Western blot法及免疫组织化学染色检测脊髓组织中M1型小胶质/巨噬细胞标志物诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的水平,采用实时定量PCR检测脊髓组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18、IL-4、IL-5及IL-10的mRNA水平。结果Necrostatin-1可明显促进小鼠SCI后运动功能恢复,减少SCI区周围细胞凋亡;降低M1型小胶质/巨噬细胞标志物iNOS的蛋白表达及iNOS阳性小胶质/巨噬细胞数量,下调促炎细胞因子TNF-α、IL-18及IL-1β的转录水平,同时促进抑炎性细胞因子IL-4、IL-5及IL-10的转录。结论Necrostatin-1可通过抑制细胞凋亡及抑制炎性免疫反应显著改善小鼠SCI后运动功能的恢复。

自身免疫性脑脊髓炎小鼠中枢神经系统小胶质/巨噬细胞的作用机制研究

目的通过单细胞测序技术分析实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimentalautoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠中枢神经系统免疫微环境的组成,探讨小胶质/巨噬细胞的不同亚群在多发性硬化(multiplesclerosis,MS)发生发展中的作用。方法 下载基因表达数据库(geneexpressionomnibus,GEO)中的scRNA-seq数据集(GSE130119),利用R语言分析EAE组与正常对照组小鼠存在差异的小胶质/巨噬细胞亚群及差异基因,通过基因本体论(gene ontology, GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析等论证组间存在显著差异的细胞亚群在MS疾病进程中的作用机制。结果 与对照组相比,EAE组小鼠的小胶质/巨噬细胞亚群比例发生了不同程度的改变;GO和KEGG富集分析结果显示,EAE组小鼠小胶质/巨噬细胞表现出显著的与免疫反应和氧化应激相关功能以及缺氧相关特征。结论 中枢神经系统小胶质/巨噬细胞可能通过免疫反应、氧化应激反应的功能及缺氧相关特征参与MS的发生发展。

小胶质/巨噬细胞极化在脊髓损伤中的作用

脊髓损伤是脊柱外科常见疾患,严重影响患者生活质量和劳动力。其发病机制目前尚未完全阐明,而炎症可能在脊髓损伤发生中起重要作用。小胶质/巨噬细胞是参与脊髓损伤炎症反应的重要细胞,在炎症损伤过程中小胶质/巨噬细胞可表现为M1或M2表型,分别发挥脊髓炎症损伤和修复作用。同时,小胶质/巨噬细胞极化在脊髓损伤发生中还受核因子κB、p38促分裂原活化的蛋白激酶等信号通路调节。因此,通过调节小胶质/巨噬细胞由M1型向M2型转换,可能为脊髓损伤提供新的靶点,为脊髓损伤修复提供新的思路。

骨髓间充质干细胞源性外泌体促进小胶质细胞/巨噬细胞M2极化抑制急性期脑缺血大鼠炎症反应

为探究骨髓间充质干细胞(bone marrow meaenchymal stem cells,BMSCs)源性外泌体(exosomes,Exos)对急性期脑缺血大鼠小胶质细胞/巨噬细胞M1/M2极化的影响,采用超高速离心法分离提取外泌体并鉴定;采用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型;采用Longa评分和角实验评价大鼠神经功能,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazole chloride,TTC)染色检测大鼠脑梗死体积;采用CD16/32/Iba1、CD206/Iba1免疫荧光双标法检测小胶质细胞/巨噬细胞M1/M2表型;采用RT-qPCR检测大鼠脑缺血周边区CD86、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitricoxide synthase,iNOS)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)、精氨酸酶1(arginase-1,Arg-1)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)和转化生长因子β(transforming growth factor beta,TGF-β)的mRNA表达。实验结果表明,BMSC-Exos减少缺血周边区CD16/32+/Iba1+阳性细胞数量(P<0.01),增加CD206+/Iba1+阳性细胞数量(P<0.01),减少iNOS、CD86和TNF-α的mRNA表达,增加Arg-1、TGF-β和IL-10的mRNA表达(P<0.05或P<0.01)。本研究提示BMSC-Exos调控急性期脑缺血大鼠小胶质细胞/巨噬细胞M1/M2极化,减轻神经炎症,改善脑缺血损伤。

慢性局灶脑缺血区小胶质细胞/巨噬细胞呈持续性反应

目的 :观察小胶质细胞 /巨噬细胞对慢性局灶脑缺血的反应。方法 :运用局灶脑缺血模型和免疫组织化学染色方法对 36只成年雄性SD大鼠的大脑皮质缺血区和尾壳核区的ED1和OX42阳性细胞的反应时程、分布形式和细胞形态变化进行了探查。结果 :在脑缺血 3d ,ED1阳性细胞呈圆形 ,大多数分布于大脑皮质缺血区周围和缺血侧的尾壳核 ,仅有少量ED1阳性细胞位于缺血区中央。阳性细胞明显多于对照组。脑缺血 2周 ,ED1阳性细胞数量最多 ,主要分布于大脑皮质缺血区中央和尾壳核外侧部。脑缺血 6周 ,其数量稍有下降 ,细胞形态无明显变化。脑缺血 3d时 ,OX42阳性细胞呈“星状” ,胞体肥大 ,数量增加 ,分布于皮质缺血区的外周和尾壳核。缺血中央区的阳性细胞数量少。脑缺血 2周 ,OX42阳性细胞胞体明显增大 ,分支增粗。在大脑皮质缺血区中央出现大量圆形的没有明显突起的OX42阳性细胞。此时 ,尾壳核外侧部的阳性细胞的数量和胞体明显增加。脑缺血 6周 ,阳性细胞的数量稍有下降。结论 :小胶质细胞 /巨噬细胞对局灶脑缺血发生持续性的反应 。

Nrf2基因敲除对小鼠蛛网膜下腔出血后小胶质细胞/巨噬细胞活化的影响

目的脑内小胶质细胞/巨噬细胞(microglia/macrophage,M/M)在蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)脑组织损伤和修复中具有重要作用。文中研究小鼠SAH后M/M活化及Nrf2基因敲除对M/M活化的影响。方法野生型ICR小鼠70只,来源于ICR的Nrf2基因敲除小鼠35只,采用小鼠视交叉注射自体血建立SAH模型。假手术组行同样抽血、钻孔及置针,但不行注血。实验分为4组,野生型假手术组、野生型SAH组、基因敲除假手术组、基因敲除SAH组。SAH术后第1、3、5天取标本,用Western blot法和免疫组化法检测M/M特异性蛋白Iba1的表达;同时Western blot检测SAH后第3天Iba1蛋白表达,免疫荧光染色检测SAH后第3天CD16/32+Iba1+细胞数量。结果 Western blot检测结果显示野生型假手术组、野生型SAH组第1、3、5天Iba1蛋白表达灰度值分别为0.491±0.039、0.657±0.069、0.930±0.046和0.926±0.046,而Iba1蛋白免疫组织化学染色平均光密度值为0.412±0.122、0.625±0.135、0.963±0.213和0.978±0.224,野生型SAH组第1、3、5天Iba1蛋白表达均较野生型假手术组明显增加(P<0.05),但野生型SAH组第3天与第5天Iba1表达差异无统计学意义(P>0.05);Western blot结果示野生型假手术组、基因敲除假手术组、野生型SAH组、基因敲除SAH组SAH后第3天Iba1蛋白表达灰度值分别为1.157±0.080、1.162±0.073、1.580±0.171和1.913±0.220,CD16/32+Iba1+细胞数量分别为0、0、30.200±6.300和42.800±6.260(个/HP),SAH后第3天基因敲除SAH组Iba1蛋白表达较野生型SAH组增加(P<0.05),且基因敲除SAH组CD16/32+Iba1+细胞数较野生型SAH组明显增多(P<0.05)。结论小鼠SAH后M/M活化增加,Nrf2基因敲除促进了SAH后M/M的活化和M1极化。

大鼠脑缺血再灌注时小胶质细胞或巨噬细胞的活化与增殖

目的 研究脑缺血再灌注时小胶质细胞 /巨噬细胞的活化与增殖。方法 阻塞大鼠大脑中动脉 2 h再灌注 0 .5～ 48h制成脑缺血模型 ,以免疫组化与凝集素 (GSI-B4 )组化法观察小胶质细胞 /巨噬细胞在脑组织的分布及形态特点。结果 0 .5 h时 ,呈现有大量形态各异的 GSI-B4 阳性小胶质细胞与巨噬细胞 ,随后下降 ;1 2～ 48h,数量再次且持续增高 ,并呈不同的形态 ,视前区、杏仁皮质核浅层及其脑膜有阳性巨噬细胞 ;3～ 48h,在缺血区有 CD45阳性的活化小胶质细胞 ;缺血再灌注各组 ,室管膜及室管膜下层有 PCNA强阳性细胞 ,杏仁核、杏仁皮质核、视前区及其软脑膜有 PCNA强阳性细胞 ;有 PCNA与 CD45双标阳性的细胞。结论 缺血再灌注时 ,不同区域小胶质细胞形态呈明显的异形性 ,外源性巨噬细胞可能来自血单核细胞的浸润、脑膜巨噬细胞和室管膜及室管膜下层细胞的增生、浸润和迁移 ;CD45是小胶质细胞活化的标志。

脑缺血再灌注后STIM1通过内质网应激促进小胶质/巨噬细胞M1型活化的作用研究

目的探讨基质相互作用分子1(STIM1)对脑缺血再灌注损伤后小胶质/巨噬细胞M1型活化的影响及机制。方法(1)动物实验:采用随机数字表法将20只雄性C57BL/6J小鼠分为假手术组、大脑中动脉缺血再灌注(MCAO/R)组、MCAO/R+si-Ctrl组及MCAO/R+si-STIM1组,后3组小鼠建立MCAO/R模型,MCAO/R+si-Ctrl组及MCAO/R+si-STIM1组小鼠分别转染空载体对照病毒和STIM1基因敲除慢病毒。观察STIM1转染效率及各组小鼠中小胶质/巨噬细胞M1型活化标记物分化抗原86(CD86)的表达情况。(2)细胞实验:将原代小胶质细胞分为Ctrl组、氧糖剥夺/复氧(OGD/R)组、OGD/R+si-Ctrl组、OGD/R+si-STIM1组、OGD/R+溶媒组及OGD/R+4-苯基丁酸(4-PBA)组。后5组细胞构建OGD/R模型,OGD/R+si-Ctrl组、OGD/R+si-STIM1组细胞分别转染空载体对照病毒和STIM1基因敲除慢病毒;OGD/R+4-PBA组细胞在OGD/R造模前24 h使用1 mmol/L预处理1 h以抑制内质网应激(ERS),OGD/R+溶媒组细胞同时间使用0.5%二甲基亚砜(DMSO)预处理1 h。采用Western blotting、ELISA、RT-qPCR等方法检测细胞模型中小胶质/巨噬细胞M1型活化标记物CD86、炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA、IL-1β及ERS相关蛋白[转录因子C/EBP同源蛋白(CHOP)、活化转录因子4(ATF4)]的表达情况。结果(1)动物实验:MCAO/R+si-STIM1组STIM1表达水平较假手术组、MACO/R组及MCAO/R+si-Ctrl组均明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与MCAO/R组及MCAO/R+si-Ctrl组比较,MCAO/R+si-STIM1组小鼠缺血灶周围CD86与Iba-1共表达的小胶质/巨噬细胞数显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)细胞实验:与OGD/R组及OGD/R+si-Ctrl组相比,OGD/R+si-STIM1组细胞STIM1、CD86、TNF-αmRNA表达水平及上清液中IL-1β含量均显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。同样地,与OGD/R组及OGD/R+si-Ctrl组相比,OGD/R+si-STIM1组细胞ERS相关蛋白ATF4、CHOP表达水平亦显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。此外,与OGD/R组及OGD/R+溶媒组相比,OGD/R+4-PBA组细胞中CD86表达水平、TNF-αmRNA表达水平及IL-1β含量均显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论STIM1通过调控ERS水平影响脑缺血再灌注损伤后小胶质/巨噬细胞的M1型活化。

黄芪甲苷通过促进小胶质细胞/巨噬细胞M2型极化抑制大鼠脑缺血后炎症反应

目的:研究黄芪甲苷对大鼠脑缺血后小胶质细胞/巨噬细胞M1/M2极化及炎症反应的影响。方法:将48只大鼠随机分为手术对照组、模型对照组和黄芪甲苷组。采用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞模型。黄芪甲苷组造模后即刻腹腔注射黄芪甲苷(40 mg/kg),随后1次/d,连续给药3 d。各组术后第1、3天采用改良的神经损伤严重程度评分(mNSS)和角试验进行神经功能评价;术后第3天采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑染料(TTC)染色检测脑梗死体积;实时逆转录PCR检测M1型小胶质细胞/巨噬细胞表面标志物CD86、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA表达,以及M2型小胶质细胞/巨噬细胞表面标志物CD206、精氨酸酶1(Arg-1)、类几丁质酶3样分子1/2(YM1/2)及抗炎因子IL-10、TGF-β的mRNA表达;免疫荧光双标记法检测脑缺血周边区CD16/32/Iba1和CD206/Iba1的表达。结果:与模型对照组比较,黄芪甲苷组mNSS分值降低、右转次数减少(P<0.05或P<0.01),脑梗死体积减小(P<0.01),M1型小胶质细胞/巨噬细胞标志物CD86、iNOS、TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA表达下调(均P<0.01),M2型小胶质细胞/巨噬细胞标志物CD206、Arg-1、YM1/2、IL-10和TGF-β的mRNA表达上调(均P<0.01),脑缺血区CD16/32^+/Iba1^+细胞数量减少(P<0.05),CD206^+/Iba1^+细胞数量增加(P<0.01)。结论:黄芪甲苷对大鼠脑缺血损伤有保护作用,可能与促进小胶质细胞/巨噬细胞从M1型向M2型转化、抑制炎症反应有关。

小胶质细胞/巨噬细胞的极化及在脑卒中修复中的作用

传统上,小胶质细胞/巨噬细胞激活在缺血性脑卒中修复中被认为起有害作用。然而,越来越多的证据表明,小胶质细胞/巨噬细胞激活对于减轻脑缺血后神经细胞凋亡,促进神经发生和促进功能恢复至关重要。目前研究认为,炎症微环境会极大地影响小胶质细胞/巨噬细胞的表型变化,从而使同一脑组织在受损的不同阶段具有不同的基因表达模式和生物功能。该文就小胶质细胞/巨噬细胞活化的机制及可能的潜在疗法进行综述。

壳聚糖对大鼠脊髓损伤后小胶质细胞/巨噬细胞的影响

目的观察应用壳聚糖治疗大鼠胸髓完全横断损伤后,损伤区及其周围小胶质细胞/巨噬细胞的变化情况。方法35只成年雌性Wistar大鼠随机分成假手术组(n=5)、单纯损伤组(n=15)、壳聚糖治疗组(n=15)。分别于术后1d、3d、7d、2周和4周通过免疫组织化学方法,检测小胶质细胞/巨噬细胞的变化情况。结果单纯损伤后小胶质细胞/巨噬细胞在1d时即活化增殖,3d时达高峰,之后迅速减少;应用壳聚糖治疗后,7d达高峰,2～4周时仍有OX42阳性小胶质细胞/巨噬细胞存在。结论壳聚糖可更长时间地募集小胶质细胞/巨噬细胞到损伤区及其周围脊髓组织。

淫羊藿总黄酮通过抑制小胶质细胞/巨噬细胞介导的氧化应激反应促进髓鞘再生

目的:探讨淫羊藿总黄酮(TFE)通过抑制小胶质细胞氧化应激(OS)促进髓鞘再生的作用及机制。方法:BV2、原代小胶质细胞和骨髓来源的巨噬细胞(BMDMs)以1×106个/ml接种于6孔板,贴壁后加入LPS、TFE 37°C孵育24 h;C57BL/6小鼠用含0.2%CPZ饲料喂养6周诱导脱髓鞘模型,4周末TFE治疗组小鼠腹腔注射TFE 2周。结果:TFE可浓度依赖性地清除氧自由基,降低NO、H2O2、MDA等氧化中间产物含量,上调抗氧化酶SOD、CAT、GSH-Px表达,激活Nrf2/HO-1信号通路,增强抗氧化能力,通过抑制OS上调少突胶质前体细胞CNPase表达,促进髓鞘再生。结论:TFE可通过抑制小胶质细胞OS激活Nrf2/HO-1信号通路,促进髓鞘再生。

利拉鲁肽通过NOX2调控小胶质细胞/巨噬细胞极化改善糖尿病大鼠脑缺血损伤

目的观察利拉鲁肽(liraglutide)对局灶性脑缺血糖尿病大鼠缺血侧脑组织小胶质细胞/巨噬细胞极化及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase,NOX2)表达的影响。方法将75只大鼠按照随机数字表法分为脑缺血(CI)组、糖尿病脑缺血(DCI)组、胰岛素(Ins)组、利拉鲁肽(Lir)组和NOX2激动剂TBCA(tetrabromocinnamic acid)+利拉鲁肽(TBCA)组,每组15只。脑缺血后第3天行神经功能缺损评分;2,3,5-氯化三苯四氮唑((TTC))染色测脑梗死体积;免疫荧光双标染色检测小胶质细胞/巨噬细胞CD16/32、CD206与Iba1共标情况;Western blot检测NOX2、TNF-α、IL-1β、IL-10、TGF-β的蛋白表达。结果与DCI组相比,Lir组大鼠神经功能评分减少,脑梗死体积减小,同时M1型小胶质细胞/巨噬细胞Iba1^(+)/CD16/32^(+)细胞数减少,TNF-α、IL-1β、NOX2表达减少,而M2型小胶质细胞/巨噬细胞Iba1^(+)/CD206^(+)细胞数增多,IL-4、IL-10表达增多(P<0.05)。上述效应可被NOX2激动剂TBCA所逆转(P<0.05)。结论利拉鲁肽的神经保护作用可能与其抑制NOX2表达,同时促进小胶质细胞/巨噬细胞向M2型转换有关。

创伤性脑损伤和脂多糖引起小鼠小胶质细胞中Bcl2a1表达增加

目的:探索Bcl2a1在创伤性脑损伤(TBI)中的表达变化。方法:采用刀片划伤小鼠前额叶皮层的方法建立小鼠创伤性脑损伤模型,利用划痕及脂多糖(LPS)刺激建立原代小胶质细胞损伤模型。免疫荧光染色检测小鼠受损部位及受损的原代小胶质细胞不同时间点Bcl2a1蛋白及其与CD11b表达的变化。结果:在正常小鼠,Bcl2a1主要表达于神经元,小胶质细胞及巨噬细胞少量表达Bcl2a1。TBI后小鼠神经系统受损部位Bcl2a1^+/CD11b^+及Bcl2a1^+/i NOS^+小胶质细胞数目显著增加(P <0. 001),GFAP阳性的星形胶质细胞不表达Bcl2a1,而Bcl2a1^+/Neu N^+的神经元数量显著减少(P <0. 01)。在体外培养的小胶质细胞,LPS刺激可增加Bcl2a1^+/CD11b^+小胶质细胞数目(P <0. 01)。结论:机械性脑损伤和LPS介导的化学脑损伤均可引起Bcl2a1在小胶质细胞中的蛋白表达水平显著上调。

牡荆素对大鼠脑缺血再灌注损伤后的小胶质细胞/巨噬细胞M2极化的影响

目的:探究牡荆素(Vitexin)对大鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)后的小胶质细胞巨噬细胞M2极化的影响。方法:采用改良的Longa法建立大鼠右侧中动脉阻塞/再灌注(MCAO/R)模型。建模后,将大鼠分为假手术组(Sham,n=10)、MCAO/R组(n=12)、Vitexin组(n=12)和Vitexin+脂多糖(LPS)组(n=12)。Sham组和MCAO/R组腹腔注射2 m L 0.9%生理盐水,Vitexin组腹腔注射2 m L牡荆素溶液(3 mg/kg),Vitexin+LPS组腹腔注射1 m L牡荆素溶液(3 mg/kg)和1 m L LPS溶液(0.5 mg/kg)。1次/d,连续14 d。给药14 d后,根据Zea Longa 5分法对大鼠进行神经功能评分。通过2,3,5-三苯基四唑氯化物(TTC)法检测脑梗死体积。采用双重免疫荧光染色方法检测大脑缺血半影区CD16/32+/Iba1+、CD206+/Iba1+的共表达。通过qRT-PCR或Western blot检测大脑缺血半影区Toll样受体4(TLR4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-1β、IL-4、IL-10、核因子-κB(NF-κB)p65的mRNA或蛋白表达。使用商用试剂盒检测大脑缺血半影区丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量。结果:与MCAO/R组相比,Vitexin组神经功能评分降低,脑梗死体积降低,MDA水平降低,SOD和GSH-Px水平升高(P<0.05)。与MCAO/R组相比,Vitexin组CD16/32+/Iba1+的阳性细胞数量降低,CD206+/Iba1+的阳性细胞数量升高,TNF-α和IL-1β的mRNA水平降低,而IL-4和IL-10的mRNA水平升高(P<0.05)。与MCAO/R组相比,Vitexin组TLR4 mRNA和蛋白水平降低,细胞核NF-κB p65的蛋白表达水平降低(P<0.05)。然而,LPS给药逆转了牡荆素对上述指标的影响(P<0.05)。结论:牡荆素部分通过TLR4/NF-κB信号通路促进大鼠CIRI后小胶质细胞/巨噬细胞向M2表型极化,从而促进神经功能恢复。

miR-146a通过TLR4/NF-κB通路调节小胶质细胞/巨噬细胞极化对缺血性脑卒中的保护作用

目的 探讨微小RNA-146a(MicroRNA-146a, miR-146a)在缺血性脑卒中小胶质细胞/巨噬细胞极化中的作用及其潜在机制。方法 构建大脑中动脉闭塞(Middle cerebral artery occlusion, MCAO)模型,脑内注射阴性对照物(Negative control mimic, NC mimic)或miR-146a mimic;构建BV2小鼠小胶质细胞(BV2 mouse microglia, BV2)缺血缺氧(Oxygen glucose deprivation, OGD)模型,将NC mimic, miR-146a mimic转染至OGD处理的BV2细胞中,进行改良神经功能缺损评分(Modified neurological severity scores, mNSS)评估神经功能;2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride, TTC)染色检测脑梗死体积;实时荧光定量聚合酶链反应(Real time quantification polymerase chain reaction, RT-qPCR)检测脑组织及细胞中的miR-146a、单核细胞趋化蛋白1(Monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)、诱导型一氧化氮合酶(Inducible nitric oxide synthase, iNOS)、白细胞介素-10(Interleukin-10,IL-10)和精氨酸酶-1(Arginase-1,Arg1)mRNA水平;免疫荧光染色检测小胶质细胞M1/M2极化标志物;蛋白质免疫印迹(Western blot)检测细胞中Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/核转录因子κB(Nuclear transciption factor kappa B,NF-κB)通路蛋白的表达水平;双荧光素酶报告基因检测miR-146a与肿瘤坏死因子受体相关因子6(TNF receptor associated factor 6,TRAF6)的靶向关系。结果 与假手术(Sham)组比较,MCAO组大鼠脑组织中miR-146a表达水平显著降低,mNSS评分和脑梗死体积显著升高,CD16+Iba-1+细胞和CD206+Iba-1+细胞数量均增加,M1标志物MCP-1,iNOS和M2标志物IL-10,Arginase-1 mRNA水平均显著升高,而过表达miR-146a后mNSS评分和脑梗死体积显著降低,M1极化标志物水平降低,M2极化标志物水平升高(P<0.05)。与对照(Control)组比较,OGD组BV2小胶质细胞中的miR-146a表达水平显著降低,集群分化因子16(Cluster of differentiation 16,CD16)+离子钙接头蛋白分子-1(Ionized calcium bindingad aptormolecule-1,Iba-1)+和集群分化因子206(Cluster of differentiation 206,CD206)+Iba-1+细胞数量均增加,MCP-1,iNOS,IL-10和Arginase-1 mRNA水平均显著升高,TLR4/NF-κB通路相关蛋白表达水平均显著升高;与OGD+NC mimic组比较,OGD+miR-146a mimic组细胞中的miR-146a表达水平显著升高,M1极化标志物水平降低,M2极化标志物水平升高,TLR4/NF-κB通路相关蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论 miR-146a通过TLR4/NF-κB通路来促进缺血性脑卒中后M2极化,从而发挥神经保护作用。

人源脐带间充质干细胞对脑缺血再灌注小鼠神经功能及神经炎症的影响

目的探究人源脐带间充质干细胞对脑缺血再灌注损伤小鼠神经功能及神经炎症的影响。方法将96只野生型C57BL/6小鼠随机分为假手术组、磷酸盐缓冲液(PBS)处理组、WJ-MSCs细胞移植组,每组32只。PBS处理组和细胞移植组小鼠通过线栓法构建大脑中动脉阻塞再灌注模型;术后24 h,通过脑立体定位技术注射细胞悬液或PBS溶液。每组取6只小鼠,干细胞移植后对小鼠腹腔注射BrdU溶液,持续5 d。于术前及术后1、6、12、24 d对各组小鼠进行改良神经功能损伤评分;术后6 d时,采用神经元标志物NeuN免疫荧光单标记染色技术检测缺血侧大脑梗死灶及梗死灶周围区皮质神经元的变性丢失情况;采用RT-qPCR技术检测各组小鼠缺血侧大脑半球炎症因子的表达量;采用小胶质细胞/巨噬细胞标志物Iba1及增殖标记物BrdU免疫荧光双标记染色技术检测小胶质细胞/巨噬细胞的活化和增殖情况。结果与PBS处理组相比,WJ-MSCs细胞移植组小鼠神经功能显著改善(P<0.01),且位于缺血侧大脑梗死灶及梗死灶周围区皮质的存活神经元数目显著增多(P<0.01)。与PBS处理组相比,WJ-MSCs细胞移植组小鼠缺血侧脑组织的抗炎因子表达量升高,促炎因子表达量下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。与PBS处理组相比,WJ-MSCs细胞移植组小鼠缺血侧梗死灶和梗死灶周围区皮质小胶质细胞/巨噬细胞的活化显著抑制(P<0.05),且小胶质细胞/巨噬细胞的增殖明显降低(P<0.05)。结论人源脐带间充质干细胞可抑制神经炎症反应并改善脑缺血再灌注小鼠的神经功能。

利拉鲁肽通过核因子E2相关因子2/血红素加氧酶1信号通路调控小胶质细胞/巨噬细胞极化改善糖尿病大鼠脑缺血损伤的研究

目的观察利拉鲁肽对局灶性脑缺血DM大鼠脑组织小胶质细胞/巨噬细胞极化及血红素加氧酶1(HO-1)表达的影响。方法75只大鼠随机分为脑缺血组(CI组)、DM脑缺血组(DCI组)、胰岛素治疗组(Ins组)、利拉鲁肽治疗组(Lir组)和HO-1抑制剂锡原卟啉(SnPPIX)+利拉鲁肽治疗组(SnP组),每组各15只。脑缺血后第3天行神经功能缺损评分,2,3,5-氯化三苯四氮唑染色测脑梗死体积,免疫荧光双标染色检测小胶质细胞/巨噬细胞CD16/32、CD206与Iba1共标情况,RT-PCR检测TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-10及HO-1 mRNA表达。结果与DCI组比较,Lir组神经功能评分、脑梗死体积、小胶质细胞/巨噬细胞M1型CD16/32/Iba1阳性细胞数、TNF-αmRNA、IL-1βmRNA表达降低(P<0.05),小胶质细胞/巨噬细胞M2型CD206/Iba1阳性细胞数、IL-4 mRNA、IL-10 mRNA、HO-1 mRNA表达升高(P<0.05),上述效应可被HO-1选择性抑制剂SnPPIX逆转。结论利拉鲁肽神经保护作用可激活核因子E2相关因子2/HO-1信号通路,促进小胶质细胞/巨噬细胞向M2型转换。

小胶质细胞/巨噬细胞极化对糖尿病合并缺血性脑损伤影响的研究进展

糖尿病是脑卒中的主要危险因素,糖尿病脑缺血的患者住院时间更长,长期残疾风险更高且预后不良。小胶质细胞是脑内驻留的巨噬细胞,脑损伤后会发生表型和功能改变,对脑组织有损害和修复作用。小胶质细胞/巨噬细胞表型转变在糖尿病合并缺血性脑损伤中发挥重要作用。本文针对小胶质细胞/巨噬细胞极化与糖尿病合并缺血性脑损伤的研究进展作一综述。